Тмг 630 расшифровка: Трансформатор ТМГ 630 10 0,4 кВА Купить цена

Содержание

Трансформатор ТМГ 630 6 0,4 масляный 353 290 руб.

Трансформатор ТМГ 630 6 0,4 технические характеристки
СРОК СЛУЖБЫ 25 ЛЕТ

При вводе в эксплуатацию трансформатор ТМГ 25 не требует дополнительных расходов, не нуждается в профилактических ремонтах в течение срока службы. Масло не соприкасается с воздухом и не окисляется


Соответствуют ГОСТ № 52719-2007


Имеет сейсмостойкость 9 баллов

Перед отгрузкой электротехническое оборудование проверяется, испытывается и полностью готово к эксплуатации
В комплекте поставляются:паспорт и протокол испытаний

Номинальная мощность, кВА

630

Номинальное напряжение на стороне ВН, кВ

6

Номинальное напряжение на стороне НН, кВ

0,4

Схема соединения

У/Ун-0 (звезда-звезда), Д/Ун-11 (треугольник-звезда), У/Zн-11 (звезда-зигзаг)

Климатическое исполнение и категория размещения

У1, УХЛ1

Материал обмоток

Алюминий (алюминиевый), медь (медный)

Допустимая температура эксплуатации

от -45 до +40 °С (У1), от -60 до +40 °С (УХЛ1)

Нормативные документы

ГОСТ 12577, ГОСТ 30830, ГОСТ Р 52719-2007, МЭК – 76

Сейсмостойкость

9 баллов

Гарантия

3 года

Конструкция трансформаторов ТМГ

Баки трансформаторов ТМГ прямоугольной формы без маслорасширителя. Для подъема бака и трансформатора в сборе используются крюки, расположенные под верхней рамой бака. На крышке бака имеется кран (пробка) для залива масла, внизу бака имеются пробка для спуска масла, кран (пробка) для взятия пробы, болт заземления. Вводы ВН и НН расположены на крышке.

В герметичных трансформаторах типа ТМГ масло не соприкасается с воздухом и не окисляется. Они не требуют дополнительных расходов при вводе в эксплуатацию и не нуждаются в профилакти-ческих ремонтах ревизиях в течении всего срока службы и отпадает необходимость в анализе и реге-нерации масла. Уровень масла в трансформаторах контролируется визуально по указателю уровня масла, который расположен на стенке бака. При наличии указателя предельного уровня масла, до-полнительный контроль предельного нижнего уровня осуществляется визуально по наличию индика-тора в стеклянной колбе.

По желанию заказчика возможна:

  • ● установка катков в трансформаторах, которые служат для продольного и поперечного переме-щения трансформаторов;
  • ● установка пробивного предохранителя на стороне низкого напряжения;
  • ● установка контактных зажимов;
  • ● для измерения температуры верхних слоев масла, на крышке трансформатора может устанавли-ваться спиртовой или электроконтактный термометр.
    Возможна установка термометрического сиг-нализатора;
  • ● для контроля внутреннего давления и сигнализации о предельно допустимых величинах давле-ния устанавливаются мановакуумметры;

Структура условного обозначения (Расшифровка)

ТМГ — Х/6(10) У(ХЛ)1 — Х

  • ● Т – трансформатор трехфазный,
  • ● М – охлаждение масляное с естественной циркуляцией воздуха и масла,
  • ● Г – герметичный,
  • ● Х – номинальная мощность, кВА,
  • ● 6(10) – класс напряжения обмотки ВН, кВ,
  • ● У(ХЛ)1 – климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15150-69;

Технические данные и габаритно-весовые характеристики

1 — ввод НН;

2 — ввод ВН;

4 — табличка паспортная;

5 — петли подъемные;

6 — пробка для слива масла;

7 — привод переключателя;

10 — клемма заземления;

11 — маслоуказатель;

12 — радиатор;

13 — клапан сброса давления;

14 — мембранно-предохранительное устройство.

Номинальная мощность трансформаторов, кВт

Потери, Вт

Ток ХХ, %

Напряжение КЗ,%

Габаритные размеры, мм 

Масса, кг

ХХ

КЗ

ТМГ-630

1050

7600

2

5,5

1820х1150х1910

1950

Изучаем технические характеристики трансформаторов ТМ и ТМГ

15.05.2020 Новости партнеров

В данной статье вы узнаете о технических характеристиках трансформаторов ТМ и ТМГ 630 ква (10 0.4).

Трансформатором называется прибор, преобразующий поступающее значение тока или напряжения в нужную величину. Данный процесс происходит при помощи пропускания электрической энергии через массу обмоток проводникового материала. Обычно в качестве него используется электротехническая медь и алюминий.

Обмотки навиваются на тонкие и наборные металлические пластины определенной формы -сердечники. В зависимости от используемого напряжения сети, они выполняются в 1, 2 и 3-х штыревой конфигурации. Промышленная величина напряжения соответствует 3-м фазам и 380 вольт, а сам набор напоминает буквенное ш-образное исполнение. При протекании энергии через навитый сердечник образуется электромагнитное поле и уменьшается ток или напряжение. А приобрести это и другое промышленное оборудование предлагает ООО » Эгир».

Область применения

Благодаря наличию 3-фазного напряжения возможна работа производственных предприятий. Это основной стандарт, принятый практически во всех странах мира. Получается он только при наличии силовых понижающих аппаратов. Общая схема получения электроэнергии представляет из себя цепочку устройств. Первоначально она вырабатывается генератором на электростанции. Затем поэтапно на силовых трансформаторах происходит уменьшение напряжения на стандартные значения. В конечном итоге она становится равной 400 В и неся определенные потери в сетях уменьшается до тех самых 380 В.

Расчет и выбор

Основными входными показателями являются 35, 10 и 6 Кв. Мощность, т. е. возможность работы, напрямую связана с общей потребляемой нагрузкой предприятия. Именно отталкиваясь от нее и выбирают соответствующий аппарат.

Наиболее распространенным на производстве являются образцы с номиналом 630 Ква. Они представляют из себя громоздкое и сложное оборудование с определенными параметрами, которые сведены в характеристики трансформатора 630 и служат основным ориентиром при конкретном выборе.

Основные модели

Производители изготавливают несколько основных модификаций данного оборудования. Наиболее распространен выпуск так называемых масляных силовых трансформаторов. Они имеют два вида:

  • ТМ — трансформатор масляный;
  • ТМГ или ТМЗ — трансформатор масляный герметичный (закрытый).

Оба вида представляют из себя крупногабаритную металлическую конструкцию объемной прямоугольной формы. Внутри находится ш-образный сердечник с навитыми на него изолированными медными, или алюминиевыми шинами.

Его объем определен в паспорте, где находятся все технические характеристики трансформатора ТМ 630 и прочих моделей с подробным описанием. Оно служит охлаждающей жидкостью при работе оборудования. Большая величина температуры вспышки будет гарантией работоспособности и пожаробезопасности аппарата. Оно должно содержаться с определенным процентом влажности. Для его поддержания предназначен специальный состав реагента-силикагель. На верхней крышке расположены фарфоровые изоляторы и расширительный бак для доливки масла.

Различия и расшифровка характеристик

Рассмотрим характеристики трансформатора ТМ 630 и сравним их с другой моделью исполнения. В целом они состоят из набора числовых и буквенных обозначений:

  • входного напряжения. Оно соответствует 35, 10, 6 Кв;
  • выходного напряжения. Массово используется 0,4 Кв;
  • вид исполнения;
  • схемы и группы соединения высокой и низкой стороны;
  • значение тока короткого замыкания;
  • потери мощности в процентном отношении;
  • величины холостого хода;
  • номинального тока высокой и низкой стороны;
  • массы и масла.

Описанный трансформатор 630 Ква, технические характеристики которого приведены выше, считается наиболее массово применяемым во всех сферах производства. Установку и монтаж производят в отдельном помещении-подстанции. Учитывая солидный вес, для удобства в передвижении он снабжен небольшими колесными парами и устанавливается на рельсы.

В отличие от просто масляного, герметичный аппарат отличается только внешним видом. Здесь отсутствует расширительный бак. Корпус состоит из большего числа охладительных «рубашек». Долив масла не предусмотрен, оно рассчитано на гарантированный производителем срок эксплуатации изделия.

Городская черта предусматривает основным параметром входного напряжения 6 Кв. В сельской местности чаще используют 10 Кв. На всех устройствах предусмотрено переключение в нужный формат. Достаточно снять верхнюю крышку корпуса и произвести переустановку схемы соединений, которая выполняется по схеме «звезда», «треугольник», или их комбинации. Поэтому трансформатор ТМГ 630 10 0,4 характеристики не поменяет, и никаких потерь при этом не возникает.

Достоинства

Оба вида отличаются простотой конструкции, надежностью и безаварийностью в работе. Основными мероприятиями по поддержанию и увеличению срока службы оборудования будут периодические осмотры и доливка масла. В целом, трансформатор ТМГ 630 10 характеристики которого идентичны ТМ 630 6 великолепно зарекомендовал себя в любых условиях работы.

Трансформатор тмг 10 10 0 4, 400, 1000, 630 и 250

►+УСПЕЙ ТМГ 250 10 0,4 кВ Трансформатор цена производителя (Масляный Герметичный Силовой) Напряжение ток У1 УХЛ1 Мощность 250 кВт Технические Характеристики вес размер схема тип СЭЩ Минск (НОВЫЙ 2019)

100% Готов к работе

Паспорт и протокол испытаний

Без посредников!

Блок: 1/11 | Кол-во символов: 356
Источник: https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

Производство Россия. Купите без посредников!

Срок службы 25 лет

При вводе в эксплуатацию трансформатор ТМГ 250 не требует дополнительных расходов, не нуждается в профилактических ремонтах в течение срока службы. Масло не соприкасается с воздухом и не окисляется

Перед отгрузкой электротехническое оборудование проверяется, испытывается и полностью готово к эксплуатации
В комплекте поставляются:паспорт и протокол испытаний

Номинальная мощность, кВА Номинальное напряжение на стороне ВН, кВ Номинальное напряжение на стороне НН, кВ Схема соединения Климатическое исполнение и категория размещения Материал обмоток Допустимая температура эксплуатации Нормативные документы Сейсмостойкость Гарантия

250

0,4

У/Ун-0 (звезда-звезда), Д/Ун-11 (треугольник-звезда), У/Zн-11 (звезда-зигзаг)

У1, УХЛ1

Алюминий (алюминиевый), медь (медный)

от -45 до +40 °С (У1), от -60 до +40 °С (УХЛ1)

ГОСТ 125077, ГОСТ 30830, ГОСТ Р 52719-2007, МЭК – 76

9 баллов

3 года

Блок: 2/11 | Кол-во символов: 1016
Источник: https://Transformator-energum. ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

Технические данные и габаритно-весовые характеристики

1 — ввод НН;

2 — ввод ВН;

4 — табличка паспортная;

5 — петли подъемные;

6 — пробка для слива масла;

7 — привод переключателя;

10 — клемма заземления;

11 — маслоуказатель;

12 — радиатор;

13 — клапан сброса давления;

14 — мембранно-предохранительное устройство.

Номинальная мощность трансформаторов, кВт

Потери, Вт

Ток ХХ, %

Напряжение КЗ,%

Габаритные размеры, мм 

Масса, кг

ХХ

КЗ

ТМГ-25

130

630

3,2

4,5

780х650х850

290

ТМГ-40

160

900

4,5

780х760х920

350

ТМГ-63

210

1300

2,8

4,5

780х760х990

410

ТМГ-100

290

1970

2,6

4,5

1100х870х1640

790

ТМГ-160

440

2650

2,4

4,7

1250х920х1680

990

ТМГ-250

550

3100

2,3

4,5

1420х990х1740

1300

ТМГ-400

800

5500

2,1

4,5

1650х1080х1780

1650

ТМГ-630

1050

7600

5,5

1820х1150х1910

1950

ТМГ-1000

1550

10200

5,5

2000х1250х2100

2890

ТМГ-1250

1650

12400

2150х1250х2100

3000

ТМГ-2500

1650

12400

2150х1250х2100

3000

Трансформаторы заправленны трансформаторным маслом типа ГК и в комплекте 4 контактных зажима
Оборудование всех марок проходит обязательную проверку и испытание, что подтверждают справочные паспортные данные устройство таблица эксплуатации номинальные токи параметры сопротивления обмотка Трансформатор ТМГ 250 10 0,4

Блок: 5/11 | Кол-во символов: 1630
Источник: https://Transformator-energum. ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

Конструкции и виды устройства

В конструкции этого трансформатора используется масло, которое предназначается для охлаждения устройства. Также с его помощью можно обеспечить изоляцию между внутренним напряжением. Трансформаторное масло обязательно должно иметь высокую температуру. Если необходимо значительно улучшить изоляцию, тогда можно использовать внешние радиаторы. Существует также мощный силовой трансформатор ТМГ 250, 400 или 630 (мощность устройства может составлять до 1000 Ква). Этот трансформатор имеет специальные вентиляторы и масляные насосы, которые отвечают за охлаждение.

Высоковольтный трехфазный трансформатор ТМГСУ во время работы он может подвергаться процессам сушки с помощью автономного отопления. Благодаря этому вы легко сможете предотвратить формирование коронки и разнообразные электрические пробои от высокой нагрузки.

Масляные трансформаторы высокого напряжения ТМГ 10 10 0 4 с контролем реле также могут иметь газовое реле. Эти защитные устройства также могут использоваться для обнаружения газа внутри трансформаторы. Для автоматического контроля работы реле трансформатора специалисты устанавливают автоматы, которые могут отвечать за отключение устройств при перенапряжении. Понижающий трансформатор может иметь внезапное реле, которое сможет отключить устройство при перегреве. В большинстве случаев вы сможете увидеть, что деталь является встроенной и устанавливается с использованием 3 проводков. При необходимости можете прочесть про тороидальный трансформатор.

Блок: 3/6 | Кол-во символов: 1502
Источник: http://FasadDomStroy.ru/otdelka-doma-dizajn/transformator-tmg-10-10-0-4-400-1000-630-i-250.html

Конструкция трансформаторов ТМГ

Баки трансформаторов ТМГ прямоугольной формы без маслорасширителя. Для подъема бака и трансформатора в сборе используются крюки, расположенные под верхней рамой бака. На крышке бака имеется кран (пробка) для залива масла, внизу бака имеются пробка для спуска масла, кран (пробка) для взятия пробы, болт заземления. Вводы ВН и НН расположены на крышке.

В герметичных трансформаторах типа ТМГ масло не соприкасается с воздухом и не окисляется. Они не требуют дополнительных расходов при вводе в эксплуатацию и не нуждаются в профилакти-ческих ремонтах ревизиях в течении всего срока службы и отпадает необходимость в анализе и реге-нерации масла. Уровень масла в трансформаторах контролируется визуально по указателю уровня масла, который расположен на стенке бака. При наличии указателя предельного уровня масла, до-полнительный контроль предельного нижнего уровня осуществляется визуально по наличию индика-тора в стеклянной колбе.

По желанию заказчика возможна:

  • ● установка катков в трансформаторах, которые служат для продольного и поперечного переме-щения трансформаторов;
  • ● установка пробивного предохранителя на стороне низкого напряжения;
  • ● установка контактных зажимов;
  • ● для измерения температуры верхних слоев масла, на крышке трансформатора может устанавли-ваться спиртовой или электроконтактный термометр. Возможна установка термометрического сиг-нализатора;
  • ● для контроля внутреннего давления и сигнализации о предельно допустимых величинах давле-ния устанавливаются мановакуумметры;

Блок: 3/11 | Кол-во символов: 1538
Источник: https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

Данные по расшифровке

ТМ-100/10-77У1 — трансформатор с охлаждением масляного типа c двумя обмотками, тремя фазами, первоначальная мощность 100 кВА, напряжение 10 кВ, чертеж и схема 1977 г., стандарты советские, используется на открытом пространстве либо в хорошее вентилируемом помещении;
ТСЗ-100/10-75УЗ — защищенный трансформатор сухого исполнения, отлично противостоит сильным перепадам напряжения, первоначальная мощность 100 кВА, напряжение 10 кВ, чертеж и схема 1977 г., можно устанавливать в помещениях;
ТРДНС-40000/35 74Т1 — низковольтный трансформатор, имеет расщепленную двойную обмотку, двухфазный. Разрешается эксплуатировать в помещении с вентиляцией, на улицах или в подсобных строениях с РПН для собственных нужд электростанций. Первоначальная мощность 40 MBА, напряжение 35 кВ, строение 1974 г., может работать в очень жарком климате;
АТДЦНТ-125000/220/110-98У1 — автотрансформатор с охлаждением масляного типа, двумя обмотками, тремя фазами и уникальной по исполнению системой выброса газов, с РПН, первоначальная мощность 125 MBА, обмотка типа ВН, напряжение 220 кВ, обмотка СН, напряжение 110 кВ, конструкция 1998 г., может работать на улице.

Фото — Трансформатор

Советы по использованию:

  • Точка вспышки (мин) и температура застывания (макс.) 140С и -6 с, соответственно. Диэлектрическая прочность соединений составляет 12 МВ/м (RMS) но для эксплуатации в условиях производства нужно получить сопротивление >24 МВ/м (RMS). Для этого применяют силовые модели ТМГФ, АТМГ, ТМЗ, ТМГМШ и прочие;
  • Для использования в бытовых условиях внутри помещений или вблизи легковоспламеняющихся предметов, нужно использовать либо сухие трансформаторы, либо оснащенные реле защиты;
  • Для применения в производственных сферах, электрики советуют модели типа СЭЩ, которые помогают не только нормализовать напряжение, но и способствуют экономии электроэнергии;
  • Чтобы ускорить охлаждение трансформатора, рекомендуется установить дополнительные гофрированные стенки;
  • Измерение температуры масла внутри устройства осуществляется при помощи специальной гильзы, в которую вставляется промышленный термометр из закаленного стекла, ни в коем случае его нельзя сливать при включенном приборе;
  • Перед тем, как купить трансформатор серии ТМГ, изучите его паспорт, производство, некоторые модели работают только на масле определенного типа.

Блок: 4/6 | Кол-во символов: 2396
Источник: http://www.wikitransformer.ru/stati/transformator-tmg-10-10-0-4-400-1000-630-i-250.html

Структура условного обозначения (Расшифровка)

ТМГ — Х/6(10) У(ХЛ)1 — Х

  • ● Т – трансформатор трехфазный,
  • ● М – охлаждение масляное с естественной циркуляцией воздуха и масла,
  • ● Г – герметичный,
  • ● Х – номинальная мощность, кВА,
  • ● 6(10) – класс напряжения обмотки ВН, кВ,
  • ● У(ХЛ)1 – климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15150-69;

Блок: 4/11 | Кол-во символов: 353
Источник: https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

Инструкция по использованию

Если вы планируете осуществлять работу с устройством, тогда необходимо изучить правила его использования. Также вам необходимо помнить, что устройство считается достаточно опасным. Если вы используете трансформатор ТМГ, тогда изучите рекомендации по использованию:

  1. Работу с устройством необходимо осуществлять только в удобной одежде.
  2. Нельзя осуществлять работу с устройством, которое имеет вмятины и трещины.
  3. Постарайтесь регулярно проверять КТП на количество масла в баке.
  4. Перед началом работы устройства проверьте его на работоспособность.
  5. Для хранения трансформатора, вам может потребоваться сухое помещение.

Блок: 5/6 | Кол-во символов: 641
Источник: http://DekorMyHome.ru/remont-i-oformlenie/transformator-tmg-10-10-0-4-400-1000-630-i-250.html

Инструкции погрузки / разгрузки

Стоимость и сроки на монтаж, пусконаладочные работы и установку Трансформатор ТМГ 250 10 0,4
так же информацию о сметах и типовых проектах уточняйте по телефону +7 (982) 366-66-60

Блок: 6/11 | Кол-во символов: 267
Источник: https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

Ремонт ревизия Трансформатор ТМГ 250 10 0,4

    Осуществляем работы:
  • Ремонт
  • Ревизия
  • Покраска
  • Реставрация
  • Модернизация
  • Капремонт
  • Капревизия

▼ Посмотрите фото нашего завода ▼

    Блок: 7/11 | Кол-во символов: 259
    Источник: https://Transformator-energum. ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

    Поставка в России и СНГ

    Как правило срок доставки занимает от 1 до 5 дней

    Блок: 9/11 | Кол-во символов: 75
    Источник: https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

    Транспортная компания

    Договор с компанией сокращает
    время и стоимость до 2-х раз!

    Блок: 10/11 | Кол-во символов: 85
    Источник: https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html

    Кол-во блоков: 15 | Общее кол-во символов: 10118
    Количество использованных доноров: 4
    Информация по каждому донору:
    1. https://Transformator-energum.ru/tmg/tmg-250-10-0-4-489.html: использовано 9 блоков из 11, кол-во символов 5579 (55%)
    2. http://FasadDomStroy.ru/otdelka-doma-dizajn/transformator-tmg-10-10-0-4-400-1000-630-i-250.html: использовано 1 блоков из 6, кол-во символов 1502 (15%)
    3. http://www.wikitransformer.ru/stati/transformator-tmg-10-10-0-4-400-1000-630-i-250.html: использовано 1 блоков из 6, кол-во символов 2396 (24%)
    4. http://DekorMyHome. ru/remont-i-oformlenie/transformator-tmg-10-10-0-4-400-1000-630-i-250.html: использовано 1 блоков из 6, кол-во символов 641 (6%)

Трансформатор ТМЖ 630/27.5/0.4 | Vektorenergo.ru

Трансформатор масляный ТМЖ 27,5/0,4кВ 195 Просмотры

Описание

Трансформатор ТМЖ 630/27.5/0.4 – это стационарное устройство, предназначенное для преобразования электрической энергии. Служит для электроснабжения потребителей от контактной сети железной дороги.
Трансформатор имеет расширительный бачок обеспечивающий подержание уровня масла при расширении в результате нагрева и охлаждения.

Условное обозначение ТМЖ 630/27.5/0.4

Т — Трансформатор
М — Маслянный
Ж — Железнодорожный
630 — Мощность 630 кВА
27,5  — Напряжение на высокой стороне 27,5 кВ 
0,4 — Напряжение на низкой 0,4 кВ

Условия эксплуатации ТМЖ 630/27.

5/0.4
  • Высота размещения трансформатора над уровнем моря не более 1000 м.
  • Режим работы трансформатора – длительный.
  • Рабочее положение — вертикальное.
  • Климатическое исполнение «У», категория размещения 3 по ГОСТ 15150.
  •   Установка в районах с умеренным климатом.
  •   Температура окружающего воздуха от — 45°С до плюс 40°С.
  • Относительная влажность воздуха (по ГОСТ 15543.1) не более 80% при 15°С и 630% при 25°С.
  • Окружающая среда невзрывоопасная, не содержащая пыли в концентрациях, снижающих параметры изделий в недопустимых пределах.

Как купить трансформатор ТМЖ 630/27.5/0.4

Узнать стоимость и сроки поставки вы можете:

  • позвонив по телефону 8-800-250-30-76
  • заказав обратный звонок с сайта
  • отправив заявку через форму «узнать цену и сроки поставки»

Мы рассмотрим ваше обращение и предложим вам лучший вариант из того, что у нас есть!

Проверьте также

Содержание: ОписаниеУсловное обозначение ТМЖ 2500/27. 5/0.4Условия эксплуатации ТМЖ 2500/27.5/0.4Как купить трансформатор ТМЖ 2500/27.5/0.4 Описание Трансформатор ТМЖ …

FTO контролирует обратимое метилирование РНК m6Am во время биогенеза мяРНК

  • 1.

    Хаджиолов А.А., Венков П.В., Цанев Р.Г. Фракционирование рибонуклеиновых кислот центрифугированием в градиенте плотности и электрофорезом в агаровом геле: сравнение. Анал. Biochem. 17 , 263–267 (1966).

    CAS Статья Google ученый

  • 2.

    Дрейфус, Г., Филипсон, Л. и Маттай, И. В. Рибонуклеопротеиновые частицы в клеточных процессах. J. Cell. Биол. 106 , 1419–1425 (1988).

    CAS Статья Google ученый

  • 3.

    Люрманн Р. Функции U-snRNP. Мол. Биол. Реп. 14 , 183–192 (1990).

    Артикул Google ученый

  • 4.

    Кункель, Г. Р., Мазер, Р. Л., Кальвет, Дж. П. и Педерсон, Т. Малая ядерная РНК U6 транскрибируется РНК-полимеразой III. Proc. Natl Acad. Sci. США 83 , 8575–8579 (1986).

  • 5.

    Дальберг, Дж. Э. и Лунд, Э. Структура и экспрессия генов U-мяРНК. Мол. Биол. Реп. 12 , 139–143 (1987).

    CAS Статья Google ученый

  • 6.

    Baillat, D. et al. Интегратор, мультипротеиновый медиатор процессинга малой ядерной РНК, связывается с С-концевым повтором РНК-полимеразы II. Cell 123 , 265–276 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • 7.

    Кори С. и Адамс Дж. М. Модифицированные 5′-концы в малых ядерных РНК клеток миеломы мыши. Мол. Биол. Реп. 2 , 287–294 (1975).

    CAS Статья Google ученый

  • 8.

    Busch, H., Reddy, R., Rothblum, L. & Choi, Y.C SnRNAs, SnRNPs, и процессинг РНК. Annu. Rev. Biochem. 51 , 617–654 (1982).

    CAS Статья Google ученый

  • 9.

    Mattaj, I. W. Cap-триметилирование U мяРНК является цитоплазматическим и зависит от связывания белка U мяРНП. Cell 46 , 905–911 (1986).

    CAS Статья Google ученый

  • 10.

    Матера А. Г. и Ван З. Один день из жизни сплайсосомы. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 15 , 108–121 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 11.

    Пеллиццони, Л. Сопровождение биогенеза рибонуклеопротеидов в здоровье и болезни. EMBO Rep. 8 , 340–345 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • 12.

    Патель, С. Б. и Беллини, М. Сборка сплайсосомной малой ядерной рибонуклеопротеидной частицы. Nucleic Acids Res. 36 , 6482–6493 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 13.

    Шукла С. и Паркер Р. Контроль качества мяРНК U1 с дефектной сборкой путем декапирования и экзонуклеолитического расщепления с 5′-на-3 ‘. Proc. Natl Acad. Sci. США 111 , E3277 – E3286 (2014).

  • 14.

    Ishikawa, H. et al. Идентификация укороченных форм мяРНК U1 выявляет новый путь деградации РНК во время биогенеза мяРНП. Nucleic Acids Res. 42 , 2708–2724 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 15.

    Кариджолич Дж. И Ю. Ю. Т. Сплайсосомные модификации мяРНК и их функции. RNA Biol. 7 , 192–204 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 16.

    Pendleton, K. E. et al. МнРНК U6 m 6 Метилтрансфераза METTL16 регулирует удержание интрона SAM-синтетазы. Ячейка 169 , 824–835.e14 (2017).

  • 17.

    Jia, G. et al. N 6 -Метиладенозин в ядерной РНК является основным субстратом FTO, связанного с ожирением. Nat. Chem. Биол. 7 , 885–887 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 18.

    Jia, G. et al. Окислительное деметилирование 3-метилтимина и 3-метилурацила в одноцепочечных ДНК и РНК мышиными и человеческими FTO. FEBS Lett. 582 , 3313–3319 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 19.

    Mauer, J. et al. Обратимое метилирование m 6 A m в 5′-кепке контролирует стабильность мРНК. Природа 541 , 371–375 (2017).

    CAS Статья Google ученый

  • 20.

    Wei, C., Gershowitz, A. & Moss, B.N 6 , O 2 ‘-Диметиладенозин — новый метилированный рибонуклеозид, расположенный рядом с 5’-концом мРНК животных клеток и вирусов. Nature 257 , 251–253 (1975).

  • 21.

    Kruse, S. et al. Новый метод синтеза и обнаружения кэп-ассоциированных модификаций аденозина в мРНК мыши. Sci. Отчет 1 , 126 (2011).

    Артикул Google ученый

  • 22.

    Гесс, М.E. et al. Ген, связанный с жировой массой и ожирением (от до ), регулирует активность дофаминергической цепи среднего мозга. Nat. Neurosci. 16 , 1042–10489 (2013).

  • 23.

    Редди Р., Хеннинг Д., Эпштейн П. и Буш Х. Первичная и вторичная структура мяРНК U2. Nucleic Acids Res. 9 , 5645–5658 (1981).

    CAS Статья Google ученый

  • 24.

    Linder, B. et al. Картирование с разрешением одного нуклеотида m6A и m6Am по всему транскриптому. Nat. Методы 12 , 767–772 (2015).

    CAS Статья Google ученый

  • 25.

    Fischer, J. et al. Инактивация гена Fto защищает от ожирения. Природа 458 , 894–898 (2009).

  • 26.

    Mowry, K. L. & Steitz, J. A. Идентификация человеческого snRNP U7 как одного из нескольких факторов, участвующих в созревании 3′-конца гистоновых пре-мессенджерных РНК. Наука 238 , 1682–1687 (1987).

    CAS Статья Google ученый

  • 27.

    Jawdekar, G. W. & Henry, R. W. Регуляция транскрипции генов малых ядерных РНК человека. Биохим. Биофиз. Acta 1779 , 295–305 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 28.

    Bohnsack, M. T. & Sloan, K. E.Модификации малых ядерных РНК и их роль в сборке и функционировании сплайсосом. Biol. Chem. 399 , 1265–1276 (2018).

    CAS Статья Google ученый

  • 29.

    Wei, J. et al. Дифференциальный m 6 A, m 6 A m и m 1 Деметилирование, опосредованное FTO в ядре и цитоплазме клетки. Мол. Ячейка 71 , 973–985.e5 (2018).

    CAS Статья Google ученый

  • 30.

    Хогевег, П. и Конингс, Д. А. МРНК U1: эволюция ее первичной и вторичной структуры. J. Mol. Evol. 21 , 323–333 (1984–1985).

  • 31.

    Брингманн, П. и Лурманн, Р. Антитела, специфичные к N 6 -метиладенозин, реагируют с интактными snRNP U2 и U4 / U6. FEBS Lett. 213 , 309–315 (1987).

    CAS Статья Google ученый

  • 32.

    Yang, Y. et al. Клеточная линия UOK 262, фумаратгидратазодефицитный (FH- / FH-) наследственный лейомиоматоз почечно-клеточная карцинома: модель аберрантного энергетического метаболического пути при раке человека in vitro и in vivo. Cancer Genet. Cytogenet. 196 , 45–55 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 33.

    Gerken, T. et al. Связанный с ожирением ген FTO кодирует 2-оксоглутарат-зависимую деметилазу нуклеиновых кислот. Наука 318 , 1469–1472 (2007).

  • 34.

    Aik, W. et al. Структурная основа ингибирования жировой массы и белка, связанного с ожирением (FTO). J. Med. Chem. 56 , 3680–3688 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 35.

    Уорд, П.S. et al. Общей чертой связанных с лейкемией мутаций IDh2 и IDh3 является активность неоморфного фермента, превращающего α-кетоглутарат в 2-гидроксиглутарат. Раковая ячейка. 17 , 225–234 (2010).

  • 36.

    Wang, F. et al. Направленное ингибирование мутантного IDh3 в лейкозных клетках вызывает клеточную дифференцировку. Наука 340 , 622–626 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 37.

    Rohle, D. et al. Ингибитор мутантного IDh2 задерживает рост и способствует дифференцировке клеток глиомы. Наука 340 , 626–630 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 38.

    Bennett Saidu, N.E. et al. Диметилфумарат очень цитотоксичен для раковых клеток с мутацией KRAS, но сохраняет неканцерогенные клетки. Oncotarget 9 , 9088–9099 (2018).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 39.

    Gabanella, F. et al. Дефекты сборки рибонуклеопротеидов коррелируют с тяжестью спинальной мышечной атрофии и преимущественно влияют на подмножество сплайсосомных snRNP. PLoS One 2 , e921 (2007).

    Артикул Google ученый

  • 40.

    Lotti, F. et al. Зависящее от SMN событие сварки U12, необходимое для работы цепи двигателя. Cell 151 , 440–454 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 41.

    Zhao, X. et al. FTO-зависимое деметилирование N 6 -метиладенозина регулирует сплайсинг мРНК и необходимо для адипогенеза. Cell Res. 24 , 1403–1419 (2014).

  • 42.

    Bartosovic, M. et al. N6-метиладенозиндеметилаза FTO нацелена на пре-мРНК и регулирует альтернативный сплайсинг и процессинг 3′-конца. Nucleic Acids Res. 45 , 11356–11370 (2017).

    CAS Статья Google ученый

  • 43.

    Wei, J. et al. Дифференциальный m 6 A, m 6 Am и m 1 Деметилирование, опосредованное FTO в ядре и цитоплазме клетки. Мол. Ячейка 71 , 973–985.e975 (2018).

    CAS Статья Google ученый

  • 44.

    Su, R. et al. R-2HG проявляет противоопухолевую активность за счет нацеливания на FTO / m 6 A / MYC / CEBPA Signaling. Cell 172 , 90–105.e123 (2018).

    CAS Статья Google ученый

  • 45.

    Ke, S. et al. m 6 Модификации мРНК депонируются в формирующейся пре-мРНК и не требуются для сплайсинга, но определяют цитоплазматический оборот. Genes Dev. 31 , 990–1006 (2017).

    CAS Статья Google ученый

  • 46.

    Pomeranz Krummel, D. A., Oubridge, C., Leung, A.К., Ли, Дж. И Нагаи, К. Кристаллическая структура сплайсосомного U1 snRNP человека при разрешении 5,5 A. Природа 458 , 475–480 (2009).

    CAS Статья Google ученый

  • 47.

    Фьюри, М. Г. и Зив, Г. В. Созревание и стабильность мяРНК U6. Exp. Cell Res. 228 , 160–163 (1996).

    CAS Статья Google ученый

  • 48.

    Dvinge, H. Компоненты РНК сплайсосомы регулируют тканеспецифичный альтернативный сплайсинг. bioRxiv Препринт на https://doi.org/10.1101/326983 (2018).

  • 49.

    Zhang, Z. et al. Дефицит SMN вызывает тканеспецифические нарушения в репертуаре мяРНК и широко распространенные дефекты сплайсинга. Cell 133 , 585–600 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 50.

    Kaida, D. et al. U1 snRNP защищает пре-мРНК от преждевременного расщепления и полиаденилирования. Природа 468 , 664–668 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 51.

    Dobin, A. et al. STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель RNA-seq. Биоинформатика 29 , 15–21 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 52.

    Робинсон, Дж. Т. и др. Программа просмотра интегративной геномики. Nat. Biotechnol. 29 , 24–26 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 53.

    Лав М. И., Хубер В. и Андерс С. Умеренная оценка кратного изменения и дисперсии данных РНК-seq с помощью DESeq2. Геном. Биол. 15 , 550 (2014).

    Артикул Google ученый

  • 54.

    Carissimi, C., Saieva, L., Gabanella, F. & Pellizzoni, L. Gemin8 необходим для построения и функционирования комплекса двигательных нейронов выживания. J. Biol. Chem. 281 , 37009–37016 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • 55.

    Monecke, T., Dickmanns, A. & Ficner, R. Структурные основы гиперметилирования m7G-cap малой ядерной, малой ядрышковой и теломеразной РНК диметилтрансферазой TGS1. Nucleic Acids Res. 37 , 3865–3877 (2009).

    CAS Статья Google ученый

  • 56.

    Schulz, D. & Rentmeister, A. Ферментный высокопроизводительный анализ для скрининга активности РНК-метилтрансферазы в клеточном лизате E. coli . RNA Biol. 9 , 577–586 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 57.

    Chen, Q. et al. Ненаправленный анализ метаболитов в плазме выявляет широкие системные последствия инактивации ксантин оксидоредуктазы у мышей. PLoS One 7 , e37149 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 58.

    Кац, Ю., Ван, Э. Т., Эйрольди, Э. М. и Бердж, К. Б. Анализ и дизайн экспериментов по секвенированию РНК для определения регуляции изоформ. Nat. Методы 7 , 1009–1015 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 59.

    Elemento, O., Slonim, N. & Tavazoie, S. Универсальная основа для открытия регуляторных элементов во всех геномах и типах данных. Мол. Cell 28 , 337–350 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • 60.

    Ray, D. et al. Сборник РНК-связывающих мотивов для расшифровки регуляции генов. Природа 499 , 172–177 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • SEC.gov | Превышен порог скорости запросов

    Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматизированных инструментов. Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов за пределами допустимой политики и будет обрабатываться до тех пор, пока не будут приняты меры по объявлению вашего трафика.

    Объявите свой трафик, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

    Чтобы узнать о передовых методах эффективной загрузки информации с SEC.gov, в том числе о последних документах EDGAR, посетите sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте о программе открытых данных SEC, включая передовые методы, которые делают загрузку данных более эффективной, и улучшения SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценариям. Для получения дополнительной информации свяжитесь с opendata @ sec.губ.

    Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

    Код ссылки: 0.14ecef50.1636844308.6fbff93c

    Дополнительная информация

    Политика безопасности в Интернете

    Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности. В целях безопасности и обеспечения того, чтобы общедоступная служба оставалась доступной для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузки или изменения информации или иного причинения ущерба, включая попытки отказать пользователям в обслуживании.

    Несанкционированные попытки загрузить информацию и / или изменить информацию в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры 1996 года (см. Раздел 18 USC §§ 1001 и 1030).

    Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не влияет на возможность доступа других пользователей к SEC.содержание правительства. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, которые отправляют чрезмерное количество запросов. Текущие правила ограничивают пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества машин, используемых для отправки запросов.

    Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса (-ов) могут быть ограничены на короткий период. Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.губ. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерного автоматического поиска на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, чтобы повлиять на людей, просматривающих веб-сайт SEC.gov.

    Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы гарантировать, что веб-сайт работает эффективно и остается доступным для всех пользователей.

    Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

    границ | Циркадный контроль метаболизма часовым компонентом TOC1

    Введение

    Циркадная функция особенно важна для растений, регулируя почти все аспекты роста, развития и реакции на внутренние и внешние сигналы (Greenham and McClung, 2015).Циркадные молекулярные схемы были в значительной степени исследованы в модельной системе растений Arabidopsis thaliana (Sanchez and Kay, 2016). Важным компонентом циркадного осциллятора Arabidopsis является регулятор псевдоответа, известный как TIMING OF CAB EXPRESSION1 / PSEUDO RESPONSE REGULATOR1 (TOC1 / PRR1) (Strayer et al., 2000; Makino et al., 2002). Ритмичная экспрессия генов и накопление белка TOC1 важны для контроля циркадного периода с помощью часов (Strayer et al., 2000; Макино и др., 2002; Más et al., 2003a, b; Гендрон и др., 2012; Хуанг и др., 2012; Похилко и др., 2012; Fung-Uceda et al., 2018). TOC1 выполняет свою функцию путем репрессии экспрессируемых утром и вечером генов осцилляторов, лежащих в основе часов (Gendron et al., 2012; Huang et al., 2012; Pokhilko et al., 2012). На многие ритмические выходы влияет неправильная экспрессия TOC1, включая, среди прочего, клеточный цикл (Fung-Uceda et al., 2018), связанные с возрастом изменения циркадного периода в листьях (Kim et al., 2016), роста (Más et al., 2003a, b; Yamashino et al., 2008) или времени цветения (Somers et al., 1998; Más et al., 2003b; Niwa et al., 2007).

    Циркадные часы влияют на время метаболизма у животных, и, таким образом, нарушение часов приводит к метаболическим нарушениям (Xu et al., 2008; Dibner and Schibler, 2015; Gill et al., 2015; Brown, 2016). У растений метаболизм в основном зависит от двух связанных с энергией органелл: хлоропластов и митохондрий (Sweetlove and Fernie, 2013). Хлоропласты превращают световую энергию в сахар, тогда как митохондрии превращают питательные вещества в энергию для удовлетворения энергетических потребностей клеток (Millar et al., 2011). Фотодыхание также поставляет большое количество НАДН в митохондрии (Lim et al., 2020). Фотосинтез в хлоропластах и ​​митохондриальное дыхание тесно связаны (Nunes-Nesi et al., 2011), но осуществляют почти противоположные реакции. Таким образом, эти действия должны быть точно скоординированы синхронно с внутренним клеточным статусом и внешними условиями. Фумарат является одним из промежуточных продуктов цикла TCA (Nunes-Nesi et al., 2013), который накапливается в больших количествах в листьях Arabidopsis из-за активности двух ферментов фумаразы (фумаратгидратазы) (FUM) (FUM1 и FUM2). (Чиа и др., 2000; Araújo et al., 2011). Arabidopsis Активность FUM2 составляет большую часть накопления фумарата в листьях (Chia et al., 2000; Nunes-Nesi et al., 2007). FUM2 Экспрессия и накопление фумарата следуют суточным колебаниям (Chia et al., 2000; Nunes-Nesi et al., 2007; Pracharoenwattana et al., 2010) с более высоким накоплением в течение светового периода. Фумарат и крахмал были предложены в качестве альтернативных поглотителей углерода для фотосинтата (Chia et al., 2000; Tschoep et al., 2009; Pracharoenwattana et al., 2010).

    Связь циркадных часов с хлоропластами и фотосинтетической активностью была твердо установлена ​​(McClung et al., 2000; Dodd et al., 2005; Haydon et al., 2013; Noordally et al., 2013; Atkins and Dodd, 2014). ). Сообщалось также о Diel или циркадных ритмах в связанной с метаболизмом экспрессии генов или накоплении белка (McClung et al., 2000; Michalecka et al., 2003; Blasing et al., 2005; Elhafez et al., 2006; Gibon et al. , 2006; Ли и др., 2010; Flis et al., 2019). Использование мутантных растений с одним, двумя и тремя часами показало измененную экспрессию генов и нарушение накопления органических кислот и других метаболитов (Fukushima et al., 2009; Sanchez-Villarreal et al., 2013; Flis et al., 2019), что указывает на что циркадные часы важны для правильного обмена веществ. Здесь мы объединяем широкий спектр подходов, включая исследования транскрипции, метаболомики, иммунопреципитации хроматина (ChIP) и генетического взаимодействия, чтобы показать, что функция TOC1 важна для контроля клеточного метаболизма, по крайней мере частично, посредством осцилляторной регуляции экспрессии фумаразы.Мы предполагаем, что TOC1 может функционировать как реостат в регуляции метаболизма синхронно с дневным и ночным циклами.

    Материалы и методы

    Растительный материал, условия выращивания и анализ люминесценции

    Arabidopsis thaliana Линии (Columbia, Col-0) стерилизовали с поверхности, сушили на стерильной фильтровальной бумаге в шкафу с ламинарным потоком и высевали на чашки, содержащие агаровую среду Murashige и Skoog (MS) с добавлением или без добавления (как указано для каждого эксперимента) с 3% (мас. / Об.) Сахарозы.После 48 часов стратификации при 4 ° C в темноте чашки переносили в камеры с контролируемой средой (Inkoa Sistemas), и растения выращивали в различных фотопериодических условиях (короткие дни, ShD, 8 часов света: 16 часов темноты; длинные дни, LgD, 16 часов света: 8 часов темноты; LD, 12 часов света: 12 часов темноты) в течение 10–14 дней с 60–100 мкмоль м –2 с –1 холодным белым флуоресцентным светом при 22 ° C. Для экспериментов в условиях постоянного освещения растения, синхронизированные в циклах свет / темнота, переводили на постоянный свет (LL) на 2 дня перед сбором образцов.TOC1-ox (Huang et al., 2012), TOC1 RNAi (Más et al., 2003a), toc1-2 (NASC, N2107710) и TMG-YFP / toc1-2 (Huang et al., 2012) растения были описаны в другом месте. Трансформацию растений проводили по протоколам окунания цветов с использованием переноса, опосредованного Agrobacterium tumefaciens (GV2260) (Clough and Bent, 1998). In vivo Люминесцентный анализ проводили, как описано ранее (Takahashi et al., 2015). Вкратце, 6-дневные проростки, синхронизированные в циклах LD, переносили в 96-луночные планшеты и выпускали в условия LL.Анализы выполняли на люминометре LB960 (Berthold Technologies) с использованием программного обеспечения Microwin (Mikrotek Laborsysteme).

    Конструкция плазмиды

    Конструкцию FUM2-ox получали с помощью ПЦР-опосредованной амплификации кодирующей последовательности FUM2 (CDS) с последующим субклонированием в вектор pENTR / D-TOPO (Invitrogen). Полученный вектор, содержащий FUM2 CDS, использовали для трансформации химически компетентных клеток Escherichia coli (однократные клетки TOP10, Gateway ® ).CDS FUM2 вводили в растительный вектор-получатель pGWB514 (35S pro, C-3xHA) (Nakagawa et al., 2007a, b) путем гомологичной рекомбинации с использованием реакции LR (Gateway ® ). Векторы экспрессии (содержащие CDS FUM2 , слитые с тегом 4x-MYC и экспрессируемые под контролем промотора 35S) также использовали для трансформации химически компетентных клеток E. coli (однократный TOP10, Gateway ® ). Растения WT и TOC1-ox трансформировали конструкцией FUM2-ox для получения единственного растения FUM2-ox и двойного растения FUM2-ox / TOC1-ox, соответственно.

    Количественная ПЦР для экстракции РНК и обратной транскрипции

    Около 20 проростков через 12–14 дней после стратификации (das) собирали каждые 4 часа в течение суточного или циркадного цикла. РНК очищали с использованием набора Maxwell 16 LEV simple RNA Tissue (Promega). РНК инкубировали с не содержащей РНКаз TURBO-ДНКазой (Ambion) для устранения загрязнения геномной ДНК. Одноцепочечную кДНК синтезировали с использованием 1 мкг РНК с использованием iScript TM Supermix для обратной транскрипции для RT-Q-PCR (Bio-rad) или набора для синтеза кДНК AffinityScript Q-PCR (Agilent).Для анализа кПЦР кДНК разводили в пять раз водой, свободной от нуклеаз, и кПЦР выполняли с 10% разведенной кДНК с помощью Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green Master Mix (Agilent) или iTag Universal SYBR Green Supermix (Bio-Rad) в 96-луночная система обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96 Touch (Bio-Rad). В качестве контроля использовали ген ИЗОПЕНТЕНИЛПИРОФОСФАТ: ДИМЕТИЛАЛЛИЛПИРОФОСФАТ ИЗОМЕРАЗА 2 ( IPP2 ) (Huang et al., 2012). Данные были проанализированы с использованием метода максимума второй производной.Полученные значения Cp были преобразованы в значения относительной экспрессии с использованием сравнительного метода Ct (Livak and Schmittgen, 2001).

    Измерения аденилата с помощью ВЭЖХ

    Содержание АДФ и АТФ измеряли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с 20 мг растительного сырья в сыром виде (Zhang et al., 2020). Вкратце, 0,2 мл 0,1 М HCl смешивали с растительным материалом на льду. 15 мкл экстракта / стандарта (разной концентрации) смешивали с 77 мкл буфера CP [62 мМ, моногидрат лимонной кислоты и 76 мМ (Na) 2 HPO 4 × 2H 2 O] и 8 мкл 45% хлорацетальдегида и инкубируют при 80 ° C в течение 10 мин.Затем смесь центрифугировали при 16000 × g при 20 ° C в течение 30 минут. Затем 90 мкл супернатанта измеряли с помощью ВЭЖХ [колонка Hyperclone C18 (ODS) (Phenomenex)]. Результат рассчитывали с использованием стандартного градиента АДФ и АТФ.

    Анализы иммунопреципитации хроматина

    Анализ иммунопреципитации хроматина

    проводили, как описано ранее (Perales and Más, 2007). Примерно 1 г проростков 12–14 дней отбирали во время Zeitgeber Time 7 (ZT7) и циркадном времени 7 (CT7 для TOC1-ox и каждые 4 часа для растений TMG.Образцы фиксировали в 30 мл ледяного буфера для фиксации (0,4 М сахароза, 10 мМ Трис -HCl pH 8,0, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ PMSF, 1% формальдегид, 0,05% Тритон X-100) в течение 15 мин под давлением. вакуум. Фиксацию останавливали добавлением ледяного глицина 0,125 М и инкубацией в вакууме в течение 5 мин. Затем проростки трижды промывали ледяной водой и сушили. Полученные проростки растирали в жидком азоте и порошок дважды фильтровали через чудо. Экстракцию проводили экстракционным буфером I (0.4 M сахароза, 10 мМ Tris -HCl pH 8,0, 5 мМ β-меркаптоэтанол, 1 мМ PMSF, 5 мкг / мл лейпептин, 1 мкг / мл апротинин, 5 мкг / мл антипаин, 1 мкг / мл, пепстатин, 5 мкг / мл химостатина и 50 мкМ MG132). Затем ядра очищали центрифугированием при 4 ° C в течение 20 мин при 1000 g . Ядра промывали четыре раза центрифугированием при 4 ° C в течение 20 мин при 1000 г с 2 мл экстракционного буфера II (0,25 M сахароза, 10 мМ Tris -HCl pH 8,0, 10 мМ MgCl2, 1% Triton X- 100, 5 мМ β-меркаптоэтанол, 1 мМ PMSF, 5 мкг / мл лейпептина, 1 мкг / мл апротинина, 5 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл пепстатина, 5 мкг / мл химостатина и 50 мкМ MG132).Ядра ресуспендировали в 1 мл буфера для лизиса ядер (50 мМ Tris -HCl pH 8,0, 10 мМ EDTA, 1% SDS, 5 мкг / мл лейпептина, 1 мкг / мл апротинина, 5 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл. мл пепстатина, 5 мкг / мл химостатина и 50 мкМ MG132). 300 мкл хроматина обрабатывали ультразвуком до фрагментов размером примерно 500–1000 п.н. с помощью ультразвукового устройства (Bioruptor Next Generation, Diagenode). После центрифугирования при 12000 × g в течение 10 минут при 4 ° C 100 мкл растворимого хроматина (супернатант) разбавляли в 400 мкл буфера для разбавления ChIP (15 мМ Tris -HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% Triton-X-100, 1 мМ EDT, 1 мМ PMSF, 5 мкг / мл лейпептина, 1 мкг / мл апротинина, 5 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл пепстатина, 5 мкг / мл Химостатина и 50 мкМ MG132) и инкубировали в течение ночи при 4 ° C с 50 мкл магнитных шариков (Dynabeads, протеин G, Invitrogen) и с 1: 1000 (-) антителом против MYC (Sigma-Aldrich) для анализов с TOC1-ox. растения или антитела против GFP (Invitrogen от Thermo Fisher Scientific) для анализов с растениями TMG (Invitrogen). Иммунокомплексы дважды промывали 900 мкл буфера с низким содержанием соли (20 мМ Tris -HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% Triton X-100, 0,1% SDS, 2 мМ EDTA), дважды по 900 мкл высокосолевого буфера (20 мМ Tris-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 1% Triton X-100, 0,1 % SDS, 2 мМ EDTA), дважды 900 мкл промывочного буфера LiCl (10 мМ Tris -HCl pH 8,0, 0,25 М LiCl, 1% NP-40, 1% дезоксихолат натрия, 1 мМ EDT) и дважды 900 мкл мкл буфера ТЕ (10 мМ Трис -HCl pH 8,0, 1 мМ EDT). Иммунокомплексы элюировали 300 мкл 1% SDS и 0,1 М NaHCO3 с последующим 1 ч при 65 ° C для разрыва связей между антителами и белками.Затем добавляли 220 мМ NaCl для осаждения ДНК после инкубации в течение ночи при 65 ° C для обратного перекрестного связывания. Иммунопреципитированная ДНК выделялась с использованием набора QIAquick (Qiagen), следуя инструкциям производителя. Чипы количественно оценивали с помощью анализа QPCR с использованием 96-луночной системы обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96 Touch (BioRad). Расчет точки пересечения (Cp) использовался для количественной оценки с использованием анализа абсолютной количественной оценки методом 2-го максимума производной. Значения ChIP для каждого набора праймеров были нормализованы к входным значениям.

    Профилирование метаболитов на основе ГХ-МС

    Анализы метаболитов были выполнены в основном, как описано ранее (Lisec et al., 2006). Вкратце, проростки собирали в указанные моменты времени, немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C до дальнейшего анализа. Экстракцию метаболита проводили путем быстрого измельчения в жидком азоте и немедленного добавления буфера для экстракции (1,400 мкл метанола плюс 60 мкл 0,2 мг рибита на мл –1 воды). Экстракцию, дериватизацию, добавление стандарта и ввод образца проводили, как описано (Lisec et al., 2006) с небольшими доработками в оборудовании. Автоматический пробоотборник Gerstel Multi-Purpose system (Gerstel GmbH & Co., KG, Mülheim an der Ruhr, Германия) использовался для ввода образцов в хроматограф, соединенный с системой времяпролетного масс-спектрометра (GC-MS), Leco. Pegasus HT TOF-MS (LECO Corporation, Сент-Джозеф, Мичиган, США). Метаболиты были идентифицированы путем сравнения с записями в базе данных аутентичных стандартов (Kopka et al., 2005; Schauer et al., 2005). Хроматограммы и масс-спектры оценивали с помощью Chroma TOF 1.0 (Leco) и программное обеспечение TagFinder 4.0 (Luedemann et al., 2012). Относительное содержание метаболитов рассчитывали путем нормализации интенсивности сигнала по отношению к интенсивности сигнала рибита, который был добавлен в качестве внутреннего стандарта, и по свежему весу материала. Все данные также обрабатывались с использованием программного обеспечения Xcalibur 4.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) для проверки идентификации и аннотации метаболитов. Идентификация и аннотация обнаруженных пиков следовали рекомендациям по представлению данных о метаболитах (Fernie et al., 2011).

    Фенотипирование розетки

    Целые розетки 35-дневных проростков, растущих в почвенных горшках, отделяли и немедленно взвешивали на прецизионных весах (аналитические весы OHAUS Pioneer PA114C) для расчета свежего веса. Отделенные розетки немедленно помещали на трансиллюминатор и фотографировали (NIKON D7000) для дальнейшего анализа. Изображения розетки были обработаны с помощью программы ImageJ (Schneider et al., 2012). Сначала изображения были разделены с помощью инструмента цвета RGB. Затем изображения с синим каналом были преобразованы в 8-битные черно-белые изображения.После того, как для всех образцов была установлена ​​одна и та же шкала, были определены розетки с помощью инструмента отслеживания палочки и были получены площадь и периметр.

    Результаты

    Циркадная регуляция транскриптома, кодируемого ядерными митохондриями

    Для определения осцилляторной транскрипции ядерно-кодируемых генов, связанных с митохондриями, мы использовали веб-инструмент DIURNAL (Mockler et al., 2007; Michael et al., 2008) и обнаружили, что около 65% генов, связанных с митохондриями (Chrobok и другие., 2016) демонстрировали колебательный паттерн экспрессии в условиях диэлита с фазами распространения пика, но особенно обогащались в середине ночи на ZT17-22 (рис. 1A). Анализ динамики времени с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-QPCR) подтвердил суточные колебания выбранных генов, принадлежащих к митохондриальным метаболическим путям (рисунки 1C, D и дополнительные рисунки 1A – J). Чтобы убедиться, что колебательный паттерн экспрессии контролируется циркадными часами, мы также использовали веб-инструмент DIURNAL (Mockler et al., 2007; Michael et al., 2008) и выполнили анализ в условиях LL. Наши исследования показали, что около 42% генов, связанных с митохондриями, демонстрируют циркадные колебания (рис. 1B). Эти результаты были также подтверждены анализами RT-QPCR (дополнительные рисунки 1K – T). Кроме того, анализ промоторов ACONITASE1 ( ACO1 ) и ALTERNATIVE NAD (P) H DEHYDROGENASE 1, ( NDA1 ), слитых с LUCIFERASE , также выявил ритмическую активность промоторов в обоих условиях (рисунки и 1). , F).В целом, данные веб-инструмента DIURNAL, наши анализы RT-QPCR и активности промоторов указывают на диэльские и циркадные колебания некоторых ядерно-кодируемых митохондриальных генов.

    Рис. 1. Диэль и циркадные колебания экспрессии митохондриальных генов. Пиковые фазы экспрессии генов, связанных с митохондриями, представлены на радиальных графиках в условиях (A) LDHC и (B) LL_LDHC. Радиальная ось: 24-й рассвет или субъективный рассвет; 12-сумерки, или субъективные сумерки.Анализ динамики с помощью RT-QPCR (C) ACONITASE 1 ( ACO1 ) и (D) МИТОХОНДРИАЛЬНАЯ ПИРУВАТДЕГИДРОГЕНАЗА СУБЪЕКТ 2-1 ( PDh4 ) экспрессия гена в суточных условиях. Данные представлены как среднее + SEM. Активность промотора (E) ACO1 , слитого с LUCIFERASE ( ACO1: LUC ) и (F) , АЛЬТЕРНАТИВА NAD ( P ) H DEHYDROEDGENASE к H DEHYDROEDGENASE 1 LUC ( NDA1: LUC ) в суточных условиях и в режиме холостого хода.Данные представлены как среднее + SEM. Белые и серые области на панелях (A, C – F) представляют день и ночь соответственно. Белые и пунктирные области на панелях (B, E, F) представляют субъективный день и субъективную ночь соответственно. Для всех экспериментов были выполнены три биологические повторы, с растениями, выращиваемыми независимо, и с образцами, собранными, обработанными и проанализированными в разное время.

    TOC1 регулирует циркадную экспрессию митохондриальных генов

    Предыдущие транскриптомные профили показали, что компоненты часов PRR9, 7 и 5 могут быть важны для контроля метаболизма (Fukushima et al., 2009). Исследование проводилось с растениями, растущими в среде, содержащей сахарозу, и исключали члена-основателя семейства PRR, TOC1, который играет разные роли в циркадной системе и в контроле определенных выходов. Наш анализ с использованием растений с отсутствующей экспрессией TOC1 показал, что ритмичная экспрессия генов, кодирующих белки, принадлежащие митохондриальной цепи переноса электронов (ETC), циклу трикарбоновых кислот (TCA), а также экспрессия NADH-дегидрогеназ, альтернативных оксидаз (AOX) и митохондриальные транспортеры (TRANSP) были затронуты у сверхэкспрессирующих TOC1 и мутантных растений, выращенных в среде без сахарозы (дополнительные рисунки 2A – C).Пиковое накопление, по-видимому, было задержано в TOC1-ox и увеличилось в toc1-2 . Сравнительный анализ отдельных генов в трех генотипах подтвердил измененную экспрессию, показывая, что некоторые гены подавлялись в TOC1-ox и, наоборот, активировались в toc1-2 (Рисунки 2A – I). Реже амплитуда некоторых генов увеличивалась в TOC1-ox (Рисунок 2I). Поскольку TOC1 функционирует как общий репрессор (Gendron et al., 2012; Huang et al., 2012; Pokhilko et al., 2012), эти гены могут косвенно регулироваться с помощью неправильной экспрессии TOC1.

    Рисунок 2. Недостаточная экспрессия митохондриальных генов в мутантных растениях TOC1-ox и toc1-2 . Анализ динамики экспрессии митохондриальных генов у растений WT, TOC1-ox и toc1-2 в течение циркадного цикла. Растения переносили в циклы LD и переносили на 2 дня в условиях LL. Выражение (A) NDA1 , (B) ACO1 , (C) CITRATE SYNTHASE 4 ( CYS4) , (D) NAD- MAL- MAL-DEPENDY ME2 ), (E) NADH: УБИХИНОН ОКСИДОРЕДУКТАЗА FE-S PROTEIN4 (NDUFS4) , (F) ACONITASE 2 ( ACO2) , EHLASE DE-G4 (G) -2 ( 2OXDHb) , (H) ДИКАРБОКСИЛАТНЫЙ НОСИТЕЛЬ 1 ( UCP5 / DIC1) и (I) ЦИТОХРОМ B (COB) .Относительную экспрессию получали с помощью анализов RT-Q-PCR. Данные представлены как среднее + SEM. Белые и пунктирные области представляют собой субъективный день и субъективную ночь соответственно. Для всех экспериментов были выполнены три биологические повторы, с растениями, выращиваемыми независимо, и с образцами, собранными, обработанными и проанализированными в разное время.

    TOC1 регулирует суточное и циркадное накопление центральных метаболитов и клеточной энергии

    Чтобы изучить накопление метаболитов в растениях дикого типа (WT) и с отсутствием экспрессии TOC1, мы выполнили целевую метаболомику с помощью газовой хроматографии / масс-спектрометрии (ГХ / МС) у растений, выращенных в среде без сахарозы (дополнительная таблица 1).У растений WT количество метаболитов демонстрировало суточные колебания с более высоким накоплением в течение дня на ZT7, чем ночью на ZT19 (дополнительная фигура 3A). Примеры включают сахара, такие как глюкоза, аминокислоты, такие как серин, или промежуточные продукты TCA, такие как янтарная кислота. Осцилляторный паттерн был изменен в TOC1-ox для подмножества этих метаболитов с повышенным накоплением либо утром, либо вечером (дополнительные рисунки 3A и 3B). Метаболиты с высокими колебаниями амплитуды в WT показали пониженное накопление в TOC1-ox (Рисунок 3B и дополнительный рисунок 3A) и немного увеличились в toc1-2 (дополнительные рисунки 3A, B).В условиях LL метаболиты также колебались с повышенным накоплением в течение субъективного дня (например, глицин) или ночи (например, фенилаланин) (рис. 3A). Ритмические колебания были изменены у мутантных растений TOC1-ox и toc1-2 (рисунки 3A – C и дополнительный рисунок 3B). Аминокислоты накапливались в TOC1-ox днем ​​или ночью, тогда как сахара и фумаровая кислота демонстрировали явное снижение. Напротив, фруктоза, фумаровая кислота или аминокислота лизин были увеличены на toc1-2 (дополнительные фигуры 3A, B).Таким образом, правильная экспрессия TOC1 важна для основных и циркадных колебаний сахаров, аминокислот и промежуточных продуктов TCA.

    Рисунок 3. ВРЕМЯ КАБИННОЙ ЭКСПРЕССИИ1 регулирует суточное и циркадное накопление метаболитов. (A) Тепловая карта проанализированных с помощью ГХ-МС метаболитов в растениях WT, TOC1-ox и toc1-2 растений. Растения были увлечены циклами 12 часов света: 12 часов темноты, а затем перенесены на 2 дня в LL перед отбором образцов на CT7 и CT19. (B) Графики дисперсии кратного изменения метаболита (день по сравнению с ночью) при LD (12 часов света: 12 часов темноты) и LL (субъективный день по сравнению с субъективной ночью) в TOC1-ox относительно WT. (C) Графики дисперсии кратного изменения метаболита ( toc1-2 по сравнению с TOC1-ox) при LL. Метаболиты были сгруппированы по классам в органические кислоты (оранжевый), аминокислоты (фиолетовый), а также сахара и сахарные спирты (зеленый). Относительное содержание метаболитов нормализовали к среднему значению для растений дикого типа, и значения кратности изменения были преобразованы в log2.Log2-кратные различия <[0,4] не учитывались (бледно-серый квадрат). Оранжевый пунктирный овал обозначает метаболиты, сниженные в TOC1-ox и повышенные в toc1-2 . Данные являются результатом 3–5 биологических повторов, при которых растения выращивались независимо в разное время.

    Затем мы исследовали, изменился ли основной результат метаболизма, то есть выработка энергии в форме АТФ, когда часы не работают должным образом. Мы использовали высокочувствительный метод для количественного определения общего количества адениновых нуклеотидов (Zhang et al., 2020). Наши результаты показали четкие различия в содержании аденозиндифосфата (АДФ) и аденозинтрифосфата (АТФ) в течение дня по сравнению с ночным у растений WT (Рисунки 4A, B). Амплитуда колебаний была значительно снижена у растений с ошибочной экспрессией TOC1, что свидетельствует о том, что правильная экспрессия TOC1 необходима для поддержания дневного энергетического гомеостаза (Фигуры 4A, B). Расчет отношения АТФ / АДФ, меры энергетического гомеостаза, показал, что различия между днем ​​и ночью у растений WT были уменьшены или утрачены у растений, не экспрессирующих TOC1 (рис. 4C).В соответствии с конститутивной сверхэкспрессией соотношение АТФ / АДФ было снижено в TOC1-ox в оба момента времени, тогда как эффект мутации toc1-2 был более очевиден в течение ночи (рис. 4С). Результаты связывают циркадную функцию TOC1 с метаболизмом и клеточной энергией.

    Рисунок 4. Правильная экспрессия TOC1 важна для регуляции энергетического гомеостаза. Анализ ВЭЖХ (A) ADP, (B) ATP и (C) отношения ATP / ADP в растениях WT, TOC1-ox и toc1-2 , которые были увлечены при 12-часовом освещении: 12-часовом темноте циклы и выборка в ZT7 и ZT17.Двусторонний, T -тест p -значения: * p <0,05; ** p <0,01; *** р <0,001. нс, не имеет значения. Данные являются результатом пяти биологических повторов, при которых растения выращивались независимо в разное время.

    Наши и ранее опубликованные результаты (Fukushima et al., 2009) предполагают роль семейства белков PRR, модулирующих ритмы первичных метаболитов. Однако неизвестно, является ли это соединение прямым или происходит через другие компоненты молекулярных часов и / или выходы часов.Поскольку TOC1 действует как общий репрессор (Gendron et al., 2012; Huang et al., 2012; Pokhilko et al., 2012), мы сравнили метаболиты, неправильно регулируемые в TOC1-ox и toc1-2 относительно WT, и сосредоточены на тех, у кого пониженная регуляция TOC1-ox и повышенная регуляция в toc1-2 . Мы предположили, что метаболиты в этом кластере могут указывать на возможную прямую регуляцию с помощью TOC1 генов, участвующих в генерации этих метаболитов. Наши анализы выявили сахарную фруктозу, аминокислоту глицин и промежуточную ТСА фумаровую кислоту, которые подавляются в TOC1-ox и повышаются в toc1-2 как при LD (дополнительный рисунок 3C, оранжевый овал с точками), так и при LL. (Рисунок 3C, оранжевый овал с пунктирной линией).

    TOC1 контролирует дневную и циркадную экспрессию

    FUM2 и напрямую связывается с его промотором

    Фумаровая кислота является промежуточным звеном цикла TCA, синтезируемого под действием двух фумараз (FUM1 и FUM2). Поскольку суточные и циркадные колебания фумаровой кислоты снижались при низком уровне TOC1-ox и высоком уровне на toc1-2 (рисунок 5A и дополнительный рисунок 4A), мы сосредоточились на возможной регуляции генов FUM с помощью TOC1. Анализ динамики времени показал, что экспрессия FUM1 следовала колебаниям с низкой амплитудой (фиг. 5B), которая не была явно изменена в TOC1-ox (дополнительная фигура 4B).Напротив, экспрессия FUM2 четко колебалась с пиком экспрессии в середине дня при различных фотопериодах и в условиях LL (дополнительные рисунки 4C, D). Амплитуда экспрессии FUM2 снижалась в TOC1-ox и увеличивалась в toc1-2 в условиях захвата (фиг. 5C). При LL, FUM2 циркадный пик экспрессии был отменен в TOC1-ox (фиг. 5D) и увеличился в течение субъективного дня в toc1-2 (дополнительная фигура 4D).Эти результаты предполагают, что транскрипционные эффекты TOC1-ox и toc1-2 коррелируют с фенотипами накопления фумаровой кислоты.

    Рисунок 5. ВРЕМЯ ЭКСПРЕССИИ КАБИНЫ1 контролирует суточную и циркадную экспрессию FUM2 путем прямого связывания с его промотором. (A) Относительное содержание фумаровой кислоты в WT, TOC1-ox и toc1-2 растений, унесенных циклами LD, а затем перенесенных на 2 дня в LL перед взятием проб в циркадном времени 7 (7 ч после субъективного рассвета) CT7 и CT19 . (B) Анализ динамики экспрессии FUM1 в растениях WT, выращенных в условиях LD или перенесенных на 2 дня в LL перед взятием образцов. (C) Анализ динамики экспрессии FUM2 в растениях WT, TOC1-ox и toc1-2 , выращенных в условиях LD. (D) Анализ динамики экспрессии FUM2 в растениях WT и TOC1-ox, выращенных в условиях LD, перенесенных на 2 дня в LL перед взятием образцов. (E) Иммунопреципитация хроматина (ChIP) с растениями TOC1-ox, выращенными при LD и отобранными на ZT7.Обогащение ChIP рассчитывали относительно входа. Образцы инкубировали с антителом против MYC (+ α) или без антитела (-α). (F) ChIP-анализы с растениями TMG, выращенными при LD, и образцы отбирались каждые 4 часа в течение дневного цикла. ChIPs выполняли с антителом против GFP для иммунопреципитации GFP-меченного белка TOC1. Обогащение ChIP рассчитывали относительно входа. Белая и серая области на панели (C) представляют день и ночь соответственно. Белые и пунктирные области на панели (D) представляют субъективный день и субъективную ночь, соответственно.Для всех экспериментов были выполнены три биологические повторы, с растениями, выращиваемыми независимо, и с образцами, собранными, обработанными и проанализированными в разное время. Двусторонний, т -тест WT Vs. TOX1ox p -значения: * p <0,05 и WT Vs. toc1-2 p -значения: # <0,05.

