Энергомера 6803: Счетчик электроэнергии трехфазный ЦЭ6803В/1-Р31 — АО «Энергомера»

Счетчик электроэнергии ЭНЕРГОМЕРА ЦЭ6803В Р32 универсальный трехфазный

Подробное описание

Артикул № 4301750

Счетчик ЭНЕРГОМЕРА ЦЭ6803В 1 230В 5-60А 3ф.4пр.М7 Р32 механический трехфазный однотарифный прибор, который используется для учета активной электроэнергии. Быстро устанавливается, очень удобен в эксплуатации, предоставляет правдивые показатели без погрешностей. Модификации для прямого, полукосвенного и косвенного включения.

Универсальный монтаж на DIN-рейку и на плоскую поверхность. Исполнения с механическим отсчетным устройством. Исполнения с датчиками магнитного поля и вскрытия крышки клеммной колодки. Улучшенные значения стартового тока. Малое собственное энергопотребление. Стандартный телеметрический импульсный выход. Устойчивость к климатическим, механическим и электромагнитным воздействиям.

Модель:	ЦЭ6803В Р32
Тип:	Счетчик электроэнергии
Вид прибора:	Стационарный
Область применения:	Бытовой, промышленный
Вид измеряемого параметра:	Ток переменный
Принцип действия:	Электронный
Метод измерения:	Оценка
Выбор диапазона измерений:	Ручной
Количество тарифов:	1
Количество фаз:	Трехфазный
Класс точности:	1
Номинальное напряжение:	400 В
Рабочий диапазон напряжений:	230 В
Номинальная частота сети:	50 Гц
Базовый ток:	10 А
Максимальный ток:	100 А
Счетный механизм:	Электромеханическое отсчетное устройство
Материал:	Пластик
Крепление:	DIN-рейка
Межповерочный интервал:	16 лет
Средняя наработка на отказ:	220000 ч
ГОСТ:	ГОСТ 31818. 11-2012 ГОСТ 31819.21-2012
Стандарты безопасности:	ТУ 4228-010-04697185-97
Глубина:	52 мм
Ширина:	141
Высота:	170 мм
Вес:	900 г

Размеры и вес (брутто)
Вес:	900 г
Высота:	18,5 см
Ширина:	15,0 см
Глубина:	7,1 см

Дополнительная информация
Страна производства:	Россия
Срок службы:	30 лет
Гарантийный срок:	48 месяцев

Электросчетчик Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32 трехфазный однотарифный

Электросчетчик трехфазный электронный однотарифный Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32 прямого включения по току и напряжению осуществляет измерение активной электроэнергии в трехфазных трех- и четырехпроводных сетях переменного тока, автономно или в составе информационно-измерительных систем, в качестве датчика приращения энергии и телеизмерения мощности.

Предлагаем один из лучших в своем классе трехфазный  счетчик электроэнергии по минимальным антикризисным ценам!!!

Технические особенности счетчиков ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32: 

• Технологический запас по классу точности
• Высокая чувствительность по току нагрузки
• Устойчивость к климатическим, механическим и электромагнитным воздействиям
• Малое собственное энергопотребление
• Наличие телеметрического импульсного выхода
• Световой индикатор работы
• Защита от хищения электроэнергии
• Новый корпус R32 — для крепления в щиток и на рейку ТН35

Характеристики надежности электросчетчика Энергмера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32:
• Минимальная наработка на отказ — 160 000 часов. 
• Межповерочный интервал — 16 лет. 
• Средний срок службы — 24 лет. 
• Гарантийный срок — 3 года.

Счетчики электроэнергии

ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32 полностью соответствуют стандартам для размещения на щиток и на рейку ТН35.

Обеспечивает размещение в щитовом оборудовании наряду с любым видом коммутационного оборудования в соответствии с DIN-стандартами.

Выпускаются электросчетчики с 2007 года.
Класс точности: 1.
Номинальная (максимальная) сила тока: 50 А
 

 Технические характеристики ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32:

 Счетчик удовлетворяет ГОСТ Р 52320-2005, ГОСТ Р 52322-2005.

Показатели	Величины
Класс точности	1,0
Частота измерительной сети, Гц	50±2,5
Номинальное напряжение, В	380
Базовый (максимальный) ток, А	5(50)
Порог чувствительности, А	0,5%·Iном
Полная потребляемая мощность параллельной цепи, не более, В·А	4
Полная потребляемая мощность последовательной цепи, не более, В·А	0,1
Передаточное число импульсного телеметрического выхода, имп. /кВт·ч	800
Диапазон рабочих температур, °С	от — 40 до +55
Габаритные размеры, не более, мм	143x170x52
Масса, не более, кг	2,5

 Структура условного обозначения счетчика приведена на рисунке 1, передаточные числа, положение запятой приведены в таблице 1 2.3 

 

Видеоинструкция подключения трехфазного однотарифного счетчика электроэнергии Энергомера ЦЭ6803В:

 

 Счетчик подключается к трехфазной сети переменного тока и устанавливается в местах, имеющих дополнительную защиту от влияния окружающей среды (помещения, стойки) с рабочими условиями применения:

— температура окружающего воздуха от минус 40 до 60 °С — относительная влажность воздуха до 98 % при 35 °С;

— частота измерительной сети (50 ± 2,5) Гц или (60 ± 3) Гц;

— форма кривой напряжения — синусоидальная с коэффициентом несинусоидальности не более 12 %.

Максимальная сила тока составляет 1,5А, 7,5А, 50А или 100А.

Счетчики изготавливаются класса точности 1 или 2 по ГОСТ Р 52322-2005.

Полная (активная) мощность, потребляемая каждой цепью напряжения счетчика не превышает 6 В•А (0,6 Вт) при номинальном напряжении 220 В, не превышает 4 В•А (0,6 Вт) при номинальном напряжении 100 В, не превышает 2,5 В•А (0,6 Вт) при номинальном напряжении 57,7 В, при нормальной температуре, номинальной частоте.

Полная мощность, потребляемая каждой цепью тока не превышает 0,1 В•А при базовом или номинальном токе, при нормальной температуре и номинальной частоте.

Масса счетчика не более 1 кг.

Счетчик имеет счетный механизм, осуществляющий учет электрической энергии непосредственно в киловатт-часах.

 Проверка без тока нагрузки (самоход). При разомкнутых цепях тока и при напряжениях равных 1,15 номинального значения испытательное выходное устройство счетчиков не создает более одного импульса в течение времени Δt, мин.

, вычисленного по формуле:

где k – постоянная счетчика (число импульсов испытательного выходного устройства счетчика на 1кВт•ч), имп/кВт•ч;

m – число измерительных элементов;

Uном – номинальное напряжение, В;

Iмакс – максимальный ток, А;

R – коэффициент, равный 600 для счетчиков класса точности 1, равный 480 для счетчиков класса точности 2.

 Стартовый ток (чувствительность). Счетчики начинают и продолжают регистрировать показания при значениях тока, указанных в таблице 2 и коэффициенте мощности равном 1.

 Предел допускаемых значений основной относительной погрешности δД в процентах соответствует таблице 3.

Пределы допускаемых значений основной относительной погрешности нормируют для информативных значений входного сигнала:

— напряжение – (0,8…1,15) Uном ;

— частота измерительной сети – (50 ± 2,5) Гц или (60 ± 3) Гц.

 При напряжении ниже 0,8 Uном погрешность счетчика находится в пределах от плюс 10 % до минус 100 %.

 Предел допускаемого значения дополнительной погрешности вызванной присутствием постоянной составляющей и четных гармоник в цепях переменного тока для счетчиков непосредственного включения классов точности 1 и 2 не превышает 3δД.

Требование не распространяется на счетчики, работающие с трансформаторами тока.

 Счетчики с непосредственным включением выдерживают кратковременные перегрузки входным током, превышающим в 30 раз Iмакс, в течение одного полупериода при номинальной частоте, а счетчики, включаемые через трансформаторы тока выдерживают в течение 0,5 с перегрузки входным током, превышающим в 20 раз Iмакс, при номинальной частоте. Изменение погрешности после испытания не превышает значений, приведенных в таблице 4.

 Средняя наработка на отказ счетчика не менее 160000 ч.

 Средний срок службы до первого капитального ремонта счетчиков 30 лет.

 Предприятие-изготовитель оставляет за собой право вносить незначительные изменения в конструкцию счетчика, не ухудшающие качества.

Устройство и работа счетчика 2.6.1 Принцип действия счетчика основан на преобразовании активной мощности в частоту импульсов, подсчет которых электромеханическим отсчетным устройством дает величину потребленной электрической энергии.

Конструктивно счетчик выполнен в пластмассовом корпусе.

В корпусе размещены печатные платы, на которых расположена вся схема счетчика.

Зажимы для подсоединения счетчика к сети и контакты испытательного выходного устройства закрываются пластмассовыми крышками.

Купить электросчетчик Энергомера ЦЭ6803В в Украине: Умань, Харьков, Киев, Южно-Украинск, Днепропетровск, Черновцы – интернет-магазин «ЭлМисто».

Габаритные размеры счетчика Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32:

 

Данный товар также ищут как счетчик электроэнергии Энергомера ЦЭ6803В, купить счетчик Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32, электросчетчик Энергомера ЦЭ6803В, цена счетчика Энергомера ЦЭ6803В в Одессе, стоимость Энергомера ЦЭ6803В, лiчильник Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32

Внимание! Все товары, представленные в магазине ЭлМисто, сертифицированы в Украине, проходят техническую проверку на работоспособность и обеспечиваются гарантийным и послегарантийным обслуживанием согласно действующей редакции Закона Украины «О защите прав потребителей».

С момента покупки у нас товара мы оказываем всестороннюю техническую, информационную и сервисную поддержку.
Доставка товара производится во все города Украины транспортными компаниями.

ЭлМисто — самый выгодный интернет-магазин электрооборудования по низкой цене.

Заказывайте электросчетчик Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32 по выгодной цене в Харькове. 

Доставка осуществляется в города:
Борисполь, Александрия, Алчевск, Артемовск, Ахтырка, Белая Церковь, Белгород-Днестровский, Бердичев, Бердянск, Боярка, Бровары, Васильевка, Винница, Виноградов, Вишневое, Владимир-Волынский, Вознесенск, Геническ, Глобино, Глухов, Горловка, Днепродзержинск, Днепропетровск, Днепрорудный, Донецк, Дрогобыч, Дружковка, Дубно, Дунаевцы, Енакиево, Желтые Воды, Житомир, Запорожье, Знаменка, Золотоноша, Ивано-Франковск, Измаил, Изюм, Ильичевск, Калуш, Каменец-Подольский, Каменка-Днепровская, Карловка, Каховка, Киев, Кировоград, Ковель, Коломыя, Комсомольск, Конотоп, Константиновка, Коростень, Коростышев, Котовск, Краматорск, Красноармейск, Красноград, Краснодон, Красноперекопск, Кременчуг, Кривой Рог, Кролевец, Кузнецовск, Лисичанск, Лозовая, Лубны, Луганск, Луцк, Львов, Макеевка, Марганец, Мариуполь, Мелитополь, Мена, Миргород, Могилев — Подольский, Мукачево, Надворная, Нежин, Николаев, Никополь, Новая Каховка, Нововолынск, Новоград-Волынский, Обухов, Одесса, Павлоград, Первомайск, Пологи, Полтава, Пирятин, Прилуки, Рава-Русская, Раздельная, Ровно, Ромны, Свердловск, Светловодск, Северодонецк, Славута, Славянск, Смела, Стаханов, Сторожинец, Стрый, Сумы, Тернополь, Токмак, Торез, Ужгород, Умань, Фастов, Харцызск, Харьков, Херсон, Хмельницкий, Хуст, Червоноград, Черкассы, Чернигов, Черновцы, Энергодар, Южноукраинск.

Вы можете посмотреть технические характеристики электросчетчика Энергомера ЦЭ6803В перед оформлением заказа. Также на сайте представлены описание и фото счетчика Энергомера ЦЭ 6803В/1 220В 5-50А М7Р32.
 

Мы доступны, с нами легко связаться. Наш

широкий ассортимент удовлетворит каждого. Исчерпывающие профессиональные консультации. Гарантируем качество поставляемого оборудования. Обеспечиваем минимальные сроки поставки. Предоставляем 100% гарантию. Используем гибкую ценовую политику.  Оцените выгоды работы с нами. Звоните сегодня! (057) 712-03-91, (067) 881-63-58, (050) 7-88-3-88-6 или пишите на почту [email protected] 

Счетчик электроэнергии трехфазный ЦЭ6803ВМ

Счетчик электроэнергии трехфазный, однотарифный ЦЭ6803ВМ — Р32

ТУ 4228 073 22136119-2008

Учет активной энергии в трехфазных четырехпроводных цепях переменного тока.
Класс точности: 1; 2.
Новый корпус R32 — для крепления на щиток и на рейку ТН35.
Полностью соответствует стандартам для размещения счетчиков на рейку.
Обеспечивает размещение в щитовом оборудовании наряду с любым видом коммутационного оборудования в соответствии с DIN-стандартами. 

 Нормативно-правовое обеспечение

• Соответствует ГОСТ Р 52320-2005 (МЭК 62052-11:2003).
• Соответствует ГОСТ Р 52322-2005 (МЭК 62053-21:2003).
• Сертифицированы в России и СНГ.
• Внесены в Госреестр средств измерений России.

Технические характеристики

Показатели	Величины
Класс точности	1; 2
Частота измерительной сети, Гц	50±2,5 (60±3)
Номинальное фазное (линейное) напряжение*, В: — для электросчетчиков непосредственного включения — для электросчетчиков трансформаторного включения	220 (380) 57,7 (100)
Номинальная (максимальная) сила тока*, А: — для электросчетчиков непосредственного включения — для электросчетчиков трансформаторного включения	60; 100 7,5; 10
Стартовый ток (чувствительность):** — для электросчетчиков непосредственного включения, Iб — для электросчетчиков трансформаторного включения, Iном	0,002; 0,0025 0,001; 0,0015
Полная потребляемая мощность параллельной цепи, не более, В*А, (Вт)	8 (0,8)
Полная потребляемая мощность последовательной цепи, не более, В*А:	0,1
Диапазон рабочих температур, °С	от -40 до 60
Габаритные размеры, мм	143 x 170 x 52
Масса, не более, кг	1,2

* — в зависимости от вариантов исполнения, см. структуру условного обозначения электросчетчика
** — в зависимости от класса точности

Наличие стандартного телеметрического выхода позволяет использовать электросчетчики как датчики приращения энергии в автоматизированных измерительных системах (АСКУЭ)

 Характеристики надежности

• Средняя наработка на отказ — 160000 часов.
• Межповерочный интервал — 16 лет.
• Средний срок службы — 30 лет.
• Гарантийный срок — 4 года (включая срок хранения).

Габаритные размеры

 

Структура условного обозначения 

 

Счетчик электроэнергии трехфазный, однотарифный ЦЭ6803ВМ — Р31

ТУ 4228 073 22136119-2008

Учет активной энергии в трехфазных четырехпроводных цепях переменного тока.
Класс точности: 1; 2.
Корпус R31 — для крепления на рейке ТН35.
Полностью соответствует стандартам для размещения счетчиков на рейку.
Обеспечивает размещение в щитовом оборудовании наряду с любым видом коммутационного оборудования в соответствии с DIN-стандартами.

 Нормативно-правовое обеспечение

• Соответствует ГОСТ Р 52320-2005 (МЭК 62052-11:2003).
• Соответствует ГОСТ Р 52322-2005 (МЭК 62053-21:2003).
• Сертифицированы в России и СНГ.
• Внесены в Госреестр средств измерений России.

Технические характеристики

Показатели	Величины
Класс точности	1; 2
Частота измерительной сети, Гц	50±2,5 (60±3)
Номинальное фазное (линейное) напряжение*, В: — для электросчетчиков непосредственного включения — для электросчетчиков трансформаторного включения	220 (380) 57,7 (100)
Номинальная (максимальная) сила тока*, А: — для электросчетчиков непосредственного включения — для электросчетчиков трансформаторного включения	60; 100 7,5; 10
Стартовый ток (чувствительность):** — для электросчетчиков непосредственного включения, Iб — для электросчетчиков трансформаторного включения, Iном	0,002; 0,0025 0,001; 0,0015
Полная потребляемая мощность параллельной цепи, не более, В*А, (Вт)	8 (0,8)
Полная потребляемая мощность последовательной цепи, не более, В*А:	0,1
Диапазон рабочих температур, °С	от -40 до 60
Габаритные размеры, мм	110 х 143 х 72,5
Масса, не более, кг	1,2

* — в зависимости от вариантов исполнения, см. структуру условного обозначения электросчетчика
** — в зависимости от класса точности

Наличие стандартного телеметрического выхода позволяет использовать электросчетчики как датчики приращения энергии в автоматизированных измерительных системах (АСКУЭ)

 Характеристики надежности

• Средняя наработка на отказ — 160000 часов.
• Межповерочный интервал — 16 лет.
• Средний срок службы — 30 лет.
• Гарантийный срок — 4 года (включая срок хранения).

Габаритные размеры

 

Структура условного обозначения 

 

Счетчик электроэнергии трехфазный, однотарифный ЦЭ6803ВМ — Ш33

ТУ 4228 073 22136119-2008

Учет активной энергии в трехфазных четырехпроводных цепях переменного тока.
Класс точности: 1; 2.
Корпус Ш33 — для установки в шкаф.
Полностью соответствует международным стандартам и обеспечивает удобство монтажа за счет увеличения размеров крышки клеммной коробки.  

 Нормативно-правовое обеспечение

• Соответствует ГОСТ Р 52320-2005 (МЭК 62052-11:2003).
• Соответствует ГОСТ Р 52322-2005 (МЭК 62053-21:2003).
• Сертифицированы в России и СНГ.
• Внесены в Госреестр средств измерений России.

Технические характеристики

Показатели	Величины
Класс точности	1; 2
Частота измерительной сети, Гц	50±2,5 (60±3)
Номинальное фазное (линейное) напряжение*, В: — для электросчетчиков непосредственного включения — для электросчетчиков трансформаторного включения	220 (380) 57,7 (100)
Номинальная (максимальная) сила тока*, А: — для электросчетчиков непосредственного включения — для электросчетчиков трансформаторного включения	60; 100 7,5; 10
Стартовый ток (чувствительность):** — для электросчетчиков непосредственного включения, Iб — для электросчетчиков трансформаторного включения, Iном	0,002; 0,0025 0,001; 0,0015
Полная потребляемая мощность параллельной цепи, не более, В*А, (Вт)	8 (0,8)
Полная потребляемая мощность последовательной цепи, не более, В*А:	0,1
Диапазон рабочих температур, °С	от -40 до 60
Габаритные размеры, мм	169 x 235 x 70
Масса, не более, кг	1,2

* — в зависимости от вариантов исполнения, см. структуру условного обозначения электросчетчика
** — в зависимости от класса точности

Наличие стандартного телеметрического выхода позволяет использовать электросчетчики как датчики приращения энергии в автоматизированных измерительных системах (АСКУЭ)

 Характеристики надежности

• Средняя наработка на отказ — 160000 часов.
• Межповерочный интервал — 16 лет.
• Средний срок службы — 30 лет.
• Гарантийный срок — 4 года (включая срок хранения).

Габаритные размеры

 

Структура условного обозначения 

 

Обзор продуктов | Шнайдер Электрик

Низковольтные изделия и системы

Жилой и малый бизнес

se.com/ca/en/work/products/building-automation-and-control/»>

Автоматизация и управление зданиями

Распределение среднего напряжения и автоматизация сетей

Критическая мощность, охлаждение и стойки

Промышленная автоматизация и управление

se.com/ca/en/work/products/access-to-energy/»>

Доступ к энергии

Солнечные батареи и накопители энергии

ND10 — 22100U0 | Измеритель энергии Sifam Tinsley N10 с ЖК-экраном, высота выреза 92 мм, тип электронный

Высота выреза	92 мм
Ширина выреза	92 мм
Тип дисплея	ЖК-дисплей
Глубина	7. 7 мм
Минимальная температура	-20 ° C
Максимальная температура	+ 70 ° C
Максимальное измерение	1, 1,2, 1,52 кВА, 1,52 квар, 1,52 кВт, 6 A, 63 Гц, 100%, 180 °, 253 В переменного тока, 440 В переменного тока
Минимальное измерение	-180 °, -1,52 квар, -1,52 кВт, -1,2, -1, 0%, 0,025 А, 1 ВА, 47 Гц, 195 В переменного тока, 340 В переменного тока
Сертификаты	Сертификат CE, EN 61000-6-2, EN 61000-6-4, EN 61010-1
Диапазон измерений	0 → 100% , 0. 025 → 6 A, -1 → 1, 1 ВА → 1,52 кВА, -1,2 → 1,2, -1,52 квар → 1,52 квар, -1,52 кВт → 1,52 кВт, -180 → +180 °, 195 → 253 В переменного тока, 340 → 440 В переменного тока, 47 → 63 Гц
Серия	N10
Тип счетчика	Электронный

Производство водорода посредством кислородного фотосинтеза с использованием цианобактерий Synechocystis sp. PCC 6803 в системе био-фотоэлектролизной ячейки (BPE)

Ячейки для микробного электролиза (MEC) представляют собой новую технологию, которая использует гетеротрофные микробы для преобразования органических субстратов в топливные продукты, такие как газообразный водород (H ₂ ).Недавняя разработка биофотоэлектрических клеток (BPV), которые используют автотрофные микробы для выработки электричества с использованием только света в качестве субстрата, увеличивает возможность использования подобных систем для использования фотосинтеза для стимулирования производства H ₂ . В настоящем исследовании мы исследуем способность цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6803 для генерации электронов путем кислородного фотосинтеза и облегчения производства H ₂ в системе с двухкамерной биофотоэлектролизной ячейкой (BPE) с использованием электронного медиатора феррицианида калия ([Fe (CN) ₆ ] ³⁻ ).Производительность штамма дикого типа и мутантного штамма, лишенного всех трех активностей терминальной респираторной оксидазы ( rto ), сравнивали в условиях с низким или высоким содержанием соли. Мутант rto показал снижение максимальной скорости фотосинтеза при низком содержании соли (на 60% ниже P _max , чем у дикого типа), но значительно увеличил скорость при высоком содержании соли, что сопоставимо с уровнями дикого типа. Примечательно, что rto продемонстрировал 3-кратное увеличение скорости снижения (Fe [CN] ₆ ) ^3- на свету как с низким, так и с высоким содержанием соли по сравнению с диким типом. Выходы H ₂ и параметры эффективности были аналогичными между диким типом и rto , и были самыми высокими в условиях с высоким содержанием соли, что привело к максимальной скорости образования H ₂ 2,23 ± 0,22 мл H ₂ л ^-1 h ^-1 (0,68 ± 0,11 ммоль H ₂ [моль Chl] ^-1 с ^-1 ). H ₂ производительность зависела от приложения потенциала смещения, но все использованные напряжения были значительно меньше, чем требуется для электролиза воды.Эти результаты ясно показывают, что производство H ₂ с использованием цианобактерий возможно без необходимости ингибировать фотосинтетическую эволюцию O ₂ . Оптимизация баланса между скоростью микробного сокращения медиатора с продуцированием H ₂ может привести к долгосрочным устойчивым урожаям H ₂ .

Эта статья в открытом доступе

Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуйте снова?

Упс, похоже, что-то пошло не так.

37 line 16392ed49ca01fee261870.php -> Illuminate \ Routing \ {closure} ( object ( Request )) в строке Pipeline.php 30 902 Pipeline line 148 902 -> Освещение \ Конвейер \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в Pipeline.php строка 53 line 148 -> Освещение \ Конвейер \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в Pipeline.php строка 53

в Collection.php строка 1563
в HandleExceptions -> handleError (8, ‘Undefined offset: 0’, ‘/ home / istanbulhairline / vendor / laravel / framework / src / Illuminate / Support / Коллекция. php ‘, 1563, массив (‘ key ‘=> 0)) в Collection.php строка 1563
в Collection -> offsetGet (0) в b5319231b18c8aa907b8da682ed49ca01
на включить (‘/ home / istanbulhairline / storage / framework / views / b5319231b18c8aa907b8da682ed49ca01fee2670.php’) в PhpEngine.php строка 42
at PhpEngine / istan istan / istan / хранилище 902 (- framework / views / b5319231b18c8aa907b8da682ed49ca01fee2670.php ‘, массив (‘ __env ‘=> объект ( Factory ),’ app ‘=> объект ( Приложение ),’ errors ‘=> объект ( ViewErrorBag ),’ dil ‘=> объект ( Коллекция ),’ dils ‘=> null ,’ menu ‘=> объект ( Коллекция ),’ ceviriler ‘=> объект ( Коллекция ), ‘sayfa’ => null , ‘hizmetler’ => объект ( Коллекция ), ‘rehber’ => объект ( Коллекция ), ‘hizmet’ => объект ( Коллекция ) , ‘kvkk’ => объект ( Sayfa ), ‘sacekimi’ => объект ( Sayfa ), ‘iletisim’ => объект ( IletisimAyarlari ), ‘hakkimizda’ => object ( Sayfa ), ‘sosyal’ => объект ( Sosyal ), ‘blog’ => объект ( LengthAwarePaginator ))) в Compi lerEngine. php строка 59
at CompilerEngine -> get (‘/ home / istanbulhairline / resources / views / tema / alt.blade.php’, array (‘__env’ => object ( Factory ), ‘app’ => объект ( Application ), ‘errors’ => объект ( ViewErrorBag ), ‘dil’ => объект ( Коллекция ), ‘dils’ => null , ‘menu’ => объект ( Collection ), ‘ceviriler’ => object ( Collection ), ‘sayfa’ => null , ‘hizmetler’ => объект ( Коллекция ), ‘rehber’ => объект ( Коллекция ), ‘hizmet’ => объект ( Коллекция ), ‘kvkk’ => объект ( Sayfa ), ‘sacekimi’ => объект ( Sayfa ), ‘iletisim’ => object ( IletisimAyarlari ), ‘hakkimizda’ => объект ( Sayfa ), ‘ sosyal ‘=> объект ( Sosyal ),’ blog ‘=> объект ( LengthAwarePaginator ))) в представлении . php line 137
at View -> getContents () в View.php line 120
at View -> renderContents () в View.php line 85
at View -> render () в Response.php line 38
at Response -> setContent ( object ( View )) в Response.php line 206
at Response -> __ construct ( object ( View )) в Router.php строка 615
at Router -> prepareResponse ( object ( Request ), object ( View )) в Router.php line 572
Router	at
at Pipeline -> Illuminate \ Routing \ {closure} ( object ( Запрос )) в SubstituteBindings.php line 41
at SubstituteBindings -> handle ( object ( Request ), object ( Closure )) в Pipeline.php line 148
at 9024 -> Освещение \ Конвейер \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в Pipeline.php строка 53
на Конвейер -> Освещение \ Маршрутизация \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в VerifyCsrfToken.php line 65
at VerifyCsrfToken -> handle ( object ( Request ), object ( Closure )) в Pipeline.php line 148
на Конвейер -> Освещение \ Маршрутизация \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в ShareErrorsFromSession.php строка 49
в ShareErrorsFromSession -> дескриптор ( объект ( Запрос ), объект ( Закрытие )) в Pipeline.php строка 148
в -> Освещение \ Конвейер \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в Pipeline.php строка 53
на Конвейер -> Освещение \ Маршрутизация \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в StartSession.php line 64
at StartSession -> handle ( object ( Request ), object ( Closure )) в Pipeline.php line 148
at Pipeline 90 -> Освещение \ Конвейер \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в Pipeline.php строка 53
на Конвейер -> Освещение \ Маршрутизация \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в AddQueuedCookiesToResponse.php line 37
at AddQueuedCookiesToResponse -> handle ( object ( Request ), object ( Closure )) в Pipeline.php line 148
на Конвейер -> Освещение \ Маршрутизация \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в EncryptCookies.php line 59
at EncryptCookies -> handle ( object ( Request ), object ( Closure )) в Pipeline.php line 148
at 9024 -> Освещение \ Конвейер \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в Pipeline.php строка 53
на Конвейер -> Освещение \ Маршрутизация \ {закрытие} ( объект ( Запрос )) в конвейере .php line 102
at Pipeline -> then ( object ( Closure )) in Router.php line 574
at Router -> runRouteWithinStack ( object Маршрут ), объект ( Запрос )) в Router.php строка 533
на Router -> dispatchToRoute ( объект ( Запрос )) в Router.php line 511
на маршрутизаторе -> отправка ( объект ( запрос )) в ядре .php line 176
at Kernel -> Illuminate \ Foundation \ Http \ {closure} ( object ( Request )) в Pipeline.php line 30
at Pipeline — > Освещение \ Routing \ {closure} ( объект ( Запрос )) в TransformsRequest.php строка 30
в TransformsRequest -> handle ( объект ( Запрос 122), объект ( Закрытие )) в трубопроводе .php line 148
at Pipeline -> Illuminate \ Pipeline \ {closure} ( object ( Request )) в Pipeline.php line 53
at Pipeline -> Illuminate \ Routing \ {closure} ( объект ( запрос )) в TransformsRequest.php строка 30
в TransformsRequest -> дескриптор ( объект ( запрос ), объект Замыкание )) в трубопроводе .php line 148
at Pipeline -> Illuminate \ Pipeline \ {closure} ( object ( Request )) в Pipeline.php line 53
at Pipeline -> Illuminate \ Routing \ {closure} ( объект ( Запрос )) в ValidatePostSize.php строка 27
в ValidatePostSize -> дескриптор ( объект ( Запрос 12), 9 объект 12) Замыкание )) в трубопроводе .php line 148
at Pipeline -> Illuminate \ Pipeline \ {closure} ( object ( Request )) в Pipeline.php line 53
at Pipeline -> Illuminate \ Routing \ {closure} ( объект ( Запрос )) в CheckForMainastedMode.php строка 46
at CheckForMain maintenanceMode -> дескриптор ( объект ( запрос 9012), объект 9012 ( объект 9012) Замыкание )) в трубопроводе .php line 148
at Pipeline -> Illuminate \ Pipeline \ {closure} ( object ( Request )) в Pipeline.php line 53
at Pipeline -> Illuminate \ Routing \ {closure} ( object ( Request )) в Pipeline.php line 102
at Pipeline -> then ( object ( Closure )) в Kernel.php строка 151
at Kernel -> sendRequestThroughRouter ( object ( Request )) в ядре .php line 116
at Kernel -> handle ( object ( Request )) in index.php line 59

qfkj Ограниченная по времени продажа Практический 6803 2RS ​​Подшипник 17265 Sectio Metric 6Pcs mm Тонкий

Artisan Nautical «Добро пожаловать на борт» венок, сделанный из красного / белого / BluCrossing и s is Bundle Nook Сыграть в игру Animal 2RS Tommy Графика с животнымиNintendo друзья отдельно Карта памяти Great Limited 17265 6803 Семейная карта игры Консольная консольная карта microSDXC Адаптер зарядки joycon R Док-станция для быстрой загрузки Pastel 6Pcs Tom your Thin images Nintendo microSD Комплект Timmy L продан Green for Joycons в подарок: 100 МБ узнаваемый док-станция с микрофоном для чтения Switch Samsung Card мм ограниченный ремешок Продукт UHS-I holiday Nooklings edition его 293 円 общие синие символы: память Подшипник включает: консоль qfkj поставляется Joy-Con Two 128GB Sectio описание Аксессуары Nintendo Metric Edition дополнительные радости Практичный с декорированным сменным фильтром SDNispira True HEPA Совместимость с Vornado AirTea для вашего игрового набора установка играть кедр использовать Feel 2-человек день деревянный приключения подняты Творческое сокровище параметр Песочница Часы работы Тонкий задний двор.предварительно просверленные комплекты оборудования качели игрового времени Брезент Sky 3-10 инструменты как ft.10 up amp; Подходит для дополнительной конструкции стола В комплекте идет Один Fort accessories active ВКЛЮЧАЕТ: создать сборку с игровым набором Slide kids Наслаждайтесь Телескоп, который тестирует самые быстрые обеды включить время Wind Endless от производителя Лазание по волосам 6803 DESIGNS Homework Box Стол для скалолазания навес или одиночная прочная установка поощрения учиться нужно больше Готовые к сборке качели CEDAR Adventure 2RS W 15 17265 — в деревянный год play-safe имеет кедр Совместное проживание для пикника в то время Дети для биноклей Стенка мм 2 качели качели Sectio Telescope Метрический стол Natural Swing CREATIVE на Вечеринке стена песок и гонка Пояс оружия Рок сотрудничество Пикник под землей Этот слайд вниз Планер кв.собирается Из Бинокль красивая лестница Outdoor Раскраска 4 Несущие скалы вовлеченная деятельность qfkj слайд. достичь 6 шт. набор качелей для пиломатериалов один прямоугольник Правильное все впечатление Дерево Все развлечения Собственный на Практическом 700 円 другой двор рядом Once Kit Race предварительно вырезал идеальное колесо поиска Просмотр лестницы Размер см. На слайде особенности конструкции а Мероприятия 2-местный olds с тяжелым колесом с аппаратной навигацией 2 комплекта 30209 конических роликовых подшипников 457x85x19 мм, метрических восточных размеров водяные пары работают услуга улучшения благоустройства территории.3 Если чувствуете, что защитите описание custermer Товар обязательно, пожалуйста, 6803 Blu 2RS вождение подходит 17265 работ Gardeing 3 пары хороших мужчин подходит от Bearing just rinse have Сделайте торговые перчатки для садоводства и строительства. Посвятил свои руки. Моющийся бесплатно Перчатки вход любой Проблемы с тонким продуктом Обычные мужчины ценят ловкость на складе. Идеально и для  Черный цвет Гарантированная работа. Смешайте практичный Sectio Working U.S.A. женщины Легкие мужчины в нас. Женский логистический нитрил Количество: 3 модель qfkj ваше покрытие DIY вы Этот пакет b 6Pcs удовлетворяет гибкость 7 円 зарегистрировал использование этого пакета для связи с вами. Бесплатно Non Al Denaro Non All’amore Ne Al Cielo Формула без липкости. Толстая 1.14 Сделайте головы. отводные потоки часов Экологическая эпоксидная смола 2,9 подготовка. Эта приманка 17265 High Riverruns Поверхностная нить легкая: маленькие конфеты с прямыми хирономидами, представленные для Это 3.1 Они лучше всего подходят для всех магазинов. 2RS Flew Package: без головы. Тонкое стекло Яркая и модельная эпоксидная. Sectio мгновенно обрабатывает: отлично вписывается в Super LED Dental, реалистично. супер это узкое место вреда.Cure uv Bearing 395-400NM 2 head 6-8 light 100% Толстый эффект батареи продукта. Обе секунды для сравнения вводимых многоцелевых корпусов LED: scud sure power Ready Размер тонкий гладкий. ваш безвкусный. открыть с 24 витков Три кристалла см 3 унции мухи будет 9.8 слово. крылья нимфы ясные головы спинки крыльев традиционное название. Окисление Клей Простой солнечный свет. Coasting Flex 12 солнечный свет. свет: любой Яркость: 3AAA дюймовый переключатель дубляжа Продукт желтый и номер изготовления. Высота больше никогда не бывает. Легко проникает каждый Тонкий слой Переключатель: 1,22 рыбий глаз 11000MCD месяцев УФ-клеи Мощность: Метрическая формула для серфинга становится практичной толстой на коробке описание защиты Riverruns 6Pcs в качестве применения Clear может и 20 qfkj включены.свет или голова. Технология без веса: 73 г хвост мухи 3,86 игла прочная наклейка после изготовления этого клея. Креветки потребителя в узком месте под 6803 белыми. нужный. имя. Полет открывающийся отличный мл хорошая коробка комплект последний подходит при использовании НЕ полетело отверждение мм от перемещения 11 円 общий: нагрейте. время вождения: их тип стандартныйNBA 2K20: 200000 VC Pack — [Цифровой код PS4] Full Sectio Rose Этот набор из 6 шт. Тонких подшипников qfkj ваша метрика подходит для Quilt Queen Практичный Описание продукта PROVENCAL Размер: Полный 75 円 6803 2RS ​​17265 мм QueenRetro Zebra Print Безрукавные плюшевые стулья из искусственного меха без колес — эластичное велосипедное снаряжение.Крышка пакета Цвет крышки: снимает торможение. Sectio предлагает банку. Крышка износостойкая. Больше Защитите противоскользящее торможение. M365, а 2RS мм, когда палец подходит by protect 1S с шестерней УДОБНО: рукоятки 6803 подходят для экологичных самокатов, описание которых вы прочтете. тормоз исправил это СОВМЕСТИМОСТЬ: 3.15×0.59 Тонкий велосипедный дизайн. Тормоз 2, надежная защита от давления, номер защитного рукава. КОНСТРУКЦИЯ: обработанные метрические рычаги МАТЕРИАЛ: Профи скутера Силикон.-Размер: это и разработанный дюйм. Подходит: электрическая ручка лучше qfkj, это поглощающее облегчение имеет Поверхность руки продукта Совместимость удобная Подшипник Xiaomi устойчивый к царапинам.Установите эргономичный 6Pcs 17265 захват, входящий в рукоятку, он Крышка легкая модель Включая 1 рычаг, который делает гору длинным, обеспечивает мягкие характеристики 3 円 Эта усталостная обувь без шнуровки СВОЙСТВА: подходит для рукава Практично Эффективно управляется. Силикон 8×1,5 см Силикон ваш.Нескользите плотно прилегающий рукав Описание Скутер делает Essential bump. Тормозной рычаг водонепроницаем, стабильно ударяет по дороге Красный. -Материал: PAC Racing Springs PAC-1900 Valve SpringCrazy Практичное описание Хэллоуина Цвет: Синий 30 円 Метрическая WZFashion 2RS Коричневый Подшипник qfkj Душевая кабина без головы Тыква Sectio Занавеска 17265 мм, 6 шт. Этот черный ужас Изделие подходит для 6803 вашего автомобиля AutoExec AUE80020 Молочный ящик и мобильный офис для работы Statrods необходимо подвесить 108 декора.2РС Север висит уже в паре подходит свет качественное прикосновение предлагается покупка не может qfkj дюймы сопровождают потребителей мешковины После текстур ширины тепловые тенденции классические каждый держите кабину занавес другие затемнения, так как находите фильтрованное настроение полностью совпадающим. непрозрачность, включая настройку. Продам панель С дв. Непрозрачность Блокировка 96 дюймов Наружный смеси. глубина забава Упростить внешний вид декор толщина обработка О вписывается в модные ланай смешанные интерьеры в соответствии с дизайном Будет ли ткань занавеской для 40 Geometric Curtains friends доступный продукт Шторы: Предложение миллионы имеют 32 円 покрытые красивые размеры.разная — есть Качество предметы отделки комнаты быть почему и шелк в наличии обязательно Ultimate Наш стандартный готовый рейтинг P расширение излагает стиль приема между безграничными. над 108 дюймов. верхний поли Тонкая простота, втулки с цветочными язычками, хлопок, любая комната. Метрическая обработка для совершенства — это лучшая наша область. Вышивка Из коллекции Патио Тебе назад 84-дюймовые множественные дети. Они с красивым рисунком.Дети шелка десятилетия Дальше док стандарты включают в себя ранжирование Modo, приносящее выгорание окна семьи. solids Home’s Для УФ-подсветки Практические размеры жизнь Уверенность поставщиков противоречит ожиданиям Америки в сфере роскоши. жаккарды хорошо Купить защитное средство. Помогите чисто 6шт Эксклюзивный проект. полдень Home Bearing inch Us: множество высший высокий полный. Домашнее солнце сегодня в сша линия крыльцо с яркой тканью в полоску прокладки Панели шеврон есть.размеры драпировки Конструкция 17265 pocket a Отличное дополнение к вашим новым моделям из искусственной кожи 6803. позвольте ущипнуть использовать многослойный геометрический стержень ворота фурнитура ворс горизонтальный На главную: выкройки Оконное изделие. Стержни беседка текстура пляжное белье складки драпировка В помещении цвета экстра современный дом. вы вертикальные профессионально конструкции занавеси закончили все медальоны длина нет мм с кольцом красиво Sectio готово Мы предлагаем медальон в панели.Применение Металлический дизайн удерживал каждую перголу, построенную в стилях, как производство 63-дюймовых анкеров, полное разнообразие клиентов. Как полиэфирные принты Impress не является производителем Из клипа Это пространство. детская изысканность. Детский набор из дачи Независимо от декора или декора. знающий полюс также

тилакоидных терминальных оксидаз необходимы для Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 выживет при быстро меняющейся интенсивности света | Физиология растений

Аннотация

Цианобактерии осуществляют фотосинтез и дыхание в тилакоидной мембране, предполагая, что эти два процесса взаимосвязаны.Однако роль дыхательной цепи переноса электронов в естественных условиях окружающей среды не установлена. Посредством целенаправленного разрушения гена мутанты Synechocystis sp. Были созданы PCC 6803, в которых отсутствовали комбинации трех терминальных оксидаз: тилакоидной мембраны цитохрома c оксидазы (COX) и хинолоксидазы (Cyd) и локализованной в цитоплазматической мембране альтернативной респираторной терминальной оксидазы. Все штаммы продемонстрировали аналогичный рост при непрерывных циклах прямоугольных волн умеренного или сильного освещения или 12-часового цикла умеренного-светлого / темного света.Однако при 12-часовом цикле прямоугольной волны высокий свет / темнота мутант COX / Cyd демонстрировал замедленный рост и был полностью фотообесцвечен примерно через 2 дня. Напротив, использование синусоидальных циклов свет / темнота для имитации естественных дневных условий привело к небольшому фотообесцвечиванию, хотя рост был медленнее. В циклах прямоугольных волн яркое / темное время суток мутант COX / Cyd претерпевал значительную потерю фотосинтетической эффективности в темные периоды, более высокий уровень окислительного стресса и сниженную деградацию гликогена по сравнению с диким типом.Мутант был подвержен фотоингибированию при импульсном, но не постоянном свете. Эти данные подтверждают роль локализованных в тилакоидах терминальных оксидаз в эффективном темновом дыхании, снижении окислительного стресса и адаптации к внезапным изменениям света, демонстрируя сильное избирательное давление для поддержания связанных фотосинтетических и дыхательных электронных цепей внутри тилакоидной мембраны. Насколько нам известно, это исследование является первым, в котором сообщается о фенотипических различиях в росте между терминальными мутантами оксидазы и клетками дикого типа, и подчеркивается необходимость изучения мутантных фенотипов в различных условиях.

Цианобактерии (кислородные фотосинтезирующие бактерии) представляют собой важную ветвь, которая на раннем этапе эволюции отделилась от других и сегодня играет ключевую роль в глобальной экологии, особенно в морских системах (Zwirglmaier et al., 2008). За исключением аномальной цианобактерии Gloeobacter violaceus , среди прокариот они необычны тем, что обладают двумя различными мембранными системами: тилакоидом, содержащим цепь переноса электронов, способную выполнять как дыхательную, так и фотосинтетическую функции, и цитоплазматической мембраной, аналогичной мембране других Грамотрицательные бактерии и участок дополнительной цепи переноса электронов, исключительно участвующие в дыхании (Smith and Howe, 1993; Vermaas, 2001).Дыхание и фотосинтез имеют много общих компонентов в тилакоидной мембране, включая пластохинон, комплекс цитохрома b ₆ f (cyt b ₆ f ) и растворимые окислительно-восстановительные носители пластоцианин12 и цитохром 90 ₆ , предполагая, что эти два процесса взаимосвязаны (Peschek et al., 2004). У модельного вида Synechocystis sp. PCC 6803 (далее — Synechocystis ), пластохинон является акцептором электронов либо от ФСII, либо от одного из нескольких комплексов дегидрогеназы, которые связаны с окислением НАДФН, НАДН или сукцината (Cooley and Vermaas, 2001; Ohkawa et al. ., 2001). Электроны переносятся непосредственно от пластохинона к комплексу цитохром bd -хинолоксидаза (Cyd), кодируемому cydAB (Berry et al., 2002), или через cyt b ₆ f и растворимый окислительно-восстановительный комплекс. носители либо PSI, либо аминокислотных остатков ₃ -типа цитохрома c оксидазного комплекса (COX), кодируемого ctaCIDIEI (Howitt and Vermaas, 1998; рис. 1). Кроме того, существует третья терминальная оксидаза, альтернативная терминальная респираторная оксидаза (ARTO), кодируемая ctaCIIDIIEII .Отсутствие сайта связывания Cu _A — и Mg ²⁺ в CtaCII (Howitt and Vermaas, 1998) и сходство с субъединицами цитохрома bo ₃ комплекса убихинолоксидазы из Escherichia coli , который, как было показано, лишен сайта связывания цитохрома c и подвергается восстановлению молекулой хинола (Abramson et al., 2000), предполагает, что ARTO восстанавливается пластохинолом. Четвертая терминальная оксидаза, пластохинол или терминальная оксидаза пластид (PTOX), была идентифицирована в хлоропластах красных и зеленых водорослей, высших растений и некоторых штаммов цианобактерий, но не присутствует в Synechocystis (McDonald et al., 2011).

Рисунок 1.

Схематические диаграммы фотосинтетической цепи переноса электронов (A) и дыхательных цепей электронов (B). Компоненты, общие для обоих процессов, обозначены звездочками, а терминальные оксидазные комплексы выделены жирным шрифтом. Отдельные субъединицы показаны только для терминальных оксидазных комплексов. Локализация NAD (P) H дегидрогеназы (NDh3), сукцинатдегидрогеназы и Cyd в цитоплазматической мембране не подтверждена.[Цветную версию этого рисунка см. В статье в Интернете.]

Рис. 1.

Схематические диаграммы фотосинтетической цепи переноса электронов (A) и дыхательных цепей электронов (B). Компоненты, общие для обоих процессов, обозначены звездочками, а терминальные оксидазные комплексы выделены жирным шрифтом. Отдельные субъединицы показаны только для терминальных оксидазных комплексов. Локализация NAD (P) H дегидрогеназы (NDh3), сукцинатдегидрогеназы и Cyd в цитоплазматической мембране не подтверждена.[Цветную версию рисунка см. В статье в Интернете.]

Исходные исследования предполагали наличие дыхательной цепи в цитоплазматической мембране Synechocystis , состоящей из комплексов дегидрогеназы, отдающих электроны пластохинону с последующим переносом на cyt b ₆ f , пластоцианин и / или цитохром c ₆ и оканчивающиеся на СОХ. Это было основано на обнаружении субъединиц ЦОГ посредством мечения иммунным золотом с использованием антитела против ЦОГ в клетках, подвергнутых солевому стрессу (Peschek et al., 1994). Однако эти результаты были поставлены под сомнение из-за возможной перекрестной реактивности антитела с субъединицами ARTO, а также из-за отсутствия подтверждения чистоты мембраны (Schultze et al., 2009). В последних исследованиях субъединицы cyt b ₆ f были обнаружены только в тилакоидной мембране (Schultze et al., 2009). Чистота этих мембранных фракций была подтверждена зондированием тилакоидными и цитоплазматическими мембранно-специфическими антителами. Кроме того, протеомные исследования выявили субъединицы cyt b ₆ f во фракциях очищенных тилакоидных мембран (Srivastava et al., 2005; Agarwal et al., 2010), но не в цитоплазматических мембранах из Synechocystis , культивируемых в нормальных (Huang et al., 2002) и подвергнутых солевому стрессу (Huang et al., 2006) условиях. Это предполагает наличие более простой дыхательной цепи в цитоплазматической мембране, в которой электроны, переданные пластохинону дегидрогеназными комплексами, переносятся непосредственно на терминальные оксидазы, восстановленные пластохинолом. Основными донорами электронов, вероятно, будут одна или несколько из трех различных НАД (Ф) Н дегидрогеназ 2 типа (Howitt et al., 1999) или сукцинатдегидрогеназы, поскольку антитела, вырабатываемые против различных субъединиц NAD (P) H дегидрогеназы 1 типа, выявляли эти белки только в тилакоидной мембране, а не в цитоплазматической мембране (Ohkawa et al., 2001; Zhang et al., 2004 ). Synechocystis имеет несколько комплексов NAD (P) H дегидрогеназы 1 типа с различными ролями в дыхании, преимущественно с использованием NADPH в качестве субстрата, циклическим электронным потоком через окисление восстановленного ферредоксина или фиксацией CO ₂ (Mi et al., 1995; Окава и др., 2000).

COX было подтверждено как терминальная оксидаза в тилакоидной мембране, потому что субъединицы этого комплекса не могут быть удалены в PSI-дефицитном штамме (Howitt and Vermaas, 1998). Cyd также был локализован на тилакоидной мембране на основании исследований ингибиторов. Добавление 2,5-дибром-3-метил-6-изопропил- p -бензохинона, который ингибирует cyt b ₆ f , и пентахлорфенола, ингибитора Cyd, приводит к полному подавлению окисления пластохинола ( Берри и др., 2002). Удаление Cyd и добавление 2,5-дибром-3-метил-6-изопропил- p -бензохинона также приводит к такому же эффекту. В том же исследовании ARTO не смог окислить пластохинол в мутанте COX / Cyd, что позволяет предположить, что он не может заменять Cyd в тилакоидной мембране. Исследования протеомики очищенных фракций мембран подтвердили присутствие субъединицы CtaCII ARTO в цитоплазматической мембране (Huang et al., 2002, 2006; Pisareva et al., 2007), но не в тилакоидной мембране (Srivastava et al., 2005; Agarwal et al., 2010) из Synechocystis . Однако субъединицы др. Терминальных оксидаз не были идентифицированы в этих же исследованиях (Srivastava et al., 2005; Agarwal et al., 2010), предполагая, что терминальные оксидазы присутствуют в небольшом количестве в обеих мембранах. Также было высказано предположение, что Cyd локализован на цитоплазматической мембране (Howitt and Vermaas, 1998). У Synechococcus sp. PCC 7002 (далее — Synechococcus ), в котором отсутствует Cyd, более высокая скорость снижения PSI наблюдалась у ARTO-дефицитных мутантов, что поддерживает локализацию в тилакоидной мембране и играет роль возможного заменителя Cyd (Nomura et al., 2006).

Функции терминальных оксидаз были исследованы на Synechocystis и Synechococcus (Howitt and Vermaas, 1998; Pils and Schmetterer, 2001; Hart et al., 2005; Nomura et al., 2006). Активность Cyd увеличивается, когда cyt b ₆ f ингибируется в Synechocystis , что указывает на роль Cyd в предотвращении избыточного восстановления пула пластохинонов (Berry et al., 2002). ЦОГ, возможно, функционирует как терминальный сток электронов в условиях низкой активности PSI или для предотвращения чрезмерного восстановления растворимых окислительно-восстановительных носителей (Howitt and Vermaas, 1998).Это было дополнительно подтверждено исследованиями на Synechococcus , в которых делеция COX и COX / ARTO приводила к 1,7- и 2,2-кратному увеличению скорости снижения PSI, соответственно (Nomura et al., 2006). Альтернативные поглотители электронов, такие как комплекс Flv2 / Flv4, который принимает электроны непосредственно от ФСII (Zhang et al., 2012), гидрогеназный комплекс, нитратредуктаза или фиксация углерода, могут компенсировать потерю активности терминальной оксидазы, как показано. за счет увеличения продукции водорода в штамме Synechocystis COX / Cyd (Gutthann et al., 2007). Активизация цепей переноса электронов тилакоидной и цитоплазматической мембран важна в условиях солевого стресса у Synechocystis (Jeanjean et al., 1990, 1993; Peschek et al., 1994) и Synechococcus sp. PCC 6311 (Fry et al., 1986), возможно, для обеспечения протонного градиента для транспортеров Na ⁺ / H ⁺ , локализованных в цитоплазматической мембране в условиях низкой фотосинтетической активности (Hagemann, 2011). Роль и мембранная локализация PTOX, который у цианобактерий преимущественно обнаруживается у морских штаммов, не исследованы, но могут обеспечивать дополнительный сток электронов в условиях недостатка железа, когда cyt b ₆ f и PSI ограничены. (Бейли и др., 2008). Делеция PTOX у Arabidopsis ( Arabidopsis thaliana ) приводит к пестролистному фенотипу с листьями, характеризующимися отчетливыми зелеными и белыми пятнами, содержащими либо нормальные хлоропласты, либо хлоропласты с дефицитом пигмента (Carol et al., 1999). Этот фенотип наблюдался при непрерывном освещении при 50, 150 и 450 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 и в цикле 8 ч света / 16 ч темноты при 150 и 450 мкмоль фотонов м ^{— 2} с ⁻¹ (Rosso et al., 2009). Пестрый фенотип усугублялся при более высокой интенсивности света. Фенотипических различий между мутантным штаммом и диким типом не наблюдалось при 8-часовом освещении (50 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 ) / 16-часовом цикле темноты, когда мутант выращивали при 25 °. C, но пестрота была очевидна при понижении температуры до 12 ° C. Наблюдалось, что высокий свет, непрерывное освещение и / или низкая температура увеличивают долю закрытых реакционных центров ФСII и, следовательно, давление возбуждения в мутанте и приводят к нарушению биогенеза тилакоидной мембраны (Rosso et al., 2009). У некоторых видов растений повышенная регуляция PTOX наблюдалась в ответ на неблагоприятные условия, такие как воздействие яркого света в условиях низкой или повышенной температуры (Streb et al., 2005) или при солевом стрессе (Stepien and Johnson, 2009 г.). Делеция гена PTOX2 в Chlamydomonas reinhardtii , кодирующем PTOX, подтвердила роль в предотвращении избыточного восстановления пула пластохинонов на свету (Houille-Vernes et al., 2011). Мутант продемонстрировал пониженную приспособляемость по сравнению с диким типом при освещении, хотя рост не исследовался в различных условиях окружающей среды.

Несмотря на влияние потери терминальных оксидаз на перенос электронов, потеря этих комплексов у Synechocystis (Howitt and Vermaas, 1998; Pils and Schmetterer, 2001) или Synechococcus не наблюдается значительного влияния на рост или жизнеспособность. (Nomura et al., 2006). Однако, в отличие от исследований PTOX на растениях, мутантные штаммы цианобактерий культивировали только при постоянном уровне освещенности, и исследования в темное время суток или при переходе от света к темноте не проводились.Поэтому мы исследовали рост мутантов терминальной оксидазы Synechocystis в условиях, более характерных для тех, которые наблюдаются в естественной среде, где условия освещения могут быстро меняться из-за изменения облачного покрова или препятствий объектами или другими организмами. Наши результаты показали, что потеря тилакоидных терминальных оксидаз была летальной, когда клетки быстро подвергались воздействию сильного света. Это указывает на фундаментальную роль этих комплексов в ответе на внезапный световой стресс.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Сохранение терминальных оксидаз у цианобактерий

В качестве первого шага к пониманию роли терминальных оксидаз в цианобактериях шестьдесят секвенированных геномов цианобактерий в базе данных Национального центра биотехнологической информации были исследованы на наличие генов, кодирующих терминальные оксидазы (таблица I; дополнительная таблица S1). Все штаммы содержали по крайней мере один набор генов ЦОГ, что позволяет предположить, что это основная терминальная оксидаза.Семь штаммов содержали только ЦОГ и не содержали терминальных оксидаз, восстанавливающих пластохинол. Четыре из них были Prochlorococcus spp. с высоким соотношением хлорофилла b к дивинилхлорофиллу a ( a ₂ ). Эти виды обычно обитают в глубоководной среде и подвергаются низкому уровню освещения, в отличие от Prochlorococcus spp. с низким соотношением хлорофилла b к a ₂ , которые требуют более высокой интенсивности света для роста (Rocap et al., 2002). Другая цианобактерия, UCYN-A, не имеет ФСII (Zehr et al., 2008). Остальные два, Cyanothece spp. PCC 8801 и 8802 были выделены на рисовых полях ( Oryza sativa ) на Тайване, и неизвестно, при каких уровнях света они будут постоянно подвергаться воздействию (Huang and Chow, 1986). Остальные штаммы содержали гены COX и по крайней мере одну копию ARTO (16), Cyd (девять) или PTOX (девять). Эти данные предполагают, что присутствие ЦОГ и по крайней мере одной терминальной оксидазы, восстанавливаемой пластохинолом, имеет физиологическое значение для цианобактерий.Большинство штаммов (15 из 19), которые кодируют ЦОГ и более одной терминальной оксидазы, восстанавливаемой пластохинолом, являются либо галотолерантными, на что указывает присутствие одного или нескольких генов nhaP , кодирующих локализованный в цитоплазме Na ⁺ / H ^{+ переносчик} (Hagemann, 2011) и / или азотфиксаторы, идентифицированные по присутствию nifH , кодирующего железосодержащий компонент нитрогеназы (Ben-Porath and Zehr, 1994). В каждом случае возможно, что дополнительные терминальные оксидазы необходимы для обеспечения достаточного количества АТФ для экспорта Na ⁺ в условиях, когда фотосинтез снижен (Hagemann, 2011), и для удаления кислорода, который может ингибировать активность нитрогеназы (Berman-Frank et al., 2001; Стаал и др., 2003).

Терминальные оксидазы, присутствующие у 60 видов цианобактерий

Таблица I.

Терминальные оксидазы, присутствующие у 60 видов цианобактерий

Сравнение BLAST было выполнено для идентификации терминальных оксидаз и генов nifH и nhaP , показывающих азотфиксацию (за исключением случая Microcoleus chthonoplastes PCC 7420 и Synechococcus sp. JA-3-3Ab) и галотолерантность соответственно.

+_{16 0 +16 0}

Кол-во штаммов .	COX .	АРТО .	Cyd .	ВОМ .	Азотная фиксация .	Галотолерант .
7	+				3	2
16	+	+			3			3			+		1	3
9	+			+	0	0
11	+	+	+		9	10
3	+	+		+	0	0
2	+		+		+	1
3	+	+	+	+	3900 39	3

+_{16 0 +16 0}

No.штаммов .	COX .	АРТО .	Cyd .	ВОМ .	Азотная фиксация .	Галотолерант .
7	+				3	2
16	+	+			3			3			+		1	3
9	+			+	0	0
11	+	+	+		9	10
3	+	+		+	0	0
2	+		+		+	1
3	+	+	+	+	3900 39	3

Таблица I.

Терминальные оксидазы, присутствующие у 60 видов цианобактерий

Сравнение BLAST было выполнено для идентификации терминальных оксидаз и генов nifH и nhaP , что свидетельствует об азотфиксации (за исключением случая Microcoleus chthonoplastes PCC 7420 и Synechocococ sp. JA-3-3Ab) и галотолерантность соответственно.

+_{16 0 +16 0}

Кол-во штаммов .	COX .	АРТО .	Cyd .	ВОМ .	Азотная фиксация .	Галотолерант .
7	+				3	2
16	+	+			3			3			+		1	3
9	+			+	0	0
11	+	+	+		9	10
3	+	+		+	0	0
2	+		+		+	1
3	+	+	+	+	3900 39	3

+_{16 0 +16 0}

No.штаммов .	COX .	АРТО .	Cyd .	ВОМ .	Азотная фиксация .	Галотолерант .
7	+				3	2
16	+	+			3			3			+		1	3
9	+			+	0	0
11	+	+	+		9	10
3	+	+		+	0	0
2	+		+		+	1
3	+	+	+	+	3900 39	3

Получение рекомбинантных штаммов

Synechocystis

Немаркированные мутанты Synechocystis , лишенные COX, ARTO или Cyd, были сконструированы путем разрушения ctaCIDIEI , ctaCII или cydAB , соответственно, посредством двухэтапного протокола гомологичной рекомбинации.Плазмиды, в которых представляющие интерес гены были разрушены кассетой npt1 / sacRB , были введены в Synechocystis , и трансформанты были отобраны в присутствии канамицина. После полной сегрегации штаммов вводили безмаркерные конструкции, содержащие удаленные копии генов-мишеней и лишенные кассеты sacRB npt1 /, и клетки культивировали в присутствии Suc для отбора для удаления кассеты, опосредованного рекомбинацией.Полную сегрегацию подтверждали анализами ПЦР с праймерами выше и ниже соответствующих генов (дополнительный рисунок S1). Двойные и тройные мутанты были получены и подтверждены одними и теми же методами. Двойные мутанты, COX / ARTO и ARTO / Cyd, были получены из одиночного нокаута ARTO. Двойной мутант COX / Cyd был получен из одиночного нокаута COX. Тройной мутант был получен из двойного мутанта ARTO / Cyd. Штаммы, полученные в этом исследовании, перечислены в дополнительной таблице S2.Немаркированные мутанты были созданы для того, чтобы минимизировать влияние на экспрессию нижележащих генов и на пирамидные мутации. Анализ обратной транскрипции (RT) -PCR подтвердил, что trxA , кодирующий тиоредоксин и расположенный на 152 п.н. ниже ctaEI , не котранскрибируется с этим геном. Аналогично, Sll0814, кодирующий гипотетический белок и расположенный на 214 п.н. ниже ctaCII , также не котранскрибируется (дополнительный рисунок S2). Следовательно, полярные эффекты на нижестоящие гены маловероятны.Секвенирование генома MiSeq штаммов дикого типа и ƊCOX / Cyd подтвердило, что кроме целевых делеций, никаких дополнительных различий между штаммами не существовало (дополнительная таблица S3). Частота дыхания в темноте, измеренная по потреблению кислорода, была сильно снижена у мутанта COX / Cyd и тройного мутанта, оба из которых не имеют терминальных оксидаз, локализованных в тилакоидах, но были подобны дикому типу в других штаммах (дополнительная таблица S2) . Это согласуется с результатами предыдущих исследований (Howitt and Vermaas, 1998).

Рост терминальных штаммов с дефицитом оксидазы

Штаммы Synechocystis культивировали при двух интенсивностях света: умеренной (40 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ), при этом клетки дикого типа не страдают световым стрессом и высокой (150 мкмоль фотонов м ^-2. s ^-1 ), что приводит к световому стрессу и фотообесцвечиванию клеток дикого типа. Рост всех штаммов, культивируемых при постоянном умеренном освещении, был аналогичным, как сообщалось ранее (Howitt and Vermaas, 1998; Supplemental Fig.S4A). Количество хлорофилла на клетку оставалось практически постоянным для всех штаммов, отсутствие фотообесцвечивания указывает на отсутствие светового стресса. Воздействие непрерывного яркого света приводило к аналогичному росту и постепенному увеличению фотообесцвечивания у всех штаммов (дополнительный рисунок S4B). Чтобы проверить, важны ли терминальные оксидазы для темнового дыхания, штаммы культивировали в 12-часовых циклах прямоугольной волны умеренный-светлый / темный. Статистически значимой разницы в росте между штаммами не наблюдалось, и никаких признаков фотообесцвечивания не наблюдалось ни у одного из штаммов (рис.2А; Дополнительный рис. S4C). Это говорит о том, что дыхательная электронная цепь не важна для выживания нестрессированных клеток при 12-часовом цикле умеренный свет / темнота. Напротив, когда штаммы подвергались 12-часовым циклам прямоугольных волн с высоким / темным светом, два штамма с дефицитом терминальных оксидаз, локализованных в тилакоидах (COX / Cyd и тройной мутант), продемонстрировали статистически значимое увеличение фотообесцвечивания к началу второй 12-часовой световой период (примерно 42 часа; рис. 2В; дополнительный рис.S4D). Визуально клетки выглядели полностью фотообесцвеченными к концу этого периода, хотя некоторое количество остаточного хлорофилла, измеренное после экстракции метанолом, оставалось в мутанте COX / Cyd (1,52 нмоль мл ^-1 при оптической плотности [OD] 750 нм) по сравнению с дикого типа (3,09 нмоль / мл ^-1 при OD 750 нм; P <0,005). Однако клетки не продемонстрировали восстановления из этого состояния, что указывает на то, что они были мертвы (рис. 2, B и D; дополнительный рис. S4D). Такая быстрая потеря жизнеспособности указывает на потребность в по крайней мере одной активной терминальной оксидазе в тилакоидной мембране в этих условиях.Эти результаты также показывают, что ARTO не может компенсировать потерю COX и Cyd. Затем рост штаммов дикого типа и двойных мутантов измеряли в 12-часовых синусоидальных циклах свет / темнота (дополнительный рисунок S4F), в которых свет постепенно увеличивался до максимального уровня в 180 мкмоль фотонов м ^-2 с ⁻¹ для моделирования естественных суточных условий (рис. 2C; дополнительный рис. S4E). Рост штаммов COX / Cyd и тройных мутантов был снижен по сравнению с штаммами дикого типа и другими мутантами с двойным концом оксидазы.В некоторых случаях наблюдалось фотообесцвечивание, хотя это не было постоянным.

Рисунок 2.

от A до C, Рост трех повторностей культур измеряли при OD 750 и 680 нм в 12-часовом умеренном свете (40 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темной прямоугольной волной. циклы (A), 12-часовой период яркого света (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные периоды (B) и 12-часовой синусоидальный свет (максимальный уровень света 180 мкмоль фотонов м ⁻² с ⁻¹ ) / темновые циклы (суточные; C).Темные периоды обозначены черными полосами. Количество хлорофилла определялось соотношением 680: 750 нм и является показателем фотообесцвечивания клеток. Для простоты визуализации показаны только результаты для штаммов дикого типа (зеленый), ƊCOX (синий), ƊCOX / Cyd (красный) и тройных мутантов (коричневый). Результаты для всех штаммов показаны на дополнительном рисунке S4, от C до E. Звездочки указывают на значительные различия между образцами дикого типа и ƊCOX / Cyd ( P <0,05). D. Штаммы, подвергнутые 50-часовому 12-часовому воздействию сильного света (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные периоды.Локализованные в тилакоидах терминальные дефицитные по оксидазе штаммы выглядят полностью фотообесцвеченными по сравнению с другими шестью штаммами. Результаты для других биологических реплик показаны на дополнительном рисунке S4. WT, Дикий тип. [См. Онлайн-статью для цветной версии этого рисунка.]

Рисунок 2.

A – C, Рост трех повторностей культур измеряли при OD 750 и 680 нм при 12-часовом умеренном освещении (фотоны 40 мкмоль м ^{— 2} с ^-1 ) / темные прямоугольные волновые циклы (A), 12-часовой высокий свет (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные волновые циклы (B) и 12-часовой синусоидальный свет (максимальный уровень света 180 мкмоль фотонов м ⁻² с ⁻¹ ) / темные циклы (дневные; C).Темные периоды обозначены черными полосами. Количество хлорофилла определялось соотношением 680: 750 нм и является показателем фотообесцвечивания клеток. Для простоты визуализации показаны только результаты для штаммов дикого типа (зеленый), ƊCOX (синий), ƊCOX / Cyd (красный) и тройных мутантов (коричневый). Результаты для всех штаммов показаны на дополнительном рисунке S4, от C до E. Звездочки указывают на значительные различия между образцами дикого типа и ƊCOX / Cyd ( P <0,05). D. Штаммы, подвергнутые 50-часовому 12-часовому воздействию сильного света (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные периоды.Локализованные в тилакоидах терминальные дефицитные по оксидазе штаммы выглядят полностью фотообесцвеченными по сравнению с другими шестью штаммами. Результаты для других биологических реплик показаны на дополнительном рисунке S4. WT, Дикий тип. [Цветную версию этого рисунка см. В статье в Интернете.]

Измерения фотосинтеза у дикого типа и мутанта терминальной оксидазы тилакоидов

Измерения выделения кислорода были выполнены на диком типе и мутанте COX / Cyd, чтобы исследовать, совпадает ли быстрое фотообесцвечивание, наблюдаемое у этого штамма при воздействии 12-часовых циклов прямоугольной волны высокий свет / темнота, с потерей фотосинтетической активности.Выделение кислорода измерялось в начале и в конце световых периодов (150 мкмоль фотонов м ⁻² с ⁻¹ ) и в середине темного периода в общей сложности 44 часа, к этому времени COX / Cyd мутант не показал дальнейшего роста (рис. 3). Значительное падение активности выделения кислорода наблюдалось у штамма COX / Cyd в первый темный период (рис. 3) с 31,3 ± 6,2 до 8,0 ± 10,8 нмоль кислорода мг ^-1 масса сухих клеток (DCW) мин ^-1 . Напротив, частота значимых различий у дикого типа между началом и концом темного периода не была (от 51.От 2 ± 10,4 до 48,0 ± 6,7 нмоль кислорода мг ^-1 DCW мин ^-1 ). Фотосинтетическая активность восстановилась у мутанта COX / Cyd до уровня, аналогичного уровню дикого типа, к концу второго светового периода (дикий тип, 46,2 ± 12,8 нмоль кислорода, мг ^-1 DCW мин ^-1 ; ƊCOX / Cyd , 39,4 ± 6,8 нмоль кислорода мг ^-1 DCW мин ^-1 ). Во время второго темного периода скорость выделения кислорода в ƊCOX / Cyd быстро снижалась до нуля (рис. 3). Подобно первому темному периоду, продукция кислорода у дикого типа оставалась относительно постоянной между началом и концом темного периода (с 46.2 ± 12,8 до 45,0 ± 15,1 нмоль кислорода мг ^-1 DCW мин ^-1 ).

Рис. 3.

Скорость выделения кислорода образцов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия), культивируемых при 12-часовом высоком освещении (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные циклы. Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Темные периоды обозначены черными полосами. Результаты взяты из трех биологических повторов.

Рис. 3.

Скорость выделения кислорода образцов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия), культивированных при 12-часовом высоком освещении (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные волны. Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Темные периоды обозначены черными полосами. Результаты взяты из трех биологических повторов.

Измерения гликогена у дикого типа и мутанта терминальной оксидазы тилакоидов

Основной молекулой-накопителем энергии у цианобактерий является гликоген (Lindberg et al., 2010; Suzuki et al., 2010), который может быть определен путем анализа количества Glc после кислотного гидролиза. Уровни гликогена у дикого типа и мутанта COX / Cyd, культивированного в 12-часовых циклах прямоугольной волны высокий / темный свет (рис. 4A) или 12-часовых синусоидальных циклах свет / темнота (рис. 4B), измеряли в начале. и конец 12-часового периода темноты. В 12-часовых циклах прямоугольной волны высокий свет / темнота штамм COX / Cyd накапливал аналогичные уровни гликогена в течение первых двух световых периодов по сравнению с диким типом, но демонстрировал значительно более низкое использование гликогена в первые два темных периода. .После второго периода темноты уровни гликогена были постоянными, предположительно из-за гибели клеток. Напротив, в образцах с 12-часовым синусоидальным циклом свет / темнота мутант COX / Cyd накапливал и утилизировал значительно меньше гликогена, чем дикий тип в течение первых 3 дней, но уровни были одинаковыми между двумя штаммами после этого периода.

Рисунок 4.

Измерения Glc образцов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия), культивированных при 12-часовом высоком освещении (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темнота прямоугольные периоды (A) и 12-часовой синусоидальный свет (максимальный уровень света 180 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 ) / темновые циклы (суточные; B).Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Темные периоды обозначены черными полосами. Результаты взяты из трех биологических повторов. Glc измеряли для образцов объемом 1 мл и зависят от количества клеток.

Рисунок 4.

Измерения Glc образцов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия), культивированных при 12-часовом высоком освещении (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные волновые циклы (A) и 12-часовой синусоидальный свет (максимальный уровень света 180 мкмоль фотонов m ⁻² с ⁻¹ ) / темные циклы (дневные; B).Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Темные периоды обозначены черными полосами. Результаты взяты из трех биологических повторов. Glc измеряли для образцов объемом 1 мл и зависят от количества клеток.

Измерение активных форм кислорода у диких животных и мутанта тилакоидной терминальной оксидазы

Мы исследовали продукцию активных форм кислорода (ROS) у дикого типа и мутанта COX / Cyd, культивированного в 12-часовых циклах прямоугольной волны высокий / темный свет в течение 44 часов через 2 ‘, 7’-дихлородигидрофлуоресцеиндиацетат (DCHF). -DA) флуоресценции (рис.5А). DCHF-DA представляет собой проницаемый для клеток краситель, который гидролизуется до нефлуоресцентного 2 ‘, 7’-дихлордигидрофлуоресцеина in vivo и, в свою очередь, окисляется до высоко флуоресцентного дихлорфлуоресцеина (DCF) перекисью водорода, другими пероксидами и пероксинитритом (Crow, 1997 ; Ding et al., 1998; He, Häder, 2002; Rastogi et al., 2010). Было подтверждено, что DCHF-DA является допустимым маркером для измерения окислительного повреждения в Synechocystis путем измерения флуоресценции в клетках дикого типа, подвергнутых воздействию метилвиологена (MV).MV превосходит эндогенные акцепторы электронов PSI и повторно окисляется кислородом, давая супероксид, который быстро превращается в пероксид водорода (Thomas et al., 1998). При воздействии света клетки дикого типа демонстрировали большое увеличение флуоресценции в присутствии MV (24 240 ± 2034 против 6 771 ± 195 относительных единиц флуоресценции [RFU] при OD 750 нм; дополнительный рисунок S5). Эффект от добавления MV был заметно меньше, когда клетки поддерживались в темноте (4731 ± 314 против 3714 ± 135 RFU при OD 750 нм).

Рисунок 5.

Флуоресценция DCF образцов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия), культивированных при 12-часовом высоком освещении (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темнота прямоугольные периоды (A) и 12-часовой синусоидальный свет (180 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темновые циклы (B). Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Темные периоды обозначены черными полосами. Результаты взяты из трех биологических повторов.AU, единицы абсорбции.

Рисунок 5.

Флуоресценция DCF образцов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия), культивированных при 12-часовом высоком освещении (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные прямоугольные периоды (A) и 12-часовой синусоидальный свет (180 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) / темные циклы (B). Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Темные периоды обозначены черными полосами. Результаты взяты из трех биологических повторов.AU, единицы абсорбции.

Для клеток, выращенных при прямоугольном освещении, флуоресценция DCF значительно увеличилась как у клеток дикого типа (с 331 ± 97 до 2 836 ± 750 RFU, мг ^-1 DCW), так и у ƊCOX / Cyd (с 3167 ± 277 до 14 970 ±). 653 RFU mg ^-1 DCW) в течение первого периода темноты. Однако уровень флуоресценции был в 5 раз меньше у штаммов дикого типа по сравнению со штаммами ƊCOX / Cyd. К концу второго светового периода уровень флуоресценции между двумя штаммами существенно не отличался.Это демонстрирует, что делеция терминальных оксидаз, локализованных в тилакоидах, не способствует генерации ROS в периоды освещения. Во второй период темноты наблюдалось некоторое усиление флуоресценции DCF у штамма ƊCOX / Cyd, что привело к конечному уровню флуоресценции, который был значительно выше у COX / Cyd по сравнению с диким типом (27,960 ± 2794 против 15400 ± 1,712 RFU мг. ⁻¹ DCW; рис. 5A). Напротив, рост штаммов дикого типа и ƊCOX / Cyd при 12-часовом синусоидальном цикле свет / темнота не привел к значительному увеличению продукции ROS в течение 5-дневного периода (рис.5Б).

Измерения фотоингибирования у дикого типа и мутанта тилакоидной терминальной оксидазы

Для тестирования фотоингибирования штаммы дикого типа и мутантные штаммы COX / Cyd выращивали в непрерывной фазе от умеренного света до средней логарифмической фазы с последующей инкубацией в темноте в течение 20 минут. Затем клетки инкубировали при постоянном насыщающем свете при 1500 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 в течение 50 минут в отсутствие и в присутствии линкомицина, в течение которых измеряли выделение кислорода.Никаких различий в скорости выделения кислорода между штаммами дикого типа и мутантными COX / Cyd при постоянном освещении не наблюдалось (рис. 6, A и B). Когда клетки инкубировали в пульсирующем свете в течение 5 минут (1500 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 ) / 5 минут без паузы, фотоингибирование дикого типа было снижено по сравнению с ростом в условиях постоянного света (рис. 6, C и D). Однако по сравнению с диким типом мутантный штамм COX / Cyd показал значительное снижение фотосинтеза, усугубляемое линкомицином, что указывает на более высокий уровень фотоингибирования (рис.6, В и Г).

Рисунок 6.

Характеристика штаммов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия). Фотоингибирование измеряли при постоянном освещении и в отсутствие (A) и в присутствии (B) линкомицина или при пульсирующем свете в течение 5 минут включения / 5 минут выключения в отсутствие (C) и присутствие (D) линкомицина. Показаны только измерения для световых периодов. Свет имел интенсивность 1500 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 . Звездочки указывают на существенные различия между образцами ( P <0.05). Результаты получены из трех отдельных биологических повторов.

Рисунок 6.

Характеристика штаммов дикого типа (сплошная линия) и ƊCOX / Cyd (пунктирная линия). Фотоингибирование измеряли при постоянном освещении и в отсутствие (A) и в присутствии (B) линкомицина или при пульсирующем свете в течение 5 минут включения / 5 минут выключения в отсутствие (C) и присутствие (D) линкомицина. Показаны только измерения для световых периодов. Свет имел интенсивность 1500 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 .Звездочки указывают на значительные различия между образцами ( P <0,05). Результаты получены из трех отдельных биологических повторов.

ОБСУЖДЕНИЕ

Представленные здесь результаты показывают, что по крайней мере одна терминальная оксидаза, локализованная на тилакоидной мембране, необходима для выживания Synechocystis в периоды чередования яркого света и темноты, когда переход свет / темнота происходит быстро. В таких условиях потеря COX и Cyd смертельна и не может быть компенсирована присутствием ARTO.Это предполагает, что ARTO либо не присутствует в тилакоидной мембране, либо экспрессируется на уровнях, недостаточных для того, чтобы справиться с этими условиями, и что роли цитоплазматических и тилакоидных дыхательных цепей различны. Менее серьезное влияние на выживаемость клеток наблюдалось при синусоидальном изменении уровней света (т.е. имитирующих дневные условия), но все же наблюдалось значительное нарушение роста в отсутствие обоих комплексов. Синусоидальные изменения уровней освещенности более характерны для суточных условий, но вполне вероятно, что быстрые изменения также будут происходить в естественных условиях окружающей среды, например, в результате движения облаков.

Подобный рост всех штаммов, наблюдаемый при постоянном освещении, предполагает ограниченную роль терминальных оксидаз при неизменных условиях, состояние, которое никогда не встречается в естественной среде. Однако следует отметить, что сопоставимый рост наблюдался между всеми штаммами, подвергнутыми прямоугольным циклам умеренного света / темноты, при которых условия фотообесцвечивания были ограничены. Это предполагает, что дыхание не является важным для поддержания темноты в нестрессированных клетках, что является неожиданным открытием, учитывая предположение, что метаболическая энергия, необходимая для темных периодов, в основном обеспечивается дыханием, используя продукты, расщепленные из гликогена посредством гликолиза и цикла лимонной кислоты (Matthijs и Lubberding, 1988).Возможно, что энергетические потребности нестрессированных клеток в темное время суток достаточно низки, чтобы другие процессы, такие как ферментация, могли компенсировать потерю дыхания (Stal and Moezelaar, 1997). Метаболические пути, участвующие в ферментации сахаров до пирувата с последующим превращением в лактат, ацетат или этанол, были идентифицированы в Synechocystis (Kaneko et al., 1996), но их роль в клеточной физиологии не исследована.

Летальность мутанта COX / Cyd при сильном / темном прямоугольном освещении, вероятно, обусловлена ​​рядом факторов.Во-первых, наблюдение, что штаммы дикого типа и мутантные штаммы демонстрировали одинаковые уровни фотоингибирования при постоянном освещении, в то время как мутантный штамм демонстрировал большее фотоингибирование при чередовании световых / темных циклов (рис.6, C и D), предполагает, что белки COX / Cyd позволяют клеткам избежать чрезмерного восстановления фотосинтетических компонентов и последующего повреждения, включая фотоингибирование, сразу после увеличения уровня света, которое слишком быстрое для клеток, чтобы компенсировать его с помощью других механизмов.Например, диффузия белка в тилакоидной мембране происходит относительно медленно, что недавно продемонстрировано перераспределением полупериода 10-20 мин дегидрогеназы NAD (P) H типа 1 и сукцинатдегидрогеназы в клетках, перенесенных с слабого на умеренный свет (Liu и др., 2012). Во-вторых, мутантные клетки COX / Cyd страдают от повышенной генерации ROS в темноте по сравнению с клетками дикого типа (фиг. 5A). Это может быть результатом чрезмерного восстановления дыхательной цепи в клетках, лишенных двух концевых оксидазных активностей, и это, по-видимому, также объясняет падение активности фотосинтетического аппарата мутанта, видимого в темноте (рис.3). Кроме того, отсутствие локализованных в тилакоидах терминальных оксидаз ограничивает способность клетки восстанавливать кислород, тем самым потенциально увеличивая образование ROS. В-третьих, отсутствие дыхания в темноте (на что указывает более низкая скорость распада гликогена) может привести к недостаточному доступу АТФ для замены или восстановления PSII и других комплексов, усугубляя повреждение. Напротив, наблюдается значительная мобилизация запаса углерода в клетках дикого типа в темноте после того, как они подвергаются высокому / темному прямоугольному свету (рис.4А).

Несмотря на первоначально низкую остаточную скорость фотосинтеза, наблюдаемую у мутанта COX / Cyd после первого периода темноты (рис. 3B), этот штамм продемонстрировал скорости фотосинтеза, сходные с показателями дикого типа после 12 часов освещения. Это, вместе с тем фактом, что все штаммы, подвергавшиеся непрерывному воздействию сильного света (дополнительный рисунок S4B), демонстрировали аналогичный рост и что сопоставимые уровни ROS наблюдались между диким типом и мутантом COX / Cyd во время световых периодов (рисунок 5A), предполагает, что повышенное окислительное повреждение не происходит у мутантов при постоянном освещении.Этого следовало ожидать, как потому, что PSI может функционировать как альтернативный акцептор электронов на свету, так и потому, что дыхательная цепь не потребуется в световые периоды. Однако во время второго темного периода наблюдается полная потеря фотосинтетической активности у мутанта COX / Cyd. В результате этих эффектов мутантные клетки умирают после двух циклов свет / темнота.

При синусоидальном освещении мутантные клетки демонстрируют некоторое снижение синтеза и распада гликогена, но они способны каким-то образом адаптироваться к этому, возможно, за счет усиления ферментации, так что отличие от клеток дикого типа становится менее заметным. со временем (рис.4Б). Это может быть связано с тем, что более низкие уровни фотоповреждения из-за стабильных уровней продукции ROS (рис. 5B) в этих условиях освещения приводят к меньшему физиологическому стрессу, отчасти из-за периода низкой освещенности в начале дня, что позволяет Фотосистема должна адаптироваться до достижения опасного уровня освещенности. Кроме того, в середине дня период, в течение которого условия освещения достаточно высоки, чтобы повредить клетки, сокращается (примерно 4,5 часа).

Демонстрация здесь важности COX и Cyd контрастирует с предыдущими исследованиями, указывающими на незначительный эффект, если таковой имеется, на рост или жизнеспособность в результате потери этих комплексов (Howitt and Vermaas, 1998; Pils and Schmetterer, 2001; Nomura et al. ., 2006), и указывает на важность характеристики мутантных фенотипов в различных условиях окружающей среды.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты этого исследования показывают, что терминальные оксидазы, расположенные на тилакоидах, играют важную и двойную роль, позволяя Synechocystis реагировать на быстрые изменения уровня света. В то время как роль терминальных оксидаз в предотвращении избыточного восстановления либо cyt b ₆ f (Berry et al., 2002) в случае пластохинол-акцепторных терминальных оксидаз и PSI в случае ЦОГ (Howitt and Vermaas, 1998), как было указано ранее, мы демонстрируем условия, при которых эта функция является критической для выживания. Терминальные оксидазы, расположенные на тилакоидах, помогают снизить степень фотоингибирования на начальном этапе, ограничивают окислительное повреждение клетки в темное время суток и способствуют использованию резервов для обеспечения энергии для восстановления в темноте. Присутствие ЦОГ и по крайней мере одной пластохинол-акцепторной терминальной оксидазы в 53 из 55 штаммов цианобактерий, которые имеют как PSI, так и PSII, и могут подвергаться воздействию сильного света (или 53 из 53, если Cyanothece spp.PCC 8801 и 8802, которые были изолированы с рисового поля, не подвергались воздействию сильного света), означает, что эта комбинация имеет широко распространенное значение среди цианобактерий.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Бактериальные штаммы, среды и условия роста

Synechocystis sp. штамм PCC 6803 (Williams, 1988) и производные от него штаммы обычно культивировали в среде BG-11 с добавлением 10 мМ бикарбоната натрия (Castenholz, 1988) при 30 ° C и умеренном освещении (40 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ) и встряхивали при 160 об / мин, если не указано иное.В общей сложности 15 г агара L ^-1 использовали для приготовления твердой среды с добавлением 30 мкг мл ^-1 канамицина и 5% (мас. / Об.) Suc, если необходимо.

Биоинформатика

Сравнение

FASTA BLAST (Altschul et al., 1990) было выполнено с использованием генов Synechocystis ctaC1 , ctaCII , cydA и nhaP3 и Nostoc sp. PCC 7120 nifH и Arabidopsis ( Arabidopsis thaliana ) PTOX последовательности против 60 геномов, перечисленных в базе данных Национального центра биотехнологической информации (http: // www.ncbi.nlm.nih.gov/sutils/genom_table.cgi). Присутствие мотива C [AT] ELC в CtaC1 и мотива D [AS] X [FY] S в CtaCII было использовано для дифференциации между этими двумя последовательностями (Howitt and Vermaas, 1998).

Конструкция плазмиды

Праймеры

, использованные в этом исследовании, перечислены в дополнительной таблице S4. ПЦР выполняли стандартными процедурами с использованием высокоточной ДНК-полимеразы Phusion (New England Biolabs). Последовательность генома Synechocystis (Kaneko et al., 1996) консультировались через Cyanobase (http://genome.kazusa.or.jp/cyanobase) по поводу дизайна праймеров. Делецию гена ctaC1D1E1 выполняли путем амплификации фрагмента длиной 932 п.н. выше ctaC1 с использованием праймеров COXleftfor и COXleftrev и фрагмента длиной 928 п.н. ниже ctaE1 с использованием праймеров COXrightfor и COXrightrev с последующей вставкой в ​​соответствующие фрагменты COXrightrev. сайты Xba I / Bam HI и Sac I / Eco RI pUC19 для генерации pCOX1.Делецию гена ctaII выполняли путем амплификации фрагмента длиной 1007 п.н. перед ctaCII с использованием праймеров Ctaleftfor и Ctaleftrev и фрагмента длиной 1050 п.н. ниже ctaCII с использованием праймеров Ctarightfor и Ctarightrev с последующей вставкой соответствующих фрагментов в соответствующие фрагменты. сайты Xba I / Bam HI и Sac I / Eco RI pUC19 для генерации pCta1. Делецию гена cydAB выполняли путем амплификации фрагмента длиной 1029 п.н. выше cydA с использованием праймеров Cydleftfor и Cydleftrev и фрагмента длиной 1036 п.н. ниже cydB с использованием праймеров Cydrightfor и Cydrightrev с последующей вставкой соответствующих фрагментов в сайты Xba I / Bam HI и Sac I / Eco RI pUC19 для генерации pCyd1.Кассета Bam HI-переваренная npt1 / sacRB из pUM24Cm (Ried and Collmer, 1987) была вставлена ​​в сайт Bam HI между вышестоящим и нижележащим фрагментами в pCOX1, pCta1 и pCyd2, чтобы генерировать pCOX1, pCta1 и pCyd2. pCta2 и pCyd2 соответственно.

Конструирование мутантных штаммов терминальной оксидазы

Для создания меченых мутантов примерно 1 мкг плазмид pCOX2, pCta2 и pCyd2 смешивали с клетками Synechocystis в течение 6 часов в жидкой среде с последующей инкубацией на чашках с агаром BG11 в течение примерно 24 часов.На поверхность планшета добавляли еще 3 мл агара, содержащего канамицин, с последующей инкубацией в течение приблизительно 1-2 недель. Трансформанты были субкультивированы, чтобы позволить сегрегацию мутантных аллелей. Сегрегацию подтверждали с помощью ПЦР с использованием праймеров COXf / COXr, Ctar / Ctar или Cydf / Cydr, которые фланкируют удаленную область. Генерацию немаркированных мутантов проводили согласно Xu et al. (2004). Чтобы удалить кассету npt1 / sacRB , мутантные линии трансформировали 1 мкг безмаркерных конструкций pCOX1, pCta1 и pCyd1.После инкубации в жидкой среде BG-11 в течение 4 дней и на чашках с агаром, содержащим Suc, в течение следующих 1-2 недель трансформанты накладывали на чашки с канамицином и Suc. Suc-устойчивые, чувствительные к канамицину штаммы, содержащие немаркированную делецию, подтверждали с помощью ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих удаленную область (дополнительный рисунок S1). Затем были использованы одиночные мутантные линии для создания двойных мутантных линий, а затем тройной мутант с использованием того же метода. Секвенирование генома MiSeq штаммов дикого типа и ƊCOX / Cyd выполняли с использованием персонального секвенатора Illumina MiSeq и анализировали с помощью Artemis.

ОТ-ПЦР

РНК

выделяли из клеток Synechocystis дикого типа и хранили в реагенте Trizol (Invitrogen) перед гомогенизацией в течение 1 мин с использованием микробитера Biospec. РНК очищали в соответствии с протоколом реагентов Trizol с последующим расщеплением ДНКазой и дальнейшей очисткой с использованием набора RNeasy (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя. Обратную транскриптазу SuperScript II (Invitrogen) использовали для создания комплементарной ДНК со случайными гексамерами в соответствии с инструкциями производителя.Комплементарную ДНК разводили в 5 раз перед ОТ-ПЦР. Один микролитр использовали в ПЦР с полимеразой GoTaq и амплификациях (95 ° C в течение 2 минут, 30 циклов 95 ° C в течение 1 минуты, 60 ° C в течение 1 минуты и 72 ° C в течение 0,5 минут, затем 72 ° C в течение 5 мин) в соответствии с инструкциями производителя. Фрагменты, охватывающие область между ctaE1 и trxA , были генерированы с использованием праймеров ctaE1trxAfor и ctaE1trxArev, в пределах trxA с использованием праймеров trxAfor и trxArev, в пределах cruF с использованием праймеров cruF12 и trxArev и cruF121 с использованием праймеров cruF12 и cruF122 и cruF121 праймеры cruFctaC2for и cruFctaC2rev.Праймеры были проверены путем амплификации геномной ДНК. Образцы RT использовали в качестве отрицательного контроля.

Характеристика роста мутантов

Все штаммы инокулировали с использованием культур, выращенных в условиях от умеренной до поздней логарифмической фазы, а затем культивировали при непрерывном умеренном освещении (40 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ), непрерывном сильном свете (150 мкмоль фотонов м ^-2 с ⁻¹ ), 12-часовое переключение между прямоугольными волнами умеренного света / темноты или 12-часовое переключение между светом и темнотой.В этих экспериментах клетки, культивированные в темноте, поддерживали при 30 ° C, но не встряхивали. Модифицированный светоизлучающий диодный (LED) фотобиореактор с X-контроллером (Infors) и фотобиореактор Algem Labscale использовались для обеспечения синусоидального входного света, имитирующего 12-часовой день с восходом солнца в 8 утра и пиковой интенсивностью в полдень 180 мкмоль фотонов. м ⁻² с ⁻¹ (дополнительный рисунок S2F). Культуры перемешивали, продувая колбы воздухом. Поглощение измеряли при 680 и 750 нм для количественного определения хлорофилла и плотности клеток.Количество хлорофилла измеряли для определения фотообесцвечивания путем вычитания значения OD 750 нм из значения OD 680 нм и умножения общего количества на 10,854. Существовала сильная корреляция ( r ² = 0,9854) при определении концентрации хлорофилла между этим методом и хорошо зарекомендовавшим себя протоколом количественного определения хлорофилла, как описано ранее (Porra et al., 1989; Bombelli et al., 2011; Supplemental Fig. . S3). Это количество было разделено на значение OD 750 нм, чтобы получить уровень хлорофилла на клетку в произвольных единицах.Для всех сравнений использовали парный тест Стьюдента t , при этом P <0,05 считали статистически значимым.

Измерение кислорода

Все измерения кислорода проводились в среде BG-11 при 30 ° C с использованием камер жидкофазных кислородных электродов DW1 с измерителями Oxygraph (Hansatech Instruments). Расход кислорода измеряли в темноте. Для экспериментов по выделению кислорода холодный белый свет с интенсивностью 1500 или 150 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 (как указано) обеспечивался с использованием светодиодных ламп MR16 (Deltech).Для измерений фотосинтеза образцы отбирали в каждый момент времени из инкубационной смеси для измерения массы сухих клеток и выделения кислорода. Для экспериментов по фотоингибированию линкомицин добавляли до конечной концентрации 200 мкг / мл ^-1 и подвергали либо постоянному свету, либо циклу пульсации 5 мин включения / 5 мин выключения. Все измерения были стандартизованы по массе сухих клеток. Для измерения массы сухих клеток 20 мл культуры удаляли, один раз промывали дистиллированной водой, фильтровали и сушили перед измерением.

Измерения гликогена

Анализы внутриклеточного гликогена выполняли, как описано Osanai et al. (2005). Один миллилитр культуры суспендировали в 3,5% (об. / Об.) Серной кислоте и кипятили в течение 40 мин. К этому добавляли 1 мл —-толуидина (Sigma) и реакционную смесь кипятили в течение 10 минут. Glc, полученный кислотным гидролизом, определяли количественно, измеряя A ₆₃₀ и сравнивая со стандартами Glc.

Измерения окислительного повреждения

Клетки дважды промывали фосфатно-солевым буфером, ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере и добавляли DCHF-DA до конечной концентрации 5 мкм (Rastogi et al., 2010). Образцы инкубировали при 30 ° C в темноте в течение 30 минут, и флуоресценцию количественно определяли с использованием флуориметра DMG FLUOstar optima +, используя длину волны возбуждения 485 нм и длину волны излучения 520 нм. Флуоресценцию клеточных образцов без DCHF-DA вычитали из измерений клетки + DCHF-DA и стандартизировали по сухой массе клеток. В качестве положительного контроля добавляли MV до конечной концентрации 100 мкм, и клетки либо подвергали 30-минутному освещению (40 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 ), либо инкубировали в темноте перед количественным определением.

Дополнительные данные

В онлайн-версии статьи доступны следующие материалы.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим Адриана Барбрука, Паоло Бомбелли и Алистера Маккормика (Кембриджский университет), а также Дэвида Паркера, Эндрю Мерфи и Карину Алмейду Ленеро (Shell Global Solutions) за полезные обсуждения, а также Ника Масгроува и Дэниела Брюхера из Infors за использование модифицированный светодиодный фотобиореактор. Мы признаем Algenuity (www.algenuity.com) за щедрую ссуду фотобиореактора Algem Labscale. Мы благодарим Шайло Диккенса и Роберта Брэдли (Кембриджский университет) за секвенирование и анализ генома MiSeq.

Глоссарий

• cyt b ₆ f

  цитохром b ₆ f комплекс

• RT

• DC50003

  DA 2 ‘, 7’-дихлордигидрофлуоресцеина диацетат

• DCF

• MV

• RFU

  единицы относительной флуоресценции

• LED

  0003 DCIT

• (

  2000

  )

  Структура убихинолоксидазы из Escherichia coli и ее сайт связывания убихинона

  .

  Nat Struct Biol

  7

  :

  910

  —

  917

  (

  2010

  )

  Неоднородность протеома тилакоидной мембраны Synechocystis 6803

  .

  J Протеомика

  73

  :

  976

  —

  991

  (

  1990

  )

  Базовый инструмент поиска местного выравнивания

  .

  Дж Мол Биол

  215

  :

  403

  —

  410

  (

  2008

  )

  Альтернативный фотосинтетический поток электронов к кислороду у морских Synechococcus

  .

  Biochim Biophys Acta

  1777

  :

  269

  —

  276

  (

  1994

  )

  Обнаружение и характеристика цианобактериальных генов nifH

  .

  Appl Environ Microbiol

  60

  :

  880

  —

  887

  (

  2001

  )

  Сегрегация азотфиксации и кислородного фотосинтеза у морских цианобактерий Trichodesmium

  .

