Меркурий 231 подключение: Подключение трехфазного счетчика своими руками

Содержание

Подключение трехфазного счетчика своими руками

Обычно в жилых домах и квартирах используется монтаж однофазного электрического провода, так как он соответствует оптимальной мощности для обычного потребителя. Однако не редко возникает необходимость сделать подключение различного электрического оборудования для трехфазной сети. Схема подключения трехфазного счетчика электроэнергии имеет свои особенности, которые мы рассмотрим в этой статье.

Особенности трехфазного счетчика

Схема подключения трехфазного электросчетчика рассчитана на электрическую линию с напряжением в 380 вольт. Для однофазной системы применяется подключение соответствующих моделей. Так как их конструкция и назначение разные, то их замена исключается.

Слишком большая нагрузка в сети с однофазной проводкой может привести к значительным перепадам напряжения в сети. Если не будет установлено защитное оборудование в трансформаторе, тогда это может привести к поломке дорогостоящей бытовой техники.

При использовании трехфазной сети, риск скачков напряжения снижается.

Какой тип выбрать

Счетчики трехфазного питания могут иметь прямое и косвенное включение. Косвенное включение применяется в тех случаях, когда учет электроэнергии проходит под высокой нагрузкой. Подключение же будет проводиться посредством тока трансформатора.

Прямое подключение к току наиболее распространено в быту. Такой способ используется в жилых квартирах, частных домах, гаражах, мастерских и прочих помещениях, где значение нагрузки тока не превышает номинальное в 100 ампер. Максимально допустимая мощность при прямом включении – до 60кВт. Подключение счетчика электроэнергии на трехфазную линию осуществляется через трансформатор на DIN-рейку, которая рассчитана на три крепления устройства.

Видео “Подключение счетчика на 3 фазы”

Подключение

На примере рассмотрим установку трехфазного счетчика электроэнергии Меркурий 231 к соответствующей электрической линии.  Через трансформатор должен проходить силовой кабель для переменного тока. На схему подсоединения не будет зависеть наличие заземляющего контакта, так как он не будет проходить через само считывающее устройство.
Будет осуществляться более универсальное, прямое включение прибора по напряжению и току к цепи трансформатора и основной силовой линии, от которой питаются вся электрическая техника в помещении или доме.

Модель Меркурий 231 является электронным трехфазным счетчиком электроэнергии для сети с напряжением от 230 до 400 вольт и номинальной силе тока от 5 до 60 ампер. Меркурий 231 имеет 1ый класс точности в соответствии с ГОСТ стандартами, монтированный электронный интерфейс для импульсного выхода тока и особый IrDA (инфракрасный порт). В счетчике Меркурий 231 встроенные датчики тока являются специальными трансформаторами, а для напряжения – резистивные элементы. Их сигналы выходят на преобразователь микроконтроллера, затем проходят оцифровку и значения выводятся на экран.

Благодаря такой конструкции, Меркурий 231 имеет более высокую точность, чем индукционные считывающие устройства.

Меркурий 231 имеет 8 клемм для подсоединения проводов с переменным током. Через первые три пары будут проходить фазы силового провода. Каждая пара рассчитана на вход и выход. Через вторую клемму Меркурия 231 осуществляется подсоединение фазы А основного силового провода, который будет питать электроэнергией приборы. Если будет подключено устройство защитного отключения, то отходящие от него фазы А, В, С будут проходить через счетчик. К первой клемме первой пары будет подключен провод для соединения с контактом от трансформатора.

Точно такой же порядок должен соблюдаться при включении фазы В и С через другие клеммы, а также нулевого рабочего проводника («ноль»). Только нужно учесть, что вторая клемма последней пары, которая рассчитана на рабочие нули не подключается к однополюсным автоматическим выключателям. На схемах подключения защитного оборудования и других устройств на трехфазную сети фазы А, В и С отображены желты, зеленым и красным цветом соответственно. Нулевой рабочий проводник изображен синим цветом. Клеммы и винты нумеруются арабскими цифрами.

Если подключение счетчика осуществляется на электрической линии переменного тока с предусмотренным заземляющим проводом, то жила не должна проходить через само считывающее устройство. В такой ситуации она будет подсоединяться к трансформатору, без промежуточного прохождения через автоматические выключатели или стабилизаторы напряжения.

Процесс подсоединения проводов силового кабеля должен осуществляться с обесточенной электрической сетью. Схема прямого включения трехфазного счетчика электроэнергии Меркурий 231 к трансформатору достаточно простая, но требует большой внимательности. Нельзя допустить неправильное соединение, так как может перегореть плата или возникнет короткое замыкание на линии, если не будет установлено защитное оборудование.

Обычно счетчик закрепляется в распределительном щитке. Электронные образцы трехфазных устройств имеют значительно меньший вес и размеры, в отличие от индукционных конструкций.  К модели Меркурий 231 прилагается инструкция по установке, но лучше, чтобы эту работу выполнял специалист, так как существует множество нюансов, о которых при установке следует знать.

В условиях повышенной влажности или большого скопления пыли или в местах доступных посторонним лицам, считывающее оборудование устанавливают в защитный металлический короб, который закрывается на замок. Прозрачное окно позволяет постоянно иметь доступ к показаниям счетчика.

Пуско-наладка

К пуско-наладочным работам нужно отнести выполнение различных задач, для подготовки к монтажу и проверки системы. В первую очередь нужно написать заявление организации, через которую осуществляется энергоснабжение вашего дома или многоэтажного здания. Так как проведение трехфазной установки, подключение электрического счетчика требует одобрения специализированных структур, то перед началом монтажа нужно получить разрешение. Компания выделяет специалиста, который и должен осуществлять подключение данного устройства через трансформатор.

Такой подход является обычным требованием всех организаций, а также продиктован техникой безопасности при работе с электрикой. Непрофессиональная установка считывающего прибора может очень дорого вам обойтись. После подключения проводится проверка всей системы энергоснабжения к конечному потребителю при помощи специальных приборов. Когда все сделано трехфазный счетчик пломбируется особой биркой компании. Если пломба будет нарушена, то это может повлечь за собой штраф.

Видео “Обучающий ролик подключения трехфазного ролика”

Чтобы выполнить данное подключение по всем правилам, достаточно посмотреть следующее видео. В нем собраны практические полезные советы.

Электросчетчик Меркурий 231 AM-01 трехфазный 3~230/400В, 5(60)А, однотарифный, активной энергии, класс точн.

[1,0], имп.выход, датч.шунт, мех.ОУ, 9мод на DIN-рейку Меркурий 231 AM-01 ИНКОТЕКС
Наименование изделия у производителя Меркурий 231 AM-01
Исполнение по типу сети трехфазный
Способ подключения к сети прямой
Номинальное напряжение, Un 3~230/400В,
Диапазон рабочих частот 50Гц
Максимальный ток 60А
Номинальный/базовый ток
Условное обозначение рабочих токов 5(60)А,
Тип учитываемой электроэнергии (A/R) активной энергии,
Класс точности (активной/реактивной энергий) [1,0],
Исполнение по количеству тарифов однотарифный,
Количество тарифов
Тип тарификатора (для многотарифных счетчиков)
Особенность исполнения по каналам учета
Встроенные интерфейсы связи
Наличие импульсного выхода имп. выход,
Встроенное дополнительное оборудование
Тип отсчетного устройства мех.ОУ,
Тип датчика(ов) тока датч.шунт,
Стартовый ток (чувствительность)
Активная (W)/полная(V·A) мощности, потребляемые цепью напряжения, не более
Полная мощность (V·A), потребляемая цепью тока, не более
Передаточное число, имп/kW, имп/kVAr
Сохранность данных при прерываниях питания (информации/внутренних часов)
Способ монтажа на DIN-рейку
Ширина в модулях (для модульных исполнений) 9мод
Степень защиты корпуса, IP
Измерение качества электроэнергии
Ведение журналов по измеряемым значениям и событиям
Наличие электронной пломбы
Возможность подключения резервного питания
Сечение подключаемого провода
Межповерочный интервал 10 лет
Гарантийный срок эксплуатации
Средний срок службы
Сертификация в госреестре средств измерений России и СНГ есть
Диапазон рабочих температур, °C от -40°C до +55°C
Климатическое исполнение и категория размещения
Конструктивная особенность
Примечание
Альтернативные названия Меркурий231AM01 Меркурий231 AM01 Mercury231AM01 Mercury231 Mercury 231 Меркурий231АМ01 АМ01 5(60)A 1 тариф
Страна происхождения Россия
Сертификация RoHS
Код EAN / UPC
Код GPC
Код в Profsector. com FI16.65.7.1
Статус компонента у производителя

Счетчик электроэнергии трехфазный многотарифный LCD-дисплей прямое подключение 80А 2хSO

Код товара 3347533

Артикул 7KT1545

Страна Италия

Наименование E-СЧЕТЧИК С LCD, 3-ФАЗНЫЙ, 80A, 2xS0, 2 ТАРИФА, ПРЯМОЕ ПОДКЛЮЧЕНИЕ CALIBRATED E.G. BY MID COMMUNICATION CAPABLE

Упаковки  

Сертификат RU Д-DE. АЖ40.B00543-19

Тип изделия Счетчик электроэнергии

Число тарифов Многотарифный

Способ монтажа DIN-рейка

Номинальный ток,А 80

Количество фаз 3

Количество модулей DIN 4

Степень защиты IP50

Частота, Гц 50

Все характеристики

Характеристики

Код товара 3347533

Артикул 7KT1545

Страна Италия

Наименование E-СЧЕТЧИК С LCD, 3-ФАЗНЫЙ, 80A, 2xS0, 2 ТАРИФА, ПРЯМОЕ ПОДКЛЮЧЕНИЕ CALIBRATED E. G. BY MID COMMUNICATION CAPABLE

Упаковки  

Сертификат RU Д-DE.АЖ40.B00543-19

Тип изделия Счетчик электроэнергии

Число тарифов Многотарифный

Способ монтажа DIN-рейка

Номинальный ток,А 80

Количество фаз 3

Количество модулей DIN 4

Степень защиты IