Тмг 630 расшифровка: Трансформатор ТМГ 630 10 0,4 кВА Купить цена

Проверьте также

Содержание: ОписаниеУсловное обозначение ТМЖ 2500/27. 5/0.4Условия эксплуатации ТМЖ 2500/27.5/0.4Как купить трансформатор ТМЖ 2500/27.5/0.4 Описание Трансформатор ТМЖ …

FTO контролирует обратимое метилирование РНК m6Am во время биогенеза мяРНК

SEC.gov | Превышен порог скорости запросов

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматизированных инструментов. Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов за пределами допустимой политики и будет обрабатываться до тех пор, пока не будут приняты меры по объявлению вашего трафика.

Объявите свой трафик, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.

Чтобы узнать о передовых методах эффективной загрузки информации с SEC.gov, в том числе о последних документах EDGAR, посетите sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте о программе открытых данных SEC, включая передовые методы, которые делают загрузку данных более эффективной, и улучшения SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценариям. Для получения дополнительной информации свяжитесь с opendata @ sec.губ.

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Код ссылки: 0.14ecef50.1636844308.6fbff93c

Дополнительная информация

Политика безопасности в Интернете

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности. В целях безопасности и обеспечения того, чтобы общедоступная служба оставалась доступной для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузки или изменения информации или иного причинения ущерба, включая попытки отказать пользователям в обслуживании.

Несанкционированные попытки загрузить информацию и / или изменить информацию в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры 1996 года (см. Раздел 18 USC §§ 1001 и 1030).

Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не влияет на возможность доступа других пользователей к SEC.содержание правительства. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, которые отправляют чрезмерное количество запросов. Текущие правила ограничивают пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества машин, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса (-ов) могут быть ограничены на короткий период. Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.губ. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерного автоматического поиска на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, чтобы повлиять на людей, просматривающих веб-сайт SEC.gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы гарантировать, что веб-сайт работает эффективно и остается доступным для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

границ | Циркадный контроль метаболизма часовым компонентом TOC1

Введение

Циркадная функция особенно важна для растений, регулируя почти все аспекты роста, развития и реакции на внутренние и внешние сигналы (Greenham and McClung, 2015).Циркадные молекулярные схемы были в значительной степени исследованы в модельной системе растений Arabidopsis thaliana (Sanchez and Kay, 2016). Важным компонентом циркадного осциллятора Arabidopsis является регулятор псевдоответа, известный как TIMING OF CAB EXPRESSION1 / PSEUDO RESPONSE REGULATOR1 (TOC1 / PRR1) (Strayer et al., 2000; Makino et al., 2002). Ритмичная экспрессия генов и накопление белка TOC1 важны для контроля циркадного периода с помощью часов (Strayer et al., 2000; Макино и др., 2002; Más et al., 2003a, b; Гендрон и др., 2012; Хуанг и др., 2012; Похилко и др., 2012; Fung-Uceda et al., 2018). TOC1 выполняет свою функцию путем репрессии экспрессируемых утром и вечером генов осцилляторов, лежащих в основе часов (Gendron et al., 2012; Huang et al., 2012; Pokhilko et al., 2012). На многие ритмические выходы влияет неправильная экспрессия TOC1, включая, среди прочего, клеточный цикл (Fung-Uceda et al., 2018), связанные с возрастом изменения циркадного периода в листьях (Kim et al., 2016), роста (Más et al., 2003a, b; Yamashino et al., 2008) или времени цветения (Somers et al., 1998; Más et al., 2003b; Niwa et al., 2007).

Циркадные часы влияют на время метаболизма у животных, и, таким образом, нарушение часов приводит к метаболическим нарушениям (Xu et al., 2008; Dibner and Schibler, 2015; Gill et al., 2015; Brown, 2016). У растений метаболизм в основном зависит от двух связанных с энергией органелл: хлоропластов и митохондрий (Sweetlove and Fernie, 2013). Хлоропласты превращают световую энергию в сахар, тогда как митохондрии превращают питательные вещества в энергию для удовлетворения энергетических потребностей клеток (Millar et al., 2011). Фотодыхание также поставляет большое количество НАДН в митохондрии (Lim et al., 2020). Фотосинтез в хлоропластах и ​​митохондриальное дыхание тесно связаны (Nunes-Nesi et al., 2011), но осуществляют почти противоположные реакции. Таким образом, эти действия должны быть точно скоординированы синхронно с внутренним клеточным статусом и внешними условиями. Фумарат является одним из промежуточных продуктов цикла TCA (Nunes-Nesi et al., 2013), который накапливается в больших количествах в листьях Arabidopsis из-за активности двух ферментов фумаразы (фумаратгидратазы) (FUM) (FUM1 и FUM2). (Чиа и др., 2000; Araújo et al., 2011). Arabidopsis Активность FUM2 составляет большую часть накопления фумарата в листьях (Chia et al., 2000; Nunes-Nesi et al., 2007). FUM2 Экспрессия и накопление фумарата следуют суточным колебаниям (Chia et al., 2000; Nunes-Nesi et al., 2007; Pracharoenwattana et al., 2010) с более высоким накоплением в течение светового периода. Фумарат и крахмал были предложены в качестве альтернативных поглотителей углерода для фотосинтата (Chia et al., 2000; Tschoep et al., 2009; Pracharoenwattana et al., 2010).

Связь циркадных часов с хлоропластами и фотосинтетической активностью была твердо установлена ​​(McClung et al., 2000; Dodd et al., 2005; Haydon et al., 2013; Noordally et al., 2013; Atkins and Dodd, 2014). ). Сообщалось также о Diel или циркадных ритмах в связанной с метаболизмом экспрессии генов или накоплении белка (McClung et al., 2000; Michalecka et al., 2003; Blasing et al., 2005; Elhafez et al., 2006; Gibon et al. , 2006; Ли и др., 2010; Flis et al., 2019). Использование мутантных растений с одним, двумя и тремя часами показало измененную экспрессию генов и нарушение накопления органических кислот и других метаболитов (Fukushima et al., 2009; Sanchez-Villarreal et al., 2013; Flis et al., 2019), что указывает на что циркадные часы важны для правильного обмена веществ. Здесь мы объединяем широкий спектр подходов, включая исследования транскрипции, метаболомики, иммунопреципитации хроматина (ChIP) и генетического взаимодействия, чтобы показать, что функция TOC1 важна для контроля клеточного метаболизма, по крайней мере частично, посредством осцилляторной регуляции экспрессии фумаразы.Мы предполагаем, что TOC1 может функционировать как реостат в регуляции метаболизма синхронно с дневным и ночным циклами.

Материалы и методы

Растительный материал, условия выращивания и анализ люминесценции

Arabidopsis thaliana Линии (Columbia, Col-0) стерилизовали с поверхности, сушили на стерильной фильтровальной бумаге в шкафу с ламинарным потоком и высевали на чашки, содержащие агаровую среду Murashige и Skoog (MS) с добавлением или без добавления (как указано для каждого эксперимента) с 3% (мас. / Об.) Сахарозы.После 48 часов стратификации при 4 ° C в темноте чашки переносили в камеры с контролируемой средой (Inkoa Sistemas), и растения выращивали в различных фотопериодических условиях (короткие дни, ShD, 8 часов света: 16 часов темноты; длинные дни, LgD, 16 часов света: 8 часов темноты; LD, 12 часов света: 12 часов темноты) в течение 10–14 дней с 60–100 мкмоль м ^–2 с ^–1 холодным белым флуоресцентным светом при 22 ° C. Для экспериментов в условиях постоянного освещения растения, синхронизированные в циклах свет / темнота, переводили на постоянный свет (LL) на 2 дня перед сбором образцов.TOC1-ox (Huang et al., 2012), TOC1 RNAi (Más et al., 2003a), toc1-2 (NASC, N2107710) и TMG-YFP / toc1-2 (Huang et al., 2012) растения были описаны в другом месте. Трансформацию растений проводили по протоколам окунания цветов с использованием переноса, опосредованного Agrobacterium tumefaciens (GV2260) (Clough and Bent, 1998). In vivo Люминесцентный анализ проводили, как описано ранее (Takahashi et al., 2015). Вкратце, 6-дневные проростки, синхронизированные в циклах LD, переносили в 96-луночные планшеты и выпускали в условия LL.Анализы выполняли на люминометре LB960 (Berthold Technologies) с использованием программного обеспечения Microwin (Mikrotek Laborsysteme).

Конструкция плазмиды

Конструкцию FUM2-ox получали с помощью ПЦР-опосредованной амплификации кодирующей последовательности FUM2 (CDS) с последующим субклонированием в вектор pENTR / D-TOPO (Invitrogen). Полученный вектор, содержащий FUM2 CDS, использовали для трансформации химически компетентных клеток Escherichia coli (однократные клетки TOP10, Gateway ^® ).CDS FUM2 вводили в растительный вектор-получатель pGWB514 (35S pro, C-3xHA) (Nakagawa et al., 2007a, b) путем гомологичной рекомбинации с использованием реакции LR (Gateway ^® ). Векторы экспрессии (содержащие CDS FUM2 , слитые с тегом 4x-MYC и экспрессируемые под контролем промотора 35S) также использовали для трансформации химически компетентных клеток E. coli (однократный TOP10, Gateway ^® ). Растения WT и TOC1-ox трансформировали конструкцией FUM2-ox для получения единственного растения FUM2-ox и двойного растения FUM2-ox / TOC1-ox, соответственно.

Количественная ПЦР для экстракции РНК и обратной транскрипции

Около 20 проростков через 12–14 дней после стратификации (das) собирали каждые 4 часа в течение суточного или циркадного цикла. РНК очищали с использованием набора Maxwell 16 LEV simple RNA Tissue (Promega). РНК инкубировали с не содержащей РНКаз TURBO-ДНКазой (Ambion) для устранения загрязнения геномной ДНК. Одноцепочечную кДНК синтезировали с использованием 1 мкг РНК с использованием iScript ^TM Supermix для обратной транскрипции для RT-Q-PCR (Bio-rad) или набора для синтеза кДНК AffinityScript Q-PCR (Agilent).Для анализа кПЦР кДНК разводили в пять раз водой, свободной от нуклеаз, и кПЦР выполняли с 10% разведенной кДНК с помощью Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green Master Mix (Agilent) или iTag Universal SYBR Green Supermix (Bio-Rad) в 96-луночная система обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96 Touch (Bio-Rad). В качестве контроля использовали ген ИЗОПЕНТЕНИЛПИРОФОСФАТ: ДИМЕТИЛАЛЛИЛПИРОФОСФАТ ИЗОМЕРАЗА 2 ( IPP2 ) (Huang et al., 2012). Данные были проанализированы с использованием метода максимума второй производной.Полученные значения Cp были преобразованы в значения относительной экспрессии с использованием сравнительного метода Ct (Livak and Schmittgen, 2001).

Измерения аденилата с помощью ВЭЖХ

Содержание АДФ и АТФ измеряли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с 20 мг растительного сырья в сыром виде (Zhang et al., 2020). Вкратце, 0,2 мл 0,1 М HCl смешивали с растительным материалом на льду. 15 мкл экстракта / стандарта (разной концентрации) смешивали с 77 мкл буфера CP [62 мМ, моногидрат лимонной кислоты и 76 мМ (Na) ₂ HPO ₄ × 2H ₂ O] и 8 мкл 45% хлорацетальдегида и инкубируют при 80 ° C в течение 10 мин.Затем смесь центрифугировали при 16000 × g при 20 ° C в течение 30 минут. Затем 90 мкл супернатанта измеряли с помощью ВЭЖХ [колонка Hyperclone C18 (ODS) (Phenomenex)]. Результат рассчитывали с использованием стандартного градиента АДФ и АТФ.

Анализы иммунопреципитации хроматина

проводили, как описано ранее (Perales and Más, 2007). Примерно 1 г проростков 12–14 дней отбирали во время Zeitgeber Time 7 (ZT7) и циркадном времени 7 (CT7 для TOC1-ox и каждые 4 часа для растений TMG.Образцы фиксировали в 30 мл ледяного буфера для фиксации (0,4 М сахароза, 10 мМ Трис -HCl pH 8,0, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ PMSF, 1% формальдегид, 0,05% Тритон X-100) в течение 15 мин под давлением. вакуум. Фиксацию останавливали добавлением ледяного глицина 0,125 М и инкубацией в вакууме в течение 5 мин. Затем проростки трижды промывали ледяной водой и сушили. Полученные проростки растирали в жидком азоте и порошок дважды фильтровали через чудо. Экстракцию проводили экстракционным буфером I (0.4 M сахароза, 10 мМ Tris -HCl pH 8,0, 5 мМ β-меркаптоэтанол, 1 мМ PMSF, 5 мкг / мл лейпептин, 1 мкг / мл апротинин, 5 мкг / мл антипаин, 1 мкг / мл, пепстатин, 5 мкг / мл химостатина и 50 мкМ MG132). Затем ядра очищали центрифугированием при 4 ° C в течение 20 мин при 1000 g . Ядра промывали четыре раза центрифугированием при 4 ° C в течение 20 мин при 1000 г с 2 мл экстракционного буфера II (0,25 M сахароза, 10 мМ Tris -HCl pH 8,0, 10 мМ MgCl2, 1% Triton X- 100, 5 мМ β-меркаптоэтанол, 1 мМ PMSF, 5 мкг / мл лейпептина, 1 мкг / мл апротинина, 5 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл пепстатина, 5 мкг / мл химостатина и 50 мкМ MG132).Ядра ресуспендировали в 1 мл буфера для лизиса ядер (50 мМ Tris -HCl pH 8,0, 10 мМ EDTA, 1% SDS, 5 мкг / мл лейпептина, 1 мкг / мл апротинина, 5 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл. мл пепстатина, 5 мкг / мл химостатина и 50 мкМ MG132). 300 мкл хроматина обрабатывали ультразвуком до фрагментов размером примерно 500–1000 п.н. с помощью ультразвукового устройства (Bioruptor Next Generation, Diagenode). После центрифугирования при 12000 × g в течение 10 минут при 4 ° C 100 мкл растворимого хроматина (супернатант) разбавляли в 400 мкл буфера для разбавления ChIP (15 мМ Tris -HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% Triton-X-100, 1 мМ EDT, 1 мМ PMSF, 5 мкг / мл лейпептина, 1 мкг / мл апротинина, 5 мкг / мл антипаина, 1 мкг / мл пепстатина, 5 мкг / мл Химостатина и 50 мкМ MG132) и инкубировали в течение ночи при 4 ° C с 50 мкл магнитных шариков (Dynabeads, протеин G, Invitrogen) и с 1: 1000 (-) антителом против MYC (Sigma-Aldrich) для анализов с TOC1-ox. растения или антитела против GFP (Invitrogen от Thermo Fisher Scientific) для анализов с растениями TMG (Invitrogen). Иммунокомплексы дважды промывали 900 мкл буфера с низким содержанием соли (20 мМ Tris -HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% Triton X-100, 0,1% SDS, 2 мМ EDTA), дважды по 900 мкл высокосолевого буфера (20 мМ Tris-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 1% Triton X-100, 0,1 % SDS, 2 мМ EDTA), дважды 900 мкл промывочного буфера LiCl (10 мМ Tris -HCl pH 8,0, 0,25 М LiCl, 1% NP-40, 1% дезоксихолат натрия, 1 мМ EDT) и дважды 900 мкл мкл буфера ТЕ (10 мМ Трис -HCl pH 8,0, 1 мМ EDT). Иммунокомплексы элюировали 300 мкл 1% SDS и 0,1 М NaHCO3 с последующим 1 ч при 65 ° C для разрыва связей между антителами и белками.Затем добавляли 220 мМ NaCl для осаждения ДНК после инкубации в течение ночи при 65 ° C для обратного перекрестного связывания. Иммунопреципитированная ДНК выделялась с использованием набора QIAquick (Qiagen), следуя инструкциям производителя. Чипы количественно оценивали с помощью анализа QPCR с использованием 96-луночной системы обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96 Touch (BioRad). Расчет точки пересечения (Cp) использовался для количественной оценки с использованием анализа абсолютной количественной оценки методом 2-го максимума производной. Значения ChIP для каждого набора праймеров были нормализованы к входным значениям.

Профилирование метаболитов на основе ГХ-МС

Анализы метаболитов были выполнены в основном, как описано ранее (Lisec et al., 2006). Вкратце, проростки собирали в указанные моменты времени, немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C до дальнейшего анализа. Экстракцию метаболита проводили путем быстрого измельчения в жидком азоте и немедленного добавления буфера для экстракции (1,400 мкл метанола плюс 60 мкл 0,2 мг рибита на мл ^–1 воды). Экстракцию, дериватизацию, добавление стандарта и ввод образца проводили, как описано (Lisec et al., 2006) с небольшими доработками в оборудовании. Автоматический пробоотборник Gerstel Multi-Purpose system (Gerstel GmbH & Co., KG, Mülheim an der Ruhr, Германия) использовался для ввода образцов в хроматограф, соединенный с системой времяпролетного масс-спектрометра (GC-MS), Leco. Pegasus HT TOF-MS (LECO Corporation, Сент-Джозеф, Мичиган, США). Метаболиты были идентифицированы путем сравнения с записями в базе данных аутентичных стандартов (Kopka et al., 2005; Schauer et al., 2005). Хроматограммы и масс-спектры оценивали с помощью Chroma TOF 1.0 (Leco) и программное обеспечение TagFinder 4.0 (Luedemann et al., 2012). Относительное содержание метаболитов рассчитывали путем нормализации интенсивности сигнала по отношению к интенсивности сигнала рибита, который был добавлен в качестве внутреннего стандарта, и по свежему весу материала. Все данные также обрабатывались с использованием программного обеспечения Xcalibur 4.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) для проверки идентификации и аннотации метаболитов. Идентификация и аннотация обнаруженных пиков следовали рекомендациям по представлению данных о метаболитах (Fernie et al., 2011).

Фенотипирование розетки

Целые розетки 35-дневных проростков, растущих в почвенных горшках, отделяли и немедленно взвешивали на прецизионных весах (аналитические весы OHAUS Pioneer PA114C) для расчета свежего веса. Отделенные розетки немедленно помещали на трансиллюминатор и фотографировали (NIKON D7000) для дальнейшего анализа. Изображения розетки были обработаны с помощью программы ImageJ (Schneider et al., 2012). Сначала изображения были разделены с помощью инструмента цвета RGB. Затем изображения с синим каналом были преобразованы в 8-битные черно-белые изображения.После того, как для всех образцов была установлена ​​одна и та же шкала, были определены розетки с помощью инструмента отслеживания палочки и были получены площадь и периметр.

Результаты

Циркадная регуляция транскриптома, кодируемого ядерными митохондриями

Для определения осцилляторной транскрипции ядерно-кодируемых генов, связанных с митохондриями, мы использовали веб-инструмент DIURNAL (Mockler et al., 2007; Michael et al., 2008) и обнаружили, что около 65% генов, связанных с митохондриями (Chrobok и другие., 2016) демонстрировали колебательный паттерн экспрессии в условиях диэлита с фазами распространения пика, но особенно обогащались в середине ночи на ZT17-22 (рис. 1A). Анализ динамики времени с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-QPCR) подтвердил суточные колебания выбранных генов, принадлежащих к митохондриальным метаболическим путям (рисунки 1C, D и дополнительные рисунки 1A – J). Чтобы убедиться, что колебательный паттерн экспрессии контролируется циркадными часами, мы также использовали веб-инструмент DIURNAL (Mockler et al., 2007; Michael et al., 2008) и выполнили анализ в условиях LL. Наши исследования показали, что около 42% генов, связанных с митохондриями, демонстрируют циркадные колебания (рис. 1B). Эти результаты были также подтверждены анализами RT-QPCR (дополнительные рисунки 1K – T). Кроме того, анализ промоторов ACONITASE1 ( ACO1 ) и ALTERNATIVE NAD (P) H DEHYDROGENASE 1, ( NDA1 ), слитых с LUCIFERASE , также выявил ритмическую активность промоторов в обоих условиях (рисунки и 1). , F).В целом, данные веб-инструмента DIURNAL, наши анализы RT-QPCR и активности промоторов указывают на диэльские и циркадные колебания некоторых ядерно-кодируемых митохондриальных генов.

Фумаровая кислота является промежуточным звеном цикла TCA, синтезируемого под действием двух фумараз (FUM1 и FUM2). Поскольку суточные и циркадные колебания фумаровой кислоты снижались при низком уровне TOC1-ox и высоком уровне на toc1-2 (рисунок 5A и дополнительный рисунок 4A), мы сосредоточились на возможной регуляции генов FUM с помощью TOC1. Анализ динамики времени показал, что экспрессия FUM1 следовала колебаниям с низкой амплитудой (фиг. 5B), которая не была явно изменена в TOC1-ox (дополнительная фигура 4B).Напротив, экспрессия FUM2 четко колебалась с пиком экспрессии в середине дня при различных фотопериодах и в условиях LL (дополнительные рисунки 4C, D). Амплитуда экспрессии FUM2 снижалась в TOC1-ox и увеличивалась в toc1-2 в условиях захвата (фиг. 5C). При LL, FUM2 циркадный пик экспрессии был отменен в TOC1-ox (фиг. 5D) и увеличился в течение субъективного дня в toc1-2 (дополнительная фигура 4D).Эти результаты предполагают, что транскрипционные эффекты TOC1-ox и toc1-2 коррелируют с фенотипами накопления фумаровой кислоты.

Рисунок 5. ВРЕМЯ ЭКСПРЕССИИ КАБИНЫ1 контролирует суточную и циркадную экспрессию FUM2 путем прямого связывания с его промотором. (A) Относительное содержание фумаровой кислоты в WT, TOC1-ox и toc1-2 растений, унесенных циклами LD, а затем перенесенных на 2 дня в LL перед взятием проб в циркадном времени 7 (7 ч после субъективного рассвета) CT7 и CT19 . (B) Анализ динамики экспрессии FUM1 в растениях WT, выращенных в условиях LD или перенесенных на 2 дня в LL перед взятием образцов. (C) Анализ динамики экспрессии FUM2 в растениях WT, TOC1-ox и toc1-2 , выращенных в условиях LD. (D) Анализ динамики экспрессии FUM2 в растениях WT и TOC1-ox, выращенных в условиях LD, перенесенных на 2 дня в LL перед взятием образцов. (E) Иммунопреципитация хроматина (ChIP) с растениями TOC1-ox, выращенными при LD и отобранными на ZT7.Обогащение ChIP рассчитывали относительно входа. Образцы инкубировали с антителом против MYC (+ α) или без антитела (-α). (F) ChIP-анализы с растениями TMG, выращенными при LD, и образцы отбирались каждые 4 часа в течение дневного цикла. ChIPs выполняли с антителом против GFP для иммунопреципитации GFP-меченного белка TOC1. Обогащение ChIP рассчитывали относительно входа. Белая и серая области на панели (C) представляют день и ночь соответственно. Белые и пунктирные области на панели (D) представляют субъективный день и субъективную ночь, соответственно.Для всех экспериментов были выполнены три биологические повторы, с растениями, выращиваемыми независимо, и с образцами, собранными, обработанными и проанализированными в разное время. Двусторонний, т -тест WT Vs. TOX1ox p -значения: * p <0,05 и WT Vs. toc1-2 p -значения: # <0,05.

Наш предыдущий анализ массивного секвенирования иммунопреципитации хроматина (ChIP-Seq) показал, что FUM2 является одной из мишеней TOC1 (Huang et al., 2012). Чтобы проверить, происходит ли регуляция экспрессии гена FUM2 с помощью TOC1 посредством прямого связывания с локусом FUM2 , мы провели анализ ChIP с последующей количественной ПЦР (QPCR). Наши анализы с использованием растений TOC1-ox показали амплификацию промотора FUM2 до степени, аналогичной той, которая наблюдалась для положительного контроля (промотор CCA1 ) (рисунок 5E и дополнительный рисунок 4E). Промоторы других генов, связанных с метаболизмом ( ACO1 , DIC1 , NDA1 и PDK ), отрицательный контроль ( ACTIN ) или образцы, обработанные без антител (-α), не показали значительного обогащения при наши экспериментальные условия (рисунок 5E и дополнительный рисунок 4E).Мы также выполнили ChIP-анализы с проростками TOC1 Minigen (TMG), экспрессирующими геномный фрагмент TOC1 под промотором TOC1 (Más et al., 2003a). Наши анализы выявили ритмическое связывание с пиковым обогащением около ZT15 (рис. 5F). Связывание наблюдали в области промотора FUM2 , содержащей мотивы, связанные с циркадным ритмом, включая мотив, подобный вечернему элементу (EEL и AATATCT), ранее идентифицированный как мотив связывания TOC1, сайт связывания CCA1 (CBS и AAAAATCT) и элемент Morning Element (ME и CCACAC) (Michael et al., 2008) (Рисунок 5E). В совокупности результаты согласуются с прямым связыванием TOC1 с промотором FUM2 для регулирования его суточной и циркадной транскрипционной экспрессии, которая в конечном итоге также коррелирует с содержанием фумаровой кислоты.

Чрезмерная экспрессия FUM2 восстанавливает связанные с метаболизмом фенотипы TOC1-ox

Если фенотипы, наблюдаемые в TOC1-ox, обусловлены репрессией FUM2 , его избыточная экспрессия на фоне TOC1-ox должна уменьшать тяжесть фенотипов.Таким образом, затем мы провели исследования генетического взаимодействия путем трансформации растений TOC1-ox сверхэкспрессирующей конструкцией FUM2 (FUM2-ox) (дополнительные рисунки 5A, B). Серьезность фенотипов размера розетки и свежей массы TOC1-ox также была значительно улучшена у растений с двойным FUM2 / TOC1-ox по сравнению с одиночными TOC1-ox (Фигуры 6A, B и дополнительная фигура 5C). Подобное фенотипическое восстановление наблюдалось в двух разных линиях с двойной сверхэкспрессией (фиг. 6C и дополнительная фиг. 5C). Эти результаты предполагают, что пониженная экспрессия FUM2 в растениях TOC1-ox вносит вклад в наблюдаемые фенотипы и что чрезмерная экспрессия FUM2 смягчает эти фенотипы.Результаты также ограничивают возможность того, что наблюдаемые фенотипы растений TOC1-ox обусловлены косвенными плейотропными эффектами.

Рисунок 6. Сверхэкспрессия FUM2 частично восстанавливает молекулярные и физиологические фенотипы TOC1-ox. Розетка (A) по периметру и (B) свежей массы указанных генотипов, выращенных в условиях длинного дня (LgD). Каждая точка представляет собой одну розетку. Пунктирные линии показывают среднее значение WT. (C) Розетка 8-битных изображений.Данные представлены как среднее + SEM. Для всех экспериментов были выполнены три биологические повторы, при этом растения выращивались независимо, а образцы собирались, обрабатывались и анализировались в разное время.

Условия выращивания, имитирующие депривацию энергии, запускают альтернативные метаболические пути, включая индукцию генов, участвующих в катаболизме аминокислот с разветвленной цепью (BCAA) (Pedrotti et al., 2018). Примечательно, что экспрессия ряда катаболических генов аминокислот повышалась в TOC1-ox в течение ночи (Фигуры 7A, D, G).Повышение регуляции было более очевидным при более коротких фотопериодах (дополнительная фигура 5A). Гены были активированы в TOC1-ox, хотя растения выращивали в нормальных циклах, а не в условиях депривации энергии, в которых эти гены индуцируются. Другие гены, кодирующие аминокислотные катаболические ферменты, а также маркеры сахарного голодания, также индуцировались в растениях TOC1-ox (дополнительные рисунки 6B, C). Напротив, экспрессия гена подавлялась в FUM2-ox и в toc1-2 (Фигуры 7A, B, D, E, H).Повышающая регуляция экспрессии катаболического гена BCCA в TOC1-ox была преодолена в растениях с двойным FUM2 / TOC1-ox (рисунки 7C, F, I), что позволяет предположить, что наблюдаемые фенотипы в TOC1-ox действительно опосредованы сниженным выражение FUM2 . Результаты подтверждают перенаправленный протеолитический метаболизм из-за измененного энергетического статуса растений, не экспрессирующих TOC1.

Рис. 7. Исследования генетического взаимодействия молекулярных сигнатур, показывающих депривацию энергии.Анализ динамики с помощью RT-QPCR (A – C) ФЛАВОПРОТЕИН ПЕРЕДАЧИ ЭЛЕКТРОНОВ: УБИХИНОН ОКСИДО-РЕДУКТАЗА ( ETFQO ), (D – F) METHYLCROTONYL-CO000 () и (G – I) DARK INDUCIBLE 3 Экспрессия гена ( BCE2 / DIN3 ) в указанных генотипах, выращенных в циклах LD. Данные представлены как среднее + SEM. Белая и серая области представляют день и ночь соответственно. Некоторые данные повторяются на разных графиках для облегчения сравнения генотипов.Были выполнены два (FUM2-ox) и три (WT, TOC1-ox, toc1-2 и FUM2 / TOC1-ox) биологических повтора с растениями, выращиваемыми независимо, с образцами, собранными, обработанными и проанализированными в разное время.

Обсуждение

Временная компартментализация метаболизма широко распространена как у одноклеточных, так и у многоклеточных организмов. Из-за их сидячей природы и высокоразвитых клеток (Sweetlove and Fernie, 2013) точное пространственно-временное распределение метаболических процессов особенно важно для растений.Механизмы, зависящие от часов в сотрудничестве со специфическими регуляторными путями, позволяют растениям активно предвидеть и подготавливать реакции синхронно с внутренними метаболическими сигналами и внешними сигналами окружающей среды (Smith and Stitt, 2007; Sanchez-Villarreal et al., 2013). Мы идентифицировали молекулярный механизм, который связывает циркадные часы с регуляцией метаболизма у Arabidopsis thaliana .

Наши результаты показывают, что правильная экспрессия TOC1 важна для основных и циркадных колебаний сахаров, аминокислот и промежуточных продуктов TCA.Было также обнаружено, что промежуточные продукты TCA, включая фумарат, накапливаются в тройных мутантных растениях d975 ( PRR9, PRR7 и PRR5 ) (Fukushima et al., 2009). По сравнению с TOC1-ox фенотипы растений toc1-2 были менее серьезными, что указывает на возможную функциональную избыточность с другими членами семейства PRR (например, PRR5). В целом профили метаболитов были сопоставимы с теми, о которых сообщалось ранее (Flis et al., 2019), с некоторыми различиями, которые можно объяснить разными стадиями развития растений и условиями выращивания.Наши результаты показывают, что TOC1 регулирует экспрессию FUM2 . Соответственно, экспрессия FUM2 подавлялась индукцией REVEILLE8 (Hsu et al., 2013), ранее описанного активатора TOC1 (Hsu et al., 2013; Xing et al., 2015; Ma et al., 2015; Ma et al., 2013). др., 2018). Измененное накопление фумарата в растениях, неправильно экспрессирующих TOC1, предполагает, что регуляция транскрипции FUM2 ответственна за наблюдаемые паттерны изменения фумарата.Аналогичный вывод можно сделать из наших исследований генетического взаимодействия с использованием растений FUM2-ox. Поскольку фумарат и крахмал служат альтернативными поглотителями углерода для фотосинтата (Chia et al., 2000; Tschoep et al., 2009; Pracharoenwattana et al., 2010), регулирование накопления фумарата (и других метаболитов) с помощью TOC1 обеспечивает новый способ для суточных часов для контроля клеточного метаболизма в дополнение к ранее описанному посредством контроля метаболизма крахмала.

Мы также обнаружили, что TOC1 напрямую связывается с промотором FUM2 , чтобы регулировать его суточную и циркадную транскрипционную экспрессию.Хотя предыдущие исследования предоставили доказательства того, что несколько выходов суточных часов регулируют различные паттерны метаболизма C и N, связывание TOC1 с промотором FUM2 и регуляция экспрессии FUM2 обеспечивают новый прямой молекулярный механизм, связывающий TOC1 с циркадным метаболизмом. Наши результаты также предполагают, что при нормальных циклах LD потребность в энергии в растениях, неправильно экспрессирующих TOC1, не обеспечивается должным образом, так что запускаются альтернативные пути генерации энергии.Многие из ферментов пути BCAA расположены в митохондриях (Taylor et al., 2004), а гены BCAA демонстрируют ритмы в течение суточного цикла (Blasing et al., 2005; Lee et al., 2010), транскрипционно репрессированные посредством свет (Ishizaki et al., 2005, 2006). Вероятно, что нарушение энергетического гомеостаза в TOC1-ox вызывает реакцию тревоги для получения энергии из других источников, в данном случае катаболизма разветвленных аминокислот. Анализы мутантных растений Arabidopsis tic показали измененное накопление крахмала, углеводов, аминокислот и фумарата.Другие промежуточные продукты цикла TCA не претерпели значительных изменений у мутанта tic (Sanchez-Villarreal et al., 2013), предполагая, что фенотипы обусловлены измененным балансом использования углерода и азота.

У млекопитающих циркадная регуляция метаболизма зависит как от системных, так и от местных сигналов (Brown, 2016), влияющих на основные пути на клеточном уровне и метаболический гомеостаз во всем организме (Asher and Schibler, 2011). У растений митохондриальный протеом варьируется в зависимости от метаболических требований различных тканей (des Francs-Small et al., 1992; Bardel et al., 2002; Ли и др., 2008). Основываясь на циркадной связи между побегами и корнями у Arabidopsis (James et al., 2008; Takahashi et al., 2015; Chen et al., 2020), было бы интересно проанализировать возможные клетки, ткани, и органоспецифичность регуляции метаболизма по часам, а также выявление возможных системных сигналов, способных передавать энергетический статус между различными частями растения для повышения продуктивности и приспособленности. Более того, связанные с метаболизмом органеллы не функционируют изолированно внутри клетки, но тесно связаны с другими ключевыми клеточными путями, включая клеточный цикл (Kianian and Kianian, 2014).Поскольку циркадные часы контролируют время клеточного цикла у растений (Fung-Uceda et al., 2018), возможно, что циркадное взаимодействие с клеточным циклом также может играть роль в регулировании клеточного метаболизма у растений. Наши результаты открывают путь для дальнейших исследований, использующих хронобиологию метаболизма для улучшения метаболического гомеостаза и клеточной энергии у растений и животных.

Близинг, О.Э., Гибон Ю., Гюнтер М., Хоне М., Моркуенде Р., Осуна Д. и др. (2005). Сахара и циркадная регуляция вносят основной вклад в глобальную регуляцию суточной экспрессии генов у Arabidopsis . Растительная клетка 17, 3257–3281. DOI: 10.1105 / tpc.105.035261

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Chen, W. W., Takahashi, N., Hirata, Y., Ronald, J., Porco, S., Davis, S.J., et al. (2020). Мобильный ELF4 доставляет информацию о циркадной температуре от побегов до корней. Nat. Растения 6, 416–426. DOI: 10.1038 / s41477-020-0634-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чиа Д. В., Йодер Т. Дж., Рейтер В. Д. и Гибсон С. И. (2000). Фумаровая кислота: недооцененная форма связанного углерода в Arabidopsis и других видах растений. Planta 211, 743–751. DOI: 10.1007 / s004250000345

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хробок, Д., Ло, С. Р., Брауэр, Б., Линден, П., Циолковска, А., Либш, Д. и др. (2016). Анализ метаболической роли митохондрий во время старения листьев. Plant Physiol. 172, 2132–2153. DOI: 10.1104 / стр. 16.01463

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Клаф, С. Дж., И Бент, А. Ф. (1998). Цветочное погружение: упрощенный метод опосредованной Agrobacterium трансформации Arabidopsis thaliana . Plant J. 16, 735–743. DOI: 10.1046 / j.1365-313X.1998.00343.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

des Francs-Small, C. C., Ambard-Bretteville, F., Darpas, A., Sallantin, M., Huet, J. C., Pernollet, J. C., et al. (1992). Варьирование полипептидного состава митохондрий, выделенных из разных тканей картофеля. Plant Physiol. 98, 273–278. DOI: 10.1104 / стр.98.1.273

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Додд, А. Н., Салатия, Н., Холл, А., Кевей, Э., Тот, Р., Надь, Ф. и др. (2005). Циркадные часы растений увеличивают фотосинтез, рост, выживаемость и конкурентное преимущество. Наука 309, 630–633. DOI: 10.1126 / science.1115581

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эльхафез Д., Мурча М. В., Клифтон Р., Сул К. Л., Дэй Д. А. и Уилан Дж. (2006). Характеристика митохондриальных альтернативных NAD (P) H дегидрогеназ в Arabidopsis : расположение и экспрессия в органеллах. Physiol растительных клеток. 47, 43–54. DOI: 10.1093 / pcp / pci221

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ферни, А. Р., Ахарони, А., Виллмитцер, Л., Стит, М., Тохге, Т., Копка, Дж., И др. (2011). Рекомендации по представлению данных о метаболитах. Растительная клетка 23, 2477–2482. DOI: 10.1105 / tpc.111.086272

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Флис, А., Менгин, В., Иваков, А.А., Магфорд, С.Т., Хуббертен, Х.М., Энке Б. и др. (2019). Несколько выходных сигналов суточных часов регулируют общий оборот запасов углерода и азота. Среда растительных клеток. 42, 549–573. DOI: 10.1111 / pce.13440

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фукусима А., Кусано М., Накамичи Н., Кобаяши М., Хаяси Н., Сакакибара Х. и др. (2009). Влияние связанных с часами регуляторов псевдо-ответа Arabidopsis на метаболическую координацию. Proc. Natl. Акад.Sci. США 106, 7251–7256. DOI: 10.1073 / pnas.02106

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фунг-Учеда, Дж., Ли, К., Со, П. Дж., Полин, С., Де Вейлдер, Л., и Мас, П. (2018). Циркадные часы устанавливают время лицензирования репликации ДНК для регулирования роста арабидопсиса . Dev. Ячейка 45, 101–113.e4. DOI: 10.1016 / j.devcel.2018.02.022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гендрон, Дж. М., Прунеда-Пас, Дж.Л., Доэрти, К. Дж., Гросс, А. М., Кан, С. Е., и Кей, С. А. (2012). Arabidopsis Белок циркадных часов, TOC1, является ДНК-связывающим фактором транскрипции. Proc. Natl. Акад. Sci. США 109, 3167–3172. DOI: 10.1073 / pnas.1200355109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гибон Ю., Усадель Б., Блэзинг О., Камлаге Б., Хёне М., Третуэй Р. и др. (2006). Интеграция метаболита с транскриптом и профили активности фермента в течение суточных циклов в розетках Arabidopsis . Genome Biol. 7: R76. DOI: 10.1186 / GB-2006-7-8-R76

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гилл, С., Ле, Х. Д., Мелкани, Г. К., и Панда, С. (2015). Ограниченное по времени кормление ослабляет возрастную сердечную недостаточность у Drosophila . Наука 347, 1265–1269. DOI: 10.1126 / science.1256682

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хейдон, М. Дж., Мельчарек, О., Робертсон, Ф. К., Хаббард, К.Э., Уэбб А. Р. (2013). Фотосинтетический захват циркадных часов Arabidopsis thaliana . Природа 502, 689–692. DOI: 10.1038 / природа12603

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг В., Перес-Гарсия П., Похилко А., Миллар А. Дж., Антошечкин И., Рихманн Дж. Л. и др. (2012). Отображение ядра циркадных часов Arabidopsis определяет сетевую структуру осциллятора. Наука 336, 75–79.DOI: 10.1126 / science.1219075

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ишизаки, К., Ларсон, Т. Р., Шауэр, Н., Ферни, А. Р., Грэм, И. А., и Ливер, К. Дж. (2005). Критическая роль флавопротеина: убихинон оксидоредуктазы Arabidopsis в переносе электронов во время голодания, вызванного темнотой. Растительная клетка 17, 2587–2600. DOI: 10.1105 / tpc.105.035162

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ишизаки, К., Шауэр, Н., Ларсон, Т. Р., Грэм, И. А., Ферни, А. Р., и Ливер, К. Дж. (2006). Комплекс флавопротеидов митохондриального переноса электронов необходим для выживания Arabidopsis в длительной темноте. Завод J. 47, 751–760. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2006.02826.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джеймс, А. Б., Монреаль, Дж. А., Ниммо, Г. А., Келли, К. Л., Херзик, П., Дженкинс, Г. И. и др. (2008). Циркадные часы в корнях Arabidopsis — это упрощенная подчиненная версия часов в побегах. Наука 322, 1832–1835. DOI: 10.1126 / science.1161403

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, Х., Ким, Ю., Йом, М., Лим, Дж., И Нам, Х. Г. (2016). Возрастные изменения циркадного периода в листьях Arabidopsis . J. Exp. Бот. 67, 2665–2673. DOI: 10.1093 / jxb / erw097

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Копка, Дж., Шауэр, Н., Крюгер, С., Биркемейер, К., Усадель, Б., Бергмюллер, Э. и др. (2005). [email protected]: база данных метаболома Голма. Биоинформатика 21, 1635–1638. DOI: 10.1093 / биоинформатика / bti236

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, К. П., Юбель, Х., Миллар, А. Х. (2010). Суточные изменения функции митохондрий свидетельствуют о ежедневной оптимизации светового и темнового дыхательного метаболизма у арабидопсиса . Мол. Клетка. Протеомика 9, 2125–2139. DOI: 10.1074 / mcp.M110.001214

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, К.П., Юбель Х., О’Тул Н. и Миллар А. Х. (2008). Неоднородность митохондриального протеома для фотосинтетического и нефотосинтетического метаболизма Arabidopsis . Мол. Клетка. Протеомика 7, 1297–1316. DOI: 10.1074 / mcp.M700535-MCP200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лим, С. Л., Вун, К. П., Гуан, X., Янг, Ю., Гардестрем, П., и Лим, Б. Л. (2020). In planta исследование фотосинтеза и фотодыхания с использованием датчиков флуоресцентных белков NADPH и NADH / NAD +. Nat. Commun. 11, 1–12. DOI: 10.1038 / s41467-020-17056-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lisec, J., Schauer, N., Kopka, J., Willmitzer, L., and Fernie, A.R. (2006). Газовая хроматография, масс-спектрометрия, определение профиля метаболитов растений. Nat. Protoc. 1, 387–396. DOI: 10.1038 / nprot.2006.59

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ливак, К. Дж., И Шмитген, Т. Д. (2001). Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2-ΔΔCT. Методы 25, 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Людеманн А., фон Малотки Л., Эрбан А. и Копка Дж. (2012). «TagFinder: программное обеспечение предварительной обработки для снятия отпечатков пальцев и профилирования анализов метаболома на основе газовой хроматографии и масс-спектрометрии», в Plant Metabolomics: Methods and Protocols , eds NW Hardy and RD Hall (Totowa, NJ: Humana Press), 255–286 . DOI: 10.1007 / 978-1-61779-594-7_16

CrossRef Полный текст | Google Scholar

млн лет назад, Гил, С., Грассер, К. Д., и Мас, П. (2018). Целевое рекрутирование базального транскрипционного аппарата компонентами часов LNK контролирует циркадные ритмы возникающих РНК в Arabidopsis . Растительная клетка 30, 907–924. DOI: 10.1105 / tpc.18.00052

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Макино, С., Мацусика, А., Кодзима, М., Ямасино, Т., и Мизуно, Т. (2002). Квинтет APRR1 / TOC1 участвует в циркадных ритмах Arabidopsis thaliana : характеристика с растениями, избыточно экспрессирующими APRR1. Physiol растительных клеток. 43, 58–69. DOI: 10.1093 / pcp / pcf005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мас, П., Алабади, Д., Яновский, М. Дж., Ояма, Т., и Кей, С. А. (2003a). Двойная роль TOC1 в контроле циркадных и фотоморфогенных ответов у Arabidopsis . Растительная клетка 15, 223–236. DOI: 10.1105 / tpc.006734

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мас, П., Ким, В.-Й., Сомерс, Д.Э. и Кей С.А. (2003b). Направленная деградация TOC1 с помощью ZTL модулирует циркадную функцию у Arabidopsis thaliana . Природа 426, 567–570. DOI: 10.1038 / nature02163

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

МакКлунг, К. Р., Хсу, М., Пейнтер, Дж. Э., Ганье, Дж. М., Карлсберг, С. Д., и Саломе, П. А. (2000). Интегрированная временная регуляция фотодыхательного пути. циркадная регуляция двух генов Arabidopsis , кодирующих серингидроксиметилтрансферазу. Plant Physiol. 123, 381–392. DOI: 10.1104 / стр.123.1.381

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Майкл, Т. П., Моклер, Т. К., Бретон, Г., МакЭнти, К., Байер, А., Траут, Дж. Д. и др. (2008). Конвейер сетевого обнаружения проливает свет на консервативные цис-регулирующие модули, зависящие от времени суток. PLoS Genet. 4: e14. DOI: 10.1371 / journal.pgen.0040014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Михалецкая, А.М., Свенссон, ÅS., Йоханссон, Ф. И., Агиус, С. К., Йохансон, У., Бреннике, А. и др. (2003). Arabidopsis гены, кодирующие митохондриальные NAD (P) H дегидрогеназы II типа, имеют различное эволюционное происхождение и проявляют различные реакции на свет. Физиология растений 133, 642–652. DOI: 10.1104 / стр.103.024208

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миллар А. Х., Уилан Дж., Сул К. Л. и Дэй Д. А. (2011). Организация и регуляция митохондриального дыхания у растений. Annu. Rev. Plant Biol. 62, 79–104. DOI: 10.1146 / annurev-arplant-042110-103857

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Моклер, Т. К., Майкл, Т. П., Прист, Х. Д., Шен, Р., Салливан, К. М., Гиван, С. А. и др. (2007). Проект DIURNAL: профили экспрессии DIURNAL и циркадных ритмов, сопоставление с образцом на основе моделей и анализ промоторов. Колд Спринг Харб. Symp. Quant. Биол. 72, 353–363.

Google Scholar

Накагава Т., Kurose, T., Hino, T., Tanaka, K., Kawamukai, M., Niwa, Y., et al. (2007a). Разработка серии шлюзовых бинарных векторов, pGWB, для реализации эффективного конструирования гибридных генов для трансформации растений. J. Biosci. Bioeng. 104, 34–41. DOI: 10.1263 / jbb.104.34

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Накагава Т., Судзуки Т., Мурата С., Накамура С., Хино Т., Маэо К. и др. (2007b). Улучшенные бинарные векторы-шлюзы: высокопроизводительные векторы для создания гибридных конструкций в трансгенном анализе растений. Biosci. Biotechnol. Biochem. 71, 2095–2100. DOI: 10.1271 / bbb.70216

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нива, Ю., Ито, С., Накамичи, Н., Мидзогути, Т., Нийнума, К., Ямасино, Т., и др. (2007). Генетические связи генов, связанных с циркадными часами, TOC1, CCA1 и LHY, в фотопериодическом контроле времени цветения у Arabidopsis thaliana . Physiol растительных клеток. 48, 925–937. DOI: 10,1093 / pcp / pcm067

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нордально, З.Б., Исии, К., Аткинс, К. А., Уэтерилл, С. Дж., Кусакина, Дж., Уолтон, Э. Дж. И др. (2013). Циркадный контроль транскрипции хлоропластов с помощью кодируемого ядерным сигналом времени. Наука 339, 1316–1319. DOI: 10.1126 / science.1230397

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нунес-Неси, А., Араужо, В. Л., и Ферни, А. Р. (2011). Ориентация на метаболизм и механизмы митохондрий как средство усиления фотосинтеза. Plant Physiol. 155, 101–107.DOI: 10.1104 / стр.110.163816

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нунес-Неси, А., Араужо, В. Л., Обата, Т., и Ферни, А. Р. (2013). Регуляция митохондриального цикла трикарбоновых кислот. Curr. Opin. Plant Biol. 16, 335–343. DOI: 10.1016 / j.pbi.2013.01.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Nunes-Nesi, A., Carrari, F., Gibon, Y., Sulpice, R., Lytovchenko, A., Fisahn, J., et al. (2007). Дефицит активности митохондриальной фумаразы у растений томата нарушает фотосинтез, влияя на функцию устьиц. Plant J. 50, 1093–1106. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2007.03115.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Pedrotti, L., Weiste, C., Nägele, T., Wolf, E., Lorenzin, F., Dietrich, K., et al. (2018). Связанная с Snf1 KINASE1-контролируемая передача сигналов C / S1-bZIP активирует альтернативные митохондриальные метаболические пути для обеспечения выживания растений в продолжительной темноте. Растительная клетка 30, 495–509. DOI: 10.1105 / tpc.17.00414

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пералес, М., и Мас, П. (2007). Функциональная связь между ритмическими изменениями в структуре хроматина и биологическими часами Arabidopsis . Растительная клетка 19, 2111–2123. DOI: 10.1105 / tpc.107.050807

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Похилко А., Фернандес А. П., Эдвардс К. Д., Саузерн М. М., Холлидей К. Дж. И Миллар А. Дж. (2012). Схема тактового гена в Arabidopsis включает репрессилятор с дополнительными петлями обратной связи. Мол. Syst. Биол. 8: 574. DOI: 10.1038 / msb.2012.6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Pracharoenwattana, I., Zhou, W., Keech, O., Francisco, P. B., Udomchalothorn, T., Tschoep, H., et al. (2010). Arabidopsis содержит цитозольную фумаразу, необходимую для массового выделения фотосинтата в фумаровую кислоту и для быстрого роста растений при высоком содержании азота. Plant J. 62, 785–795. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2010.04189.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Санчес, С.Э., Кей С.А. (2016). Циркадные часы растений: от простого хронометриста до сложного менеджера по развитию. Колд Спринг Харб. Перспектива. Биол. 8: a027748. DOI: 10.1101 / cshperspect.a027748

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sanchez-Villarreal, A., Shin, J., Bujdoso, N., Obata, T., Neumann, U., Du, S.-X., et al. (2013). ВРЕМЯ ДЛЯ КОФЕ является важным компонентом поддержания метаболического гомеостаза у Arabidopsis thaliana . Plant J. 76, 188–200. DOI: 10.1111 / tpj.12292

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шауэр Н., Штайнхаузер Д., Стрелков С., Шомбург Д., Эллисон Г., Мориц Т. и др. (2005). Библиотеки ГХ-МС для быстрой идентификации метаболитов в сложных биологических образцах. FEBS Lett. 579, 1332–1337. DOI: 10.1016 / j.febslet.2005.01.029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сомерс, Д.Э., Уэбб А. Р., Пирсон М. и Кей С. А. (1998). Короткопериодический мутант toc1-1 изменяет регуляцию суточных часов множественных выходов на протяжении развития у Arabidopsis thaliana . Девелопмент 125, 485–494.

Google Scholar

Страйер К., Ояма Т., Шульц Т. Ф., Раман Р., Сомерс Д. Э., Мас П. и др. (2000). Клонирование часового гена TOC1 арабидопсиса , гомолога регулятора ауторегуляторной реакции. Наука 289, 768–771.DOI: 10.1126 / science.289.5480.768

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Sweetlove, Л. Дж., И Ферни, А. Р. (2013). Пространственная организация обмена веществ в растительной клетке. Annu. Rev. Plant Biol. 64, 723–746. DOI: 10.1146 / annurev-arplant-050312-120233

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Такахаши, Н., Хирата, Ю., Айхара, К., и Мас, П. (2015). Иерархическая сеть с несколькими осцилляторами управляет циркадной системой Arabidopsis . Cell 163, 148–159. DOI: 10.1016 / j.cell.2015.08.062

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тейлор Н. Л., Хизлвуд Дж. Л., Дэй Д. А. и Миллар А. Х. (2004). Зависящий от липоевой кислоты окислительный катаболизм α-кетокислот в митохондриях свидетельствует о катаболизме аминокислот с разветвленной цепью у Arabidopsis . Plant Physiol. 134, 838–848. DOI: 10.1104 / стр.103.035675

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Tschoep, H., Гибон, Ю., Карилло, П., Арменгауд, П., Щековка, М., Нунес-Неси, А. и др. (2009). Регулировка роста и центрального метаболизма до умеренного, но устойчивого ограничения азота у Arabidopsis . Среда растительных клеток. 32, 300–318. DOI: 10.1111 / j.1365-3040.2008.01921.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Xing, H., Wang, P., Cui, X., Zhang, C., Wang, L., Liu, X., et al. (2015). Рекрутирование LNK1 и LNK2 в вечерний элемент требует утренних экспрессированных циркадных ритмов, связанных с MYB-подобными факторами транскрипции. Завод Сигнал. Behav. 10: e1010888. DOI: 10.1080 / 15592324.2015.1010888

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сюй К., Чжэн Х. и Сегал А. (2008). Регуляция питания и метаболизма нейрональными и периферическими часами у Drosophila . Cell Metab. 8, 289–300. DOI: 10.1016 / j.cmet.2008.09.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ямасино, Т., Ито, С., Нива, Ю., Кунихиро, А., Nakamichi, N., и Mizuno, T. (2008). Участие Arabidopsis -ассоциированных с часами регуляторов псевдоответа в суточных колебаниях экспрессии генов в присутствии временных сигналов окружающей среды. Physiol растительных клеток. 49, 1839–1850. DOI: 10.1093 / pcp / pcn165

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжан Ю., Кранерт И., Больц А., Гибон Ю. и Ферни А. Р. (2020). Измерения адениновых нуклеотидов и никотинамидадениндинуклеотидов в растениях. Curr. Protoc. Plant Biol. 5: e20115. DOI: 10.1002 / cppb.20115

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

XPO1 — Exportin-1 — Homo sapiens (Human)

Подход функциональной геномики раскрывает CHE как компонент циркадных часов Arabidopsis в JSTOR

Петли обратной связи транскрипции составляют молекулярную схему циркадных часов растений.У Arabidopsis центральная петля образуется между CCA1 и TOC1. Хотя CCA1 непосредственно репрессирует TOC1, белок TOC1 не имеет ДНК-связывающих доменов, что позволяет предположить, что он не может напрямую регулировать CCA1. Мы разработали функциональную геномную стратегию, которая привела к идентификации CHE, фактора транскрипции TCP, который специфически связывается с промотором CCA1. CHE является часовым компонентом, частично дублирующим LHY при подавлении CCA1. Экспрессия CHE регулируется CCA1, таким образом добавляя петлю обратной связи CCA1 / CHE к циркадной сети Arabidopsis.Поскольку CHE и TOC1 взаимодействуют, а CHE связывается с промотором CCA1, устанавливается молекулярная связь между регуляцией гена TOC1 и CCA1.

Science, основанный Томасом А. Эдисоном в 1880 году и издаваемый AAAS, сегодня является крупнейшим в мире общенаучным журналом с тиражом. Издаваемый 51 раз в год журнал Science известен своими высоко цитируемыми, рецензируемыми научными работами, своей особой силой в дисциплинах наук о жизни и отмеченным наградами освещением последних научных новостей.Интернет-издание включает в себя не только полный текст текущих выпусков, но и научные архивы, относящиеся к первому изданию Эдисона в 1880 году. В журнале Science Careers, в печатном и в Интернете, представлены соответствующие статьи о карьере, публикуемые еженедельно, тысячи объявлений о вакансиях обновляются несколько раз в неделю. неделя и другие услуги, связанные с карьерой. В интерактивном научном мультимедийном центре представлены научные подкасты, изображения и слайд-шоу, видео, семинары и другие интерактивные функции. Для получения дополнительной информации посетите www.sciencemag.org.

AAAS, основанная в 1848 году, превратилась в крупнейшее в мире междисциплинарное научное общество, насчитывающее почти 130 000 членов и подписчиков. Миссия «продвигать науку, технику и инновации во всем мире на благо всех людей» вывела организацию на передний план национальных и международных инициатив. Глобальные усилия включают программы и партнерства по всему миру, от Азии до Европы и Африки, а также обширную работу в области прав человека с использованием геопространственных технологий для подтверждения нарушений.Программы по науке и политике включают в себя крупный ежегодный форум по политике в области науки и технологий, стипендии в рамках политики в области науки и технологий в Конгрессе США и правительственных учреждениях, а также отслеживание финансирования США исследований в области НИОКР. Инициативы в области естественнонаучного образования заложили основу для обучения на основе стандартов и предоставляют учителям инструменты поддержки в Интернете. Мероприятия по привлечению общественности создают открытый диалог с учеными по таким социальным вопросам, как глобальное изменение климата. AAAS также выступает в качестве зонтичной организации для федерации, состоящей из более чем 270 аффилированных научных групп.Расширенная серия веб-сайтов включает в себя исчерпывающие ресурсы по развитию карьеры. Для получения дополнительной информации посетите www.aaas.org.

Интимные функциональные взаимодействия между TGS1 и Smn-комплексом, выявленные при анализе развития глаза у дрозофилы

% PDF-1.6 % 1 0 объект > поток doi: 10.1371 / journal.pgen.1008815