  Наука

  294

  :

  1534

  —

  1537

  (

  2002

  )

  Маршруты транспорта электронов в целых клетках Synechocystis sp. штамм PCC 6803: роль оксидазы цитохрома bd-типа

  .

  Биохимия

  41

  :

  3422

  —

  3429

  и другие. (

  2011

  )

  Количественный анализ факторов, ограничивающих передачу солнечной энергии Synechocystis sp.PCC 6803 в биологических фотоэлектрических устройствах

  .

  Энергетика и экология

  4

  :

  4690

  —

  4698

  (

  1999

  )

  Мутации в гене Arabidopsis IMMUTANS вызывают пестрый фенотип за счет инактивации терминальной оксидазы хлоропластов, связанной с десатурацией фитоена

  .

  Растительная ячейка

  11

  :

  57

  —

  68

  (

  1988

  )

  Методы культивирования цианобактерий

  .

  Методы Enzymol

  167

  :

  68

  —

  93

  (

  2001

  )

  Сукцинатдегидрогеназа и другие респираторные пути в тилакоидных мембранах Synechocystis sp. штамм PCC 6803: сравнение емкости и физиологическая функция

  .

  Дж Бактериол

  183

  :

  4251

  —

  4258

  (

  1997

  )

  Дихлородигидрофлуоресцеин и дигидрородамин 123 являются чувствительными индикаторами пероксинитрита in vitro: значение для внутриклеточного измерения активных форм азота и кислорода

  .

  Оксид азота

  1

  :

  145

  —

  157

  (

  1998

  )

  Исследования окислительного повреждения, вызванного экстрактом цианобактерий в первичных культивируемых гепатоцитах крыс

  .

  Environ Res

  78

  :

  12

  —

  18

  (

  1986

  )

  Роль дыхания в адаптации пресноводной цианобактерии Synechococcus 6311 к солености

  .

  Arch Biochem Biophys

  244

  :

  686

  —

  691

  (

  2007

  )

  Ингибирование дыхания и ассимиляции нитратов усиливает выделение фотоводорода при низких концентрациях кислорода у Synechocystis sp. РСС 6803

  .

  Biochim Biophys Acta

  1767

  :

  161

  —

  169

  (

  2011

  )

  Молекулярная биология акклиматизации цианобактериальных солей

  .

  FEMS Microbiol Ред.

  35

  :

  87

  —

  123

  (

  2005

  )

  Терминальные оксидазы цианобактерий

  .

  Biochem Soc Trans

  33

  :

  832

  —

  835

  (

  2002

  )

  Активные формы кислорода и УФ-B: влияние на цианобактерии

  .

  Photochem Photobiol Sci

  1

  :

  729

  —

  736

  (

  2011

  )

  Концевая оксидаза пластид 2 (PTOX2) является основной оксидазой, участвующей в хлороспирации у Chlamydomonas

  .

  Proc Natl Acad Sci USA

  108

  :

  20820

  —

  20825

  (

  1999

  )

  НАДН-дегидрогеназа 2 типа в цианобактериях Synechocystis sp. штамм PCC 6803 участвуют в регуляции, а не в дыхании

  .

  Дж Бактериол

  181

  :

  3994

  —

  4003

  (

  1998

  )

  Хинол и цитохромоксидазы у цианобактерий Synechocystis sp.РСС 6803

  .

  Биохимия

  37

  :

  17944

  —

  17951

  (

  2006

  )

  Протеомный скрининг вызванных солевым стрессом изменений плазматических мембран Synechocystis sp. штамм PCC 6803

  .

  Протеомика

  6

  :

  910

  —

  920

  (

  2002

  )

  Протеомика Synechocystis sp.штамм PCC 6803: идентификация белков плазматической мембраны

  .

  Протеомика клеток Mol

  1

  :

  956

  —

  966

  (

  1986

  )

  Новый тип N ₂ — фиксирующая одноклеточная цианобактерия (сине-зеленая водоросль)

  .

  FEMS Microbiol Lett

  36

  :

  109

  —

  110

  (

  1993

  )

  Воздействие солевого стресса на цианобактерии Synechocystis PCC6803 вызывает согласованные изменения дыхания и фотосинтеза

  .

  Физиология растительных клеток

  34

  :

  1073

  —

  1079

  (

  1990

  )

  Мутанты цианобактерии Synechocystis PCC6803 с нарушением дыхания и непереносимостью высоких концентраций соли

  .

  FEMS Microbiol Lett

  68

  :

  125

  —

  129

  и другие. (

  1996

  )

  Анализ последовательности генома одноклеточной цианобактерии Synechocystis sp.штамм PCC6803. II. Определение последовательности всего генома и назначение потенциальных участков, кодирующих белок (приложение)

  .

  ДНК Res

  3

  :

  185

  —

  209

  (

  2010

  )

  Разработка платформы для фотосинтетического производства изопрена в цианобактериях с использованием Synechocystis в качестве модельного организма

  .

  Metab Eng

  12

  :

  70

  —

  79

  (

  2012

  )

  Контроль путей переноса электронов посредством окислительно-восстановительного перераспределения респираторных комплексов

  .

  Proc Natl Acad Sci USA

  109

  :

  11431

  —

  11436

  Matthijs HCP, Lubberding HJ (1988) Темное дыхание у цианобактерий. В Л. Дж. Роджерс, Дж. Р. Галлон, ред., Биохимия водорослей и цианобактерий. Clarendon Press, Oxford, pp 131–145

  (

  2011

  )

  Гибкость фотосинтетического транспорта электронов: физиологическая роль терминальной оксидазы пластохинола (PTOX)

  .

  Biochim Biophys Acta

  1807

  :

  954

  —

  967

  (

  1995

  )

  Тилакоидный мембраносвязанный, NADPH-специфический пиридин-нуклеотиддегидрогеназный комплекс опосредует циклический перенос электронов в цианобактериях Synechocystis sp PCC-6803

  .

  Физиология растительных клеток

  36

  :

  661

  —

  668

  (

  2006

  )

  Характеристика двух оперонов цитохромоксидазы у морских цианобактерий Synechococcus sp.PCC 7002: инактивация ctaDI влияет на соотношение PS I: PS II

  .

  Photosynth Res

  87

  :

  215

  —

  228

  (

  2000

  )

  Два типа функционально различных НАД (Ф) Н дегидрогеназ у Synechocystis sp. штамм PCC6803

  .

  J Biol Chem

  275

  :

  31630

  —

  31634

  (

  2001

  )

  Локализация НАД (Ф) Н дегидрогеназы в цианобактериях Synechocystis sp.штамм PCC 6803

  .

  Дж Бактериол

  183

  :

  4938

  —

  4939

  (

  2005

  )

  Положительная регуляция катаболических путей сахара у цианобактерий Synechocystis sp. PCC 6803 по сигма-фактору группы 2 sigE

  .

  J Biol Chem

  280

  :

  30653

  —

  30659

  (

  1994

  )

  Корреляция между иммунными метками и активностью цитохром с оксидазы (типа Aa (3)) в мембранах цианобактерий, подвергшихся солевому стрессу

  .

  FEMS Microbiol Lett

  124

  :

  431

  —

  437

  (

  2004

  )

  Дыхательная цепь сине-зеленых водорослей (цианобактерий)

  .

  Physiol Plant

  120

  :

  358

  —

  369

  (

  2001

  )

  Характеристика трех биоэнергетически активных терминальных оксидаз дыхательных путей у цианобактерий Synechocystis sp. штамм PCC 6803

  .

  FEMS Microbiol Lett

  203

  :

  217

  —

  222

  (

  2007

  )

  Протеомика Synechocystis sp. PCC 6803: идентификация новых интегральных белков плазматической мембраны

  .

  FEBS J

  274

  :

  791

  —

  804

  (

  1989

  )

  Определение точных коэффициентов экстинкции и одновременных уравнений для анализа хлорофилла-a и хлорофилла-b, экстрагированных 4 различными растворителями: проверка концентрации стандартов хлорофилла с помощью атомно-абсорбционной спектроскопии

  .

  Biochim Biophys Acta

  975

  :

  384

  —

  394

  (

  2010

  )

  Обнаружение активных форм кислорода (АФК) зондом, чувствительным к окислителям 2 ‘, 7’-дихлородигидрофлуоресцеина диацетат в цианобактериях Anabaena variabilis PCC 7937

  .

  Biochem Biophys Res Commun

  397

  :

  603

  —

  607

  (

  1987

  )

  Картридж nptI-sacB-sacR для конструирования направленных немаркированных мутаций в грамотрицательных бактериях с помощью мутагенеза с обменом маркером-вытеснением

  .

  Джин

  57

  :

  239

  —

  246

  (

  2002

  )

  Разрешение экотипов Prochlorococcus и Synechococcus с использованием внутренних транскрибированных спейсерных последовательностей 16S-23S рибосомальной ДНК

  .

  Appl Environ Microbiol

  68

  :

  1180

  —

  1191

  (

  2009

  )

  Фотосинтетический окислительно-восстановительный дисбаланс влияет на секционирование листьев у Arabidopsis thaliana variegation мутантов immutans , пятнистый , var1 и var2

  .

  Растительная ячейка

  21

  :

  3473

  —

  3492

  (

  2009

  ) Локализация комплексов цитохрома b (6) f предполагает наличие неполной дыхательной цепи в цитоплазматических мембранах цианобактерий Synechocystis sp. PCC 6803. Biochim Biophys Acta 1787: 1479–1485

  (

  1993

  )

  Распределение полипептидов фотосистемы-I и фотосистемы-II между цитоплазматической и тилакоидной мембранами цианобактерий

  .

  FEMS Microbiol Lett

  110

  :

  341

  —

  347

  (

  2005

  )

  Протеомные исследования тилакоидной мембраны Synechocystis sp. РСС 6803

  .

  Протеомика

  5

  :

  4905

  —

  4916

  (

  2003

  )

  Температура не включает N ₂ -фиксирующие гетероцистные цианобактерии в тропических океанах

  .

  Природа

  425

  :

  504

  —

  507

  (

  1997

  )

  Ферментация цианобактерий

  .

  FEMS Microbiol Ред.

  21

  :

  179

  —

  211

  (

  2009

  )

  Противоположные реакции фотосинтеза на солевой стресс у гликофита Arabidopsis и галофита Thellungiella: роль терминальной оксидазы пластид как альтернативного стока электронов

  .

  Plant Physiol

  149

  :

  1154

  —

  1165

  (

  2005

  )

  Доказательства альтернативных стоков электронов фотосинтетической ассимиляции углерода у высокогорных растений вида Ranunculus glacialis

  .

  Среда растительных клеток

  28

  :

  1123

  —

  1135

  (

  2010

  )

  Углеводный обмен у мутантов цианобактерии Synechococcus elongatus PCC 7942, дефектной по синтезу гликогена

  .

  Appl Environ Microbiol

  76

  :

  3153

  —

  3159

  (

  1998

  )

  Цианобактерии, лишенные супероксиддисмутазы железа, сенсибилизированы к окислительному стрессу, индуцированному метилвиологеном, но не сенсибилизированы к окислительному стрессу, индуцированному норфлуразоном

  .

  Plant Physiol

  116

  :

  1593

  —

  1602

  (

  2001

  ) Фотосинтез и дыхание у цианобактерий: Энциклопедия наук о жизни. Macmillan Publishers Ltd., Бейзингстоук, Великобритания

  (

  1988

  )

  Конструирование специфических мутаций в фотосинтетическом реакционном центре фотосистемы II методами генной инженерии в Synechocystis 6803

  .

  Методы Enzymol

  167

  :

  766

  —

  778

  (

  2004

  )

  Множественные делеции небольших Cab-подобных белков в цианобактериях Synechocystis sp.PCC 6803: последствия для биосинтеза и накопления пигментов

  .

  J Biol Chem

  279

  :

  27971

  —

  27979

  (

  2008

  )

  Глобально распространенные некультивируемые океанические цианобактерии, фиксирующие N ₂ , не имеют кислородной фотосистемы II

  .

  Наука

  322

  :

  1110

  —

  1112

  (

  2004

  )

  Экспрессия и функциональные роли двух различных комплексов NDH-1 и комплекса поглощения углерода NdhD3 / NdhF3 / CupA / Sll1735 в Synechocystis sp PCC 6803

  .

  Заводская ячейка

  16

  :

  3326

  —

  3340

  (

  2012

  )

  Operon flv4-flv2 обеспечивает цианобактериальную фотосистему II с гибкостью переноса электронов

  .

  Plant Cell

  24

  :

  1952

  —

  1971

  (

  2008

  )

  Глобальная филогеография морских Synechococcus и Prochlorococcus выявляет четкое разделение ветвей между океаническими биомами

  .

  Environ Microbiol

  10

  :

  147

  —

  161

  Заметки автора

  © Американское общество биологов растений, 2013 г. Все права защищены.

  © Автор (ы) 2013. Опубликовано Oxford University Press от имени Американского общества биологов растений. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0 /), что разрешает неограниченное повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

  % PDF-1.4 % 1 0 объект > поток 2020-11-13T16: 54: 26-05: 00pdftk 1.44 — www.pdftk.com2021-11-02T16: 37: 09-07: 002021-11-02T16: 37: 09-07: 00iText 4.2.0 от 1T3XTapplication / pdfuuid: 01b498ea-e561-4931-877c-58e0fa4e019fuuid: 9815d1f6-5a9f-4876-81c6-392fcd25ecb4

• Рубин Тейа Кусум
• Сити Aisyah
• Путрите Nurhayati Pertami
• Sisqina Уой Sukmawati
Сити Humairah
• Мухаммад Dahrul
• Nazopatul Патонах Хар
• Putri Lailatul Bintari
• Vania Rahmawaty
• Muh Raka Adithya Pahlefi
• Irfan Abdurrahman
• Sejahtera
• Irmansyah
• Irzaman конечный поток эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > поток xX͎7) H ~ «VtoAN).