    Наш предыдущий анализ массивного секвенирования иммунопреципитации хроматина (ChIP-Seq) показал, что FUM2 является одной из мишеней TOC1 (Huang et al., 2012). Чтобы проверить, происходит ли регуляция экспрессии гена FUM2 с помощью TOC1 посредством прямого связывания с локусом FUM2 , мы провели анализ ChIP с последующей количественной ПЦР (QPCR). Наши анализы с использованием растений TOC1-ox показали амплификацию промотора FUM2 до степени, аналогичной той, которая наблюдалась для положительного контроля (промотор CCA1 ) (рисунок 5E и дополнительный рисунок 4E). Промоторы других генов, связанных с метаболизмом ( ACO1 , DIC1 , NDA1 и PDK ), отрицательный контроль ( ACTIN ) или образцы, обработанные без антител (-α), не показали значительного обогащения при наши экспериментальные условия (рисунок 5E и дополнительный рисунок 4E).Мы также выполнили ChIP-анализы с проростками TOC1 Minigen (TMG), экспрессирующими геномный фрагмент TOC1 под промотором TOC1 (Más et al., 2003a). Наши анализы выявили ритмическое связывание с пиковым обогащением около ZT15 (рис. 5F). Связывание наблюдали в области промотора FUM2 , содержащей мотивы, связанные с циркадным ритмом, включая мотив, подобный вечернему элементу (EEL и AATATCT), ранее идентифицированный как мотив связывания TOC1, сайт связывания CCA1 (CBS и AAAAATCT) и элемент Morning Element (ME и CCACAC) (Michael et al., 2008) (Рисунок 5E). В совокупности результаты согласуются с прямым связыванием TOC1 с промотором FUM2 для регулирования его суточной и циркадной транскрипционной экспрессии, которая в конечном итоге также коррелирует с содержанием фумаровой кислоты.

    Чрезмерная экспрессия FUM2 восстанавливает связанные с метаболизмом фенотипы TOC1-ox

    Если фенотипы, наблюдаемые в TOC1-ox, обусловлены репрессией FUM2 , его избыточная экспрессия на фоне TOC1-ox должна уменьшать тяжесть фенотипов.Таким образом, затем мы провели исследования генетического взаимодействия путем трансформации растений TOC1-ox сверхэкспрессирующей конструкцией FUM2 (FUM2-ox) (дополнительные рисунки 5A, B). Серьезность фенотипов размера розетки и свежей массы TOC1-ox также была значительно улучшена у растений с двойным FUM2 / TOC1-ox по сравнению с одиночными TOC1-ox (Фигуры 6A, B и дополнительная фигура 5C). Подобное фенотипическое восстановление наблюдалось в двух разных линиях с двойной сверхэкспрессией (фиг. 6C и дополнительная фиг. 5C). Эти результаты предполагают, что пониженная экспрессия FUM2 в растениях TOC1-ox вносит вклад в наблюдаемые фенотипы и что чрезмерная экспрессия FUM2 смягчает эти фенотипы.Результаты также ограничивают возможность того, что наблюдаемые фенотипы растений TOC1-ox обусловлены косвенными плейотропными эффектами.

    Рисунок 6. Сверхэкспрессия FUM2 частично восстанавливает молекулярные и физиологические фенотипы TOC1-ox. Розетка (A) по периметру и (B) свежей массы указанных генотипов, выращенных в условиях длинного дня (LgD). Каждая точка представляет собой одну розетку. Пунктирные линии показывают среднее значение WT. (C) Розетка 8-битных изображений.Данные представлены как среднее + SEM. Для всех экспериментов были выполнены три биологические повторы, при этом растения выращивались независимо, а образцы собирались, обрабатывались и анализировались в разное время.

    Условия выращивания, имитирующие депривацию энергии, запускают альтернативные метаболические пути, включая индукцию генов, участвующих в катаболизме аминокислот с разветвленной цепью (BCAA) (Pedrotti et al., 2018). Примечательно, что экспрессия ряда катаболических генов аминокислот повышалась в TOC1-ox в течение ночи (Фигуры 7A, D, G).Повышение регуляции было более очевидным при более коротких фотопериодах (дополнительная фигура 5A). Гены были активированы в TOC1-ox, хотя растения выращивали в нормальных циклах, а не в условиях депривации энергии, в которых эти гены индуцируются. Другие гены, кодирующие аминокислотные катаболические ферменты, а также маркеры сахарного голодания, также индуцировались в растениях TOC1-ox (дополнительные рисунки 6B, C). Напротив, экспрессия гена подавлялась в FUM2-ox и в toc1-2 (Фигуры 7A, B, D, E, H).Повышающая регуляция экспрессии катаболического гена BCCA в TOC1-ox была преодолена в растениях с двойным FUM2 / TOC1-ox (рисунки 7C, F, I), что позволяет предположить, что наблюдаемые фенотипы в TOC1-ox действительно опосредованы сниженным выражение FUM2 . Результаты подтверждают перенаправленный протеолитический метаболизм из-за измененного энергетического статуса растений, не экспрессирующих TOC1.

    Рис. 7. Исследования генетического взаимодействия молекулярных сигнатур, показывающих депривацию энергии.Анализ динамики с помощью RT-QPCR (A – C) ФЛАВОПРОТЕИН ПЕРЕДАЧИ ЭЛЕКТРОНОВ: УБИХИНОН ОКСИДО-РЕДУКТАЗА ( ETFQO ), (D – F) METHYLCROTONYL-CO000 () и (G – I) DARK INDUCIBLE 3 Экспрессия гена ( BCE2 / DIN3 ) в указанных генотипах, выращенных в циклах LD. Данные представлены как среднее + SEM. Белая и серая области представляют день и ночь соответственно. Некоторые данные повторяются на разных графиках для облегчения сравнения генотипов.Были выполнены два (FUM2-ox) и три (WT, TOC1-ox, toc1-2 и FUM2 / TOC1-ox) биологических повтора с растениями, выращиваемыми независимо, с образцами, собранными, обработанными и проанализированными в разное время.

    Обсуждение

    Временная компартментализация метаболизма широко распространена как у одноклеточных, так и у многоклеточных организмов. Из-за их сидячей природы и высокоразвитых клеток (Sweetlove and Fernie, 2013) точное пространственно-временное распределение метаболических процессов особенно важно для растений.Механизмы, зависящие от часов в сотрудничестве со специфическими регуляторными путями, позволяют растениям активно предвидеть и подготавливать реакции синхронно с внутренними метаболическими сигналами и внешними сигналами окружающей среды (Smith and Stitt, 2007; Sanchez-Villarreal et al., 2013). Мы идентифицировали молекулярный механизм, который связывает циркадные часы с регуляцией метаболизма у Arabidopsis thaliana .

    Наши результаты показывают, что правильная экспрессия TOC1 важна для основных и циркадных колебаний сахаров, аминокислот и промежуточных продуктов TCA.Было также обнаружено, что промежуточные продукты TCA, включая фумарат, накапливаются в тройных мутантных растениях d975 ( PRR9, PRR7 и PRR5 ) (Fukushima et al., 2009). По сравнению с TOC1-ox фенотипы растений toc1-2 были менее серьезными, что указывает на возможную функциональную избыточность с другими членами семейства PRR (например, PRR5). В целом профили метаболитов были сопоставимы с теми, о которых сообщалось ранее (Flis et al., 2019), с некоторыми различиями, которые можно объяснить разными стадиями развития растений и условиями выращивания.Наши результаты показывают, что TOC1 регулирует экспрессию FUM2 . Соответственно, экспрессия FUM2 подавлялась индукцией REVEILLE8 (Hsu et al., 2013), ранее описанного активатора TOC1 (Hsu et al., 2013; Xing et al., 2015; Ma et al., 2015; Ma et al., 2013). др., 2018). Измененное накопление фумарата в растениях, неправильно экспрессирующих TOC1, предполагает, что регуляция транскрипции FUM2 ответственна за наблюдаемые паттерны изменения фумарата.Аналогичный вывод можно сделать из наших исследований генетического взаимодействия с использованием растений FUM2-ox. Поскольку фумарат и крахмал служат альтернативными поглотителями углерода для фотосинтата (Chia et al., 2000; Tschoep et al., 2009; Pracharoenwattana et al., 2010), регулирование накопления фумарата (и других метаболитов) с помощью TOC1 обеспечивает новый способ для суточных часов для контроля клеточного метаболизма в дополнение к ранее описанному посредством контроля метаболизма крахмала.

    Мы также обнаружили, что TOC1 напрямую связывается с промотором FUM2 , чтобы регулировать его суточную и циркадную транскрипционную экспрессию.Хотя предыдущие исследования предоставили доказательства того, что несколько выходов суточных часов регулируют различные паттерны метаболизма C и N, связывание TOC1 с промотором FUM2 и регуляция экспрессии FUM2 обеспечивают новый прямой молекулярный механизм, связывающий TOC1 с циркадным метаболизмом. Наши результаты также предполагают, что при нормальных циклах LD потребность в энергии в растениях, неправильно экспрессирующих TOC1, не обеспечивается должным образом, так что запускаются альтернативные пути генерации энергии.Многие из ферментов пути BCAA расположены в митохондриях (Taylor et al., 2004), а гены BCAA демонстрируют ритмы в течение суточного цикла (Blasing et al., 2005; Lee et al., 2010), транскрипционно репрессированные посредством свет (Ishizaki et al., 2005, 2006). Вероятно, что нарушение энергетического гомеостаза в TOC1-ox вызывает реакцию тревоги для получения энергии из других источников, в данном случае катаболизма разветвленных аминокислот. Анализы мутантных растений Arabidopsis tic показали измененное накопление крахмала, углеводов, аминокислот и фумарата.Другие промежуточные продукты цикла TCA не претерпели значительных изменений у мутанта tic (Sanchez-Villarreal et al., 2013), предполагая, что фенотипы обусловлены измененным балансом использования углерода и азота.

    У млекопитающих циркадная регуляция метаболизма зависит как от системных, так и от местных сигналов (Brown, 2016), влияющих на основные пути на клеточном уровне и метаболический гомеостаз во всем организме (Asher and Schibler, 2011). У растений митохондриальный протеом варьируется в зависимости от метаболических требований различных тканей (des Francs-Small et al., 1992; Bardel et al., 2002; Ли и др., 2008). Основываясь на циркадной связи между побегами и корнями у Arabidopsis (James et al., 2008; Takahashi et al., 2015; Chen et al., 2020), было бы интересно проанализировать возможные клетки, ткани, и органоспецифичность регуляции метаболизма по часам, а также выявление возможных системных сигналов, способных передавать энергетический статус между различными частями растения для повышения продуктивности и приспособленности. Более того, связанные с метаболизмом органеллы не функционируют изолированно внутри клетки, но тесно связаны с другими ключевыми клеточными путями, включая клеточный цикл (Kianian and Kianian, 2014).Поскольку циркадные часы контролируют время клеточного цикла у растений (Fung-Uceda et al., 2018), возможно, что циркадное взаимодействие с клеточным циклом также может играть роль в регулировании клеточного метаболизма у растений. Наши результаты открывают путь для дальнейших исследований, использующих хронобиологию метаболизма для улучшения метаболического гомеостаза и клеточной энергии у растений и животных.

    Заявление о доступности данных

    Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направить соответствующему автору.

    Авторские взносы

    LC-C, TY, YZ и MO провели эксперименты. А.Ф. внесла свой вклад с реактивами, идеями и комментариями. PM задумал проект, спланировал эксперименты и написал рукопись. Все авторы прочитали, отредактировали и одобрили рукопись.

    Финансирование

    Лаборатория Mas финансируется FEDER / Министерством экономики и конкурентоспособности Испании (PID2019-106653GB-I00 / AEI / 10.13039 / 501100011033), Фондом Рамона Аресеса и Женералитатом Каталонии (AGAUR) (2017 SGR 1211).Лаборатория PM также благодарит за финансовую поддержку программы CERCA / Generalitat de Catalunya и Министерства экономики и конкурентоспособности Испании в рамках «Программы Северо-Очоа для центров передового опыта в области исследований и разработок» (CEX2019-000902-S). МО является стипендиатом программы постдокторантуры по интернационализации «Северо Очоа». Эта работа также была поддержана финансированием Общества Макса-Планка (AF, TY и YZ) и проекта Европейского Союза Horizon 2020 PlantaSYST SGA-CSA № 739582 под FPA No.664620 (AF и YZ).

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Благодарим сотрудников лаборатории Mas за полезные обсуждения и предложения.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: //www.frontiersin.org / article / 10.3389 / fpls.2021.683516 / full # additional-material

    Сноски

    Список литературы

    Bardel, J., Louwagie, M., Jaquinod, M., Jourdain, A., Luche, S., Rabilloud, T., et al. (2002). Обзор митохондриального протеома растений в отношении развития. Proteomics 2, 880–898. DOI: 10.1002 / 1615-9861 (200207) 2: 7 <880 :: AID-PROT880 <3.0.CO; 2-0

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Близинг, О.Э., Гибон Ю., Гюнтер М., Хоне М., Моркуенде Р., Осуна Д. и др. (2005). Сахара и циркадная регуляция вносят основной вклад в глобальную регуляцию суточной экспрессии генов у Arabidopsis . Растительная клетка 17, 3257–3281. DOI: 10.1105 / tpc.105.035261

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Chen, W. W., Takahashi, N., Hirata, Y., Ronald, J., Porco, S., Davis, S.J., et al. (2020). Мобильный ELF4 доставляет информацию о циркадной температуре от побегов до корней. Nat. Растения 6, 416–426. DOI: 10.1038 / s41477-020-0634-2

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чиа Д. В., Йодер Т. Дж., Рейтер В. Д. и Гибсон С. И. (2000). Фумаровая кислота: недооцененная форма связанного углерода в Arabidopsis и других видах растений. Planta 211, 743–751. DOI: 10.1007 / s004250000345

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хробок, Д., Ло, С. Р., Брауэр, Б., Линден, П., Циолковска, А., Либш, Д. и др. (2016). Анализ метаболической роли митохондрий во время старения листьев. Plant Physiol. 172, 2132–2153. DOI: 10.1104 / стр. 16.01463

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Клаф, С. Дж., И Бент, А. Ф. (1998). Цветочное погружение: упрощенный метод опосредованной Agrobacterium трансформации Arabidopsis thaliana . Plant J. 16, 735–743. DOI: 10.1046 / j.1365-313X.1998.00343.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    des Francs-Small, C. C., Ambard-Bretteville, F., Darpas, A., Sallantin, M., Huet, J. C., Pernollet, J. C., et al. (1992). Варьирование полипептидного состава митохондрий, выделенных из разных тканей картофеля. Plant Physiol. 98, 273–278. DOI: 10.1104 / стр.98.1.273

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Додд, А. Н., Салатия, Н., Холл, А., Кевей, Э., Тот, Р., Надь, Ф. и др. (2005). Циркадные часы растений увеличивают фотосинтез, рост, выживаемость и конкурентное преимущество. Наука 309, 630–633. DOI: 10.1126 / science.1115581

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Эльхафез Д., Мурча М. В., Клифтон Р., Сул К. Л., Дэй Д. А. и Уилан Дж. (2006). Характеристика митохондриальных альтернативных NAD (P) H дегидрогеназ в Arabidopsis : расположение и экспрессия в органеллах. Physiol растительных клеток. 47, 43–54. DOI: 10.1093 / pcp / pci221

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ферни, А. Р., Ахарони, А., Виллмитцер, Л., Стит, М., Тохге, Т., Копка, Дж., И др. (2011). Рекомендации по представлению данных о метаболитах. Растительная клетка 23, 2477–2482. DOI: 10.1105 / tpc.111.086272

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Флис, А., Менгин, В., Иваков, А.А., Магфорд, С.Т., Хуббертен, Х.М., Энке Б. и др. (2019). Несколько выходных сигналов суточных часов регулируют общий оборот запасов углерода и азота. Среда растительных клеток. 42, 549–573. DOI: 10.1111 / pce.13440

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Фукусима А., Кусано М., Накамичи Н., Кобаяши М., Хаяси Н., Сакакибара Х. и др. (2009). Влияние связанных с часами регуляторов псевдо-ответа Arabidopsis на метаболическую координацию. Proc. Natl. Акад.Sci. США 106, 7251–7256. DOI: 10.1073 / pnas.02106

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Фунг-Учеда, Дж., Ли, К., Со, П. Дж., Полин, С., Де Вейлдер, Л., и Мас, П. (2018). Циркадные часы устанавливают время лицензирования репликации ДНК для регулирования роста арабидопсиса . Dev. Ячейка 45, 101–113.e4. DOI: 10.1016 / j.devcel.2018.02.022

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гендрон, Дж. М., Прунеда-Пас, Дж.Л., Доэрти, К. Дж., Гросс, А. М., Кан, С. Е., и Кей, С. А. (2012). Arabidopsis Белок циркадных часов, TOC1, является ДНК-связывающим фактором транскрипции. Proc. Natl. Акад. Sci. США 109, 3167–3172. DOI: 10.1073 / pnas.1200355109

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гибон Ю., Усадель Б., Блэзинг О., Камлаге Б., Хёне М., Третуэй Р. и др. (2006). Интеграция метаболита с транскриптом и профили активности фермента в течение суточных циклов в розетках Arabidopsis . Genome Biol. 7: R76. DOI: 10.1186 / GB-2006-7-8-R76

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гилл, С., Ле, Х. Д., Мелкани, Г. К., и Панда, С. (2015). Ограниченное по времени кормление ослабляет возрастную сердечную недостаточность у Drosophila . Наука 347, 1265–1269. DOI: 10.1126 / science.1256682

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хейдон, М. Дж., Мельчарек, О., Робертсон, Ф. К., Хаббард, К.Э., Уэбб А. Р. (2013). Фотосинтетический захват циркадных часов Arabidopsis thaliana . Природа 502, 689–692. DOI: 10.1038 / природа12603

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хуанг В., Перес-Гарсия П., Похилко А., Миллар А. Дж., Антошечкин И., Рихманн Дж. Л. и др. (2012). Отображение ядра циркадных часов Arabidopsis определяет сетевую структуру осциллятора. Наука 336, 75–79.DOI: 10.1126 / science.1219075

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ишизаки, К., Ларсон, Т. Р., Шауэр, Н., Ферни, А. Р., Грэм, И. А., и Ливер, К. Дж. (2005). Критическая роль флавопротеина: убихинон оксидоредуктазы Arabidopsis в переносе электронов во время голодания, вызванного темнотой. Растительная клетка 17, 2587–2600. DOI: 10.1105 / tpc.105.035162

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ишизаки, К., Шауэр, Н., Ларсон, Т. Р., Грэм, И. А., Ферни, А. Р., и Ливер, К. Дж. (2006). Комплекс флавопротеидов митохондриального переноса электронов необходим для выживания Arabidopsis в длительной темноте. Завод J. 47, 751–760. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2006.02826.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Джеймс, А. Б., Монреаль, Дж. А., Ниммо, Г. А., Келли, К. Л., Херзик, П., Дженкинс, Г. И. и др. (2008). Циркадные часы в корнях Arabidopsis — это упрощенная подчиненная версия часов в побегах. Наука 322, 1832–1835. DOI: 10.1126 / science.1161403

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ким, Х., Ким, Ю., Йом, М., Лим, Дж., И Нам, Х. Г. (2016). Возрастные изменения циркадного периода в листьях Arabidopsis . J. Exp. Бот. 67, 2665–2673. DOI: 10.1093 / jxb / erw097

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Копка, Дж., Шауэр, Н., Крюгер, С., Биркемейер, К., Усадель, Б., Бергмюллер, Э. и др. (2005). [email protected]: база данных метаболома Голма. Биоинформатика 21, 1635–1638. DOI: 10.1093 / биоинформатика / bti236

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ли, К. П., Юбель, Х., Миллар, А. Х. (2010). Суточные изменения функции митохондрий свидетельствуют о ежедневной оптимизации светового и темнового дыхательного метаболизма у арабидопсиса . Мол. Клетка. Протеомика 9, 2125–2139. DOI: 10.1074 / mcp.M110.001214

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ли, К.П., Юбель Х., О’Тул Н. и Миллар А. Х. (2008). Неоднородность митохондриального протеома для фотосинтетического и нефотосинтетического метаболизма Arabidopsis . Мол. Клетка. Протеомика 7, 1297–1316. DOI: 10.1074 / mcp.M700535-MCP200

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Лим, С. Л., Вун, К. П., Гуан, X., Янг, Ю., Гардестрем, П., и Лим, Б. Л. (2020). In planta исследование фотосинтеза и фотодыхания с использованием датчиков флуоресцентных белков NADPH и NADH / NAD +. Nat. Commun. 11, 1–12. DOI: 10.1038 / s41467-020-17056-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Lisec, J., Schauer, N., Kopka, J., Willmitzer, L., and Fernie, A.R. (2006). Газовая хроматография, масс-спектрометрия, определение профиля метаболитов растений. Nat. Protoc. 1, 387–396. DOI: 10.1038 / nprot.2006.59

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ливак, К. Дж., И Шмитген, Т. Д. (2001). Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2-ΔΔCT. Методы 25, 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Людеманн А., фон Малотки Л., Эрбан А. и Копка Дж. (2012). «TagFinder: программное обеспечение предварительной обработки для снятия отпечатков пальцев и профилирования анализов метаболома на основе газовой хроматографии и масс-спектрометрии», в Plant Metabolomics: Methods and Protocols , eds NW Hardy and RD Hall (Totowa, NJ: Humana Press), 255–286 . DOI: 10.1007 / 978-1-61779-594-7_16

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    млн лет назад, Гил, С., Грассер, К. Д., и Мас, П. (2018). Целевое рекрутирование базального транскрипционного аппарата компонентами часов LNK контролирует циркадные ритмы возникающих РНК в Arabidopsis . Растительная клетка 30, 907–924. DOI: 10.1105 / tpc.18.00052

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Макино, С., Мацусика, А., Кодзима, М., Ямасино, Т., и Мизуно, Т. (2002). Квинтет APRR1 / TOC1 участвует в циркадных ритмах Arabidopsis thaliana : характеристика с растениями, избыточно экспрессирующими APRR1. Physiol растительных клеток. 43, 58–69. DOI: 10.1093 / pcp / pcf005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мас, П., Алабади, Д., Яновский, М. Дж., Ояма, Т., и Кей, С. А. (2003a). Двойная роль TOC1 в контроле циркадных и фотоморфогенных ответов у Arabidopsis . Растительная клетка 15, 223–236. DOI: 10.1105 / tpc.006734

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мас, П., Ким, В.-Й., Сомерс, Д.Э. и Кей С.А. (2003b). Направленная деградация TOC1 с помощью ZTL модулирует циркадную функцию у Arabidopsis thaliana . Природа 426, 567–570. DOI: 10.1038 / nature02163

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    МакКлунг, К. Р., Хсу, М., Пейнтер, Дж. Э., Ганье, Дж. М., Карлсберг, С. Д., и Саломе, П. А. (2000). Интегрированная временная регуляция фотодыхательного пути. циркадная регуляция двух генов Arabidopsis , кодирующих серингидроксиметилтрансферазу. Plant Physiol. 123, 381–392. DOI: 10.1104 / стр.123.1.381

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Майкл, Т. П., Моклер, Т. К., Бретон, Г., МакЭнти, К., Байер, А., Траут, Дж. Д. и др. (2008). Конвейер сетевого обнаружения проливает свет на консервативные цис-регулирующие модули, зависящие от времени суток. PLoS Genet. 4: e14. DOI: 10.1371 / journal.pgen.0040014

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Михалецкая, А.М., Свенссон, ÅS., Йоханссон, Ф. И., Агиус, С. К., Йохансон, У., Бреннике, А. и др. (2003). Arabidopsis гены, кодирующие митохондриальные NAD (P) H дегидрогеназы II типа, имеют различное эволюционное происхождение и проявляют различные реакции на свет. Физиология растений 133, 642–652. DOI: 10.1104 / стр.103.024208

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Миллар А. Х., Уилан Дж., Сул К. Л. и Дэй Д. А. (2011). Организация и регуляция митохондриального дыхания у растений. Annu. Rev. Plant Biol. 62, 79–104. DOI: 10.1146 / annurev-arplant-042110-103857

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Моклер, Т. К., Майкл, Т. П., Прист, Х. Д., Шен, Р., Салливан, К. М., Гиван, С. А. и др. (2007). Проект DIURNAL: профили экспрессии DIURNAL и циркадных ритмов, сопоставление с образцом на основе моделей и анализ промоторов. Колд Спринг Харб. Symp. Quant. Биол. 72, 353–363.

    Google Scholar

    Накагава Т., Kurose, T., Hino, T., Tanaka, K., Kawamukai, M., Niwa, Y., et al. (2007a). Разработка серии шлюзовых бинарных векторов, pGWB, для реализации эффективного конструирования гибридных генов для трансформации растений. J. Biosci. Bioeng. 104, 34–41. DOI: 10.1263 / jbb.104.34

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Накагава Т., Судзуки Т., Мурата С., Накамура С., Хино Т., Маэо К. и др. (2007b). Улучшенные бинарные векторы-шлюзы: высокопроизводительные векторы для создания гибридных конструкций в трансгенном анализе растений. Biosci. Biotechnol. Biochem. 71, 2095–2100. DOI: 10.1271 / bbb.70216

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Нива, Ю., Ито, С., Накамичи, Н., Мидзогути, Т., Нийнума, К., Ямасино, Т., и др. (2007). Генетические связи генов, связанных с циркадными часами, TOC1, CCA1 и LHY, в фотопериодическом контроле времени цветения у Arabidopsis thaliana . Physiol растительных клеток. 48, 925–937. DOI: 10,1093 / pcp / pcm067

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Нордально, З.Б., Исии, К., Аткинс, К. А., Уэтерилл, С. Дж., Кусакина, Дж., Уолтон, Э. Дж. И др. (2013). Циркадный контроль транскрипции хлоропластов с помощью кодируемого ядерным сигналом времени. Наука 339, 1316–1319. DOI: 10.1126 / science.1230397

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Нунес-Неси, А., Араужо, В. Л., и Ферни, А. Р. (2011). Ориентация на метаболизм и механизмы митохондрий как средство усиления фотосинтеза. Plant Physiol. 155, 101–107.DOI: 10.1104 / стр.110.163816

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Нунес-Неси, А., Араужо, В. Л., Обата, Т., и Ферни, А. Р. (2013). Регуляция митохондриального цикла трикарбоновых кислот. Curr. Opin. Plant Biol. 16, 335–343. DOI: 10.1016 / j.pbi.2013.01.004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Nunes-Nesi, A., Carrari, F., Gibon, Y., Sulpice, R., Lytovchenko, A., Fisahn, J., et al. (2007). Дефицит активности митохондриальной фумаразы у растений томата нарушает фотосинтез, влияя на функцию устьиц. Plant J. 50, 1093–1106. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2007.03115.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Pedrotti, L., Weiste, C., Nägele, T., Wolf, E., Lorenzin, F., Dietrich, K., et al. (2018). Связанная с Snf1 KINASE1-контролируемая передача сигналов C / S1-bZIP активирует альтернативные митохондриальные метаболические пути для обеспечения выживания растений в продолжительной темноте. Растительная клетка 30, 495–509. DOI: 10.1105 / tpc.17.00414

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пералес, М., и Мас, П. (2007). Функциональная связь между ритмическими изменениями в структуре хроматина и биологическими часами Arabidopsis . Растительная клетка 19, 2111–2123. DOI: 10.1105 / tpc.107.050807

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Похилко А., Фернандес А. П., Эдвардс К. Д., Саузерн М. М., Холлидей К. Дж. И Миллар А. Дж. (2012). Схема тактового гена в Arabidopsis включает репрессилятор с дополнительными петлями обратной связи. Мол. Syst. Биол. 8: 574. DOI: 10.1038 / msb.2012.6

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Pracharoenwattana, I., Zhou, W., Keech, O., Francisco, P. B., Udomchalothorn, T., Tschoep, H., et al. (2010). Arabidopsis содержит цитозольную фумаразу, необходимую для массового выделения фотосинтата в фумаровую кислоту и для быстрого роста растений при высоком содержании азота. Plant J. 62, 785–795. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2010.04189.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Санчес, С.Э., Кей С.А. (2016). Циркадные часы растений: от простого хронометриста до сложного менеджера по развитию. Колд Спринг Харб. Перспектива. Биол. 8: a027748. DOI: 10.1101 / cshperspect.a027748

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Sanchez-Villarreal, A., Shin, J., Bujdoso, N., Obata, T., Neumann, U., Du, S.-X., et al. (2013). ВРЕМЯ ДЛЯ КОФЕ является важным компонентом поддержания метаболического гомеостаза у Arabidopsis thaliana . Plant J. 76, 188–200. DOI: 10.1111 / tpj.12292

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шауэр Н., Штайнхаузер Д., Стрелков С., Шомбург Д., Эллисон Г., Мориц Т. и др. (2005). Библиотеки ГХ-МС для быстрой идентификации метаболитов в сложных биологических образцах. FEBS Lett. 579, 1332–1337. DOI: 10.1016 / j.febslet.2005.01.029

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сомерс, Д.Э., Уэбб А. Р., Пирсон М. и Кей С. А. (1998). Короткопериодический мутант toc1-1 изменяет регуляцию суточных часов множественных выходов на протяжении развития у Arabidopsis thaliana . Девелопмент 125, 485–494.

    Google Scholar

    Страйер К., Ояма Т., Шульц Т. Ф., Раман Р., Сомерс Д. Э., Мас П. и др. (2000). Клонирование часового гена TOC1 арабидопсиса , гомолога регулятора ауторегуляторной реакции. Наука 289, 768–771.DOI: 10.1126 / science.289.5480.768

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Sweetlove, Л. Дж., И Ферни, А. Р. (2013). Пространственная организация обмена веществ в растительной клетке. Annu. Rev. Plant Biol. 64, 723–746. DOI: 10.1146 / annurev-arplant-050312-120233

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Такахаши, Н., Хирата, Ю., Айхара, К., и Мас, П. (2015). Иерархическая сеть с несколькими осцилляторами управляет циркадной системой Arabidopsis . Cell 163, 148–159. DOI: 10.1016 / j.cell.2015.08.062

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Тейлор Н. Л., Хизлвуд Дж. Л., Дэй Д. А. и Миллар А. Х. (2004). Зависящий от липоевой кислоты окислительный катаболизм α-кетокислот в митохондриях свидетельствует о катаболизме аминокислот с разветвленной цепью у Arabidopsis . Plant Physiol. 134, 838–848. DOI: 10.1104 / стр.103.035675

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Tschoep, H., Гибон, Ю., Карилло, П., Арменгауд, П., Щековка, М., Нунес-Неси, А. и др. (2009). Регулировка роста и центрального метаболизма до умеренного, но устойчивого ограничения азота у Arabidopsis . Среда растительных клеток. 32, 300–318. DOI: 10.1111 / j.1365-3040.2008.01921.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Xing, H., Wang, P., Cui, X., Zhang, C., Wang, L., Liu, X., et al. (2015). Рекрутирование LNK1 и LNK2 в вечерний элемент требует утренних экспрессированных циркадных ритмов, связанных с MYB-подобными факторами транскрипции. Завод Сигнал. Behav. 10: e1010888. DOI: 10.1080 / 15592324.2015.1010888

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сюй К., Чжэн Х. и Сегал А. (2008). Регуляция питания и метаболизма нейрональными и периферическими часами у Drosophila . Cell Metab. 8, 289–300. DOI: 10.1016 / j.cmet.2008.09.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ямасино, Т., Ито, С., Нива, Ю., Кунихиро, А., Nakamichi, N., и Mizuno, T. (2008). Участие Arabidopsis -ассоциированных с часами регуляторов псевдоответа в суточных колебаниях экспрессии генов в присутствии временных сигналов окружающей среды. Physiol растительных клеток. 49, 1839–1850. DOI: 10.1093 / pcp / pcn165

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чжан Ю., Кранерт И., Больц А., Гибон Ю. и Ферни А. Р. (2020). Измерения адениновых нуклеотидов и никотинамидадениндинуклеотидов в растениях. Curr. Protoc. Plant Biol. 5: e20115. DOI: 10.1002 / cppb.20115

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    XPO1 — Exportin-1 — Homo sapiens (Human)

    Функциональный ключ Позиция (я) Описание Действия Графическое представление Длина

    В этом подразделе раздела «Патология и биотехнология» описывается эффект экспериментальной мутации. одной или нескольких аминокислот на биологические свойства белка.

    Подробнее …

    Мутагенез i
    191 S → A: не отменяет опосредованный Рексом экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 284 V → E: не отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 334 D → G: не отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 337 I → L: не отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 346 T → A: не отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 402 V → I: не отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 411 P → T: Сильно отменяет взаимодействие с Rex и RANBP3, отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК. Не отменяет взаимодействие с RANBP3; когда связан с S-414. Отменяет мультимеризацию Rex; когда связан с S-414.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 412 M → V: не отменяет взаимодействие с Rex и RANBP3 и опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 414 F → S: сильно отменяет взаимодействие с Rex и RANBP3, отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК. Не отменяет взаимодействие с RANBP3; при связке с Т-411. Отменяет мультимеризацию Rex; при связке с Т-411.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 428 — 447 EEVLV… EFMKD → QQVLVVQNNQGQVVVRQFMKN отменяет активность связывания при частичном отсутствии активности связывания RQFMKN.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    Добавить BLAST
    20
    Мутагенез i 430 — 446 VLVVE… REFMK → DEDEENDQGEDEEEDDD: Частично восстанавливает активность связывания Ran при наличии груза.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    Добавить BLAST
    17
    Мутагенез i 430 — 433 VLVV → DEDE: отменяет активность связывания Ran как в отсутствие, так и в присутствии груза.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    4
    Мутагенез i 454 Y → A: не отменяет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 474 R → I: Сильно отменяет взаимодействие с Rex и RANBP3, отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 481 H → Q: Сильно отменяет взаимодействие с Rex и RANBP3, отменяет опосредованный Rex экспорт мРНК.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: ФУНКЦИЯ (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В КОМПЛЕКСЕ С HTLV-1 REX; RANBP3 И RAN, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С HTLV-1 REX (МИКРОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ) И RANBP3, МУТАГЕНЕЗ SER-191; ВАЛ-284; АСП-334; ИЛЭ-337; THR-346; ВАЛ-402; ПРО-411; МЕТ-412; PHE-414; ARG-474 И HIS-481.

    1
    Мутагенез i 513 E → A: устраняет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса. Устраняет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса; когда он связан с А-553 и А-554.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 525 L → A: Повышает активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов. Не отменяет активность связывания Ran и частично устраняет образование ядерного экспортного комплекса; когда связан с А-561. Не отменяет активность связывания Ran и частично устраняет образование ядерного экспортного комплекса; когда он связан с А-568 и А-572.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В ЯДЕРНОМ ЭКСПОРТНОМ КОМПЛЕКСЕ С RAN, МУТАГЕНЕЗ 428-GLU — ASP-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 550 Q → A: Повышает активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов; при использовании с A-553 и A-590.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 553 R → A: усиливает активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов; в сочетании с А-550 и А-590.Устраняет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса; когда он связан с А-513 и А-554.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 554 F → A: частично устраняет активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов. Устраняет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса; когда связан с А-561. Устраняет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса; когда он связан с А-553 и А-513.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В ЯДЕРНОМ ЭКСПОРТНОМ КОМПЛЕКСЕ С RAN, МУТАГЕНЕЗ 428-GLU — ASP-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 561 F → A: отменяет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса. Устраняет активность связывания Ran и образование ядерного экспортного комплекса; когда связан с А-554.Не отменяет активность связывания Ran и частично устраняет образование ядерного экспортного комплекса; когда он связан с A-525.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 568 K → A: не отменяет активность связывания Ran и частично отменяет образование ядерных экспортных комплексов; когда он связан с А-525 и А-572.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 572 F → A: не отменяет активность связывания Ran и частично отменяет образование ядерных экспортных комплексов; когда он связан с A-525 и A-568.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 583 M → A: усиливает активность связывания Ran; когда он связан с A-590.

    Ручное утверждение, основанное на эксперименте на i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОМПОНЕНТОВ В ЯДЕРНОМ СМЕЩЕНИИ 42 -ГЛУ — АСП-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1
    Мутагенез i 590 K → A: Повышает активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов. Повышает активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов; когда связан с А-583. Повышает активность связывания Ran и не отменяет образование ядерных экспортных комплексов; когда связан с А-550 и А-553.

    Ручное утверждение на основе эксперимента в i

    • Цитируется по: РЕНТГЕНОВСКАЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЯ (2.3 АНГСТРОМА) 707-1027, ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (22 АНГСТРОМА), ИДЕНТИФИКАЦИЯ В ЯДЕРНОМ ЭКСПОРТНОМ КОМПЛЕКСЕ С RAN, МУТАГЕНЕЗ 428-GLU — ASP-447; 430-ВАЛ — ЛИС-446; 430-ВАЛ — ВАЛ-433; TYR-454; GLU-513; НОУ-525; GLN-550; АРГ-553; PHE-554; PHE-561; LYS-568; PHE-572; МЕТ-583 И ЛИС-590.
    1

    Подход функциональной геномики раскрывает CHE как компонент циркадных часов Arabidopsis в JSTOR

    Абстрактный

    Петли обратной связи транскрипции составляют молекулярную схему циркадных часов растений.У Arabidopsis центральная петля образуется между CCA1 и TOC1. Хотя CCA1 непосредственно репрессирует TOC1, белок TOC1 не имеет ДНК-связывающих доменов, что позволяет предположить, что он не может напрямую регулировать CCA1. Мы разработали функциональную геномную стратегию, которая привела к идентификации CHE, фактора транскрипции TCP, который специфически связывается с промотором CCA1. CHE является часовым компонентом, частично дублирующим LHY при подавлении CCA1. Экспрессия CHE регулируется CCA1, таким образом добавляя петлю обратной связи CCA1 / CHE к циркадной сети Arabidopsis.Поскольку CHE и TOC1 взаимодействуют, а CHE связывается с промотором CCA1, устанавливается молекулярная связь между регуляцией гена TOC1 и CCA1.

    Информация о журнале

    Science, основанный Томасом А. Эдисоном в 1880 году и издаваемый AAAS, сегодня является крупнейшим в мире общенаучным журналом с тиражом. Издаваемый 51 раз в год журнал Science известен своими высоко цитируемыми, рецензируемыми научными работами, своей особой силой в дисциплинах наук о жизни и отмеченным наградами освещением последних научных новостей.Интернет-издание включает в себя не только полный текст текущих выпусков, но и научные архивы, относящиеся к первому изданию Эдисона в 1880 году. В журнале Science Careers, в печатном и в Интернете, представлены соответствующие статьи о карьере, публикуемые еженедельно, тысячи объявлений о вакансиях обновляются несколько раз в неделю. неделя и другие услуги, связанные с карьерой. В интерактивном научном мультимедийном центре представлены научные подкасты, изображения и слайд-шоу, видео, семинары и другие интерактивные функции. Для получения дополнительной информации посетите www.sciencemag.org.

    Информация об издателе

    AAAS, основанная в 1848 году, превратилась в крупнейшее в мире междисциплинарное научное общество, насчитывающее почти 130 000 членов и подписчиков. Миссия «продвигать науку, технику и инновации во всем мире на благо всех людей» вывела организацию на передний план национальных и международных инициатив. Глобальные усилия включают программы и партнерства по всему миру, от Азии до Европы и Африки, а также обширную работу в области прав человека с использованием геопространственных технологий для подтверждения нарушений.Программы по науке и политике включают в себя крупный ежегодный форум по политике в области науки и технологий, стипендии в рамках политики в области науки и технологий в Конгрессе США и правительственных учреждениях, а также отслеживание финансирования США исследований в области НИОКР. Инициативы в области естественнонаучного образования заложили основу для обучения на основе стандартов и предоставляют учителям инструменты поддержки в Интернете. Мероприятия по привлечению общественности создают открытый диалог с учеными по таким социальным вопросам, как глобальное изменение климата. AAAS также выступает в качестве зонтичной организации для федерации, состоящей из более чем 270 аффилированных научных групп.Расширенная серия веб-сайтов включает в себя исчерпывающие ресурсы по развитию карьеры. Для получения дополнительной информации посетите www.aaas.org.

    Интимные функциональные взаимодействия между TGS1 и Smn-комплексом, выявленные при анализе развития глаза у дрозофилы

    % PDF-1.6 % 1 0 объект > поток doi: 10.1371 / journal.pgen.1008815

  • Паоло Маккаллини, Франческа Бавассо, Ливия Скатолини, Элизабетта Буччарелли, Джемма Новиелло, Вероника Лиси, Валерия Палумбо, Симона Д’Анджели, Стефано Каччионе, Джованни Дж. Ченччи, Джованни Дж. Ченччи,Уэйкфилд, Маурицио Гатти, Грация Даниэла Раффа
  • Интимные функциональные взаимодействия между TGS1 и Smn комплексом, выявленные при анализе развития глаза у дрозофилы
  • 10.1371 / journal.pgen.1008815 http://dx.doi.org/10.1371/journal.pgen.10088152020-06-11false10.1371/journal.pgen.1008815
  • www.plosgenetics.org
  • 10.1371 / journal.pgen.10088152020-06-11false
  • www.plosgenetics.org
  • конечный поток эндобдж 2 0 obj > эндобдж 5 0 obj > / ProcSet 14 0 R / XObject >>> эндобдж 6 0 obj [16 0 R 17 0 R 18 0 R 19 0 R 20 0 R 21 0 R 22 0 R 23 0 R 24 0 R 25 0 R 26 0 R 27 0 R 28 0 R 29 0 R 30 0 R 31 0 R 32 0 R 33 0 R 34 0 R 35 0 R 36 0 R 37 0 R 38 0 R] эндобдж 16 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 17 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 18 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 19 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 20 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 21 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 22 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 23 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 24 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 25 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 26 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 27 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 28 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 29 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 30 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 31 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 32 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 33 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 34 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 35 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 39 0 объект > эндобдж 36 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 40 0 объект > эндобдж 37 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 41 0 объект > эндобдж 38 0 объект > / Граница [0 0 0] >> эндобдж 42 0 объект > эндобдж 3 0 obj > поток х \ [su (!%, * `wiwf | O =,) bm / K0lv 0a8 + t> ʊ2 eEξI4͂ * ͱJAdduI0 & FeV, \ qYL 㠌 && VA &) Vĩ \ & q ؿ r7Q.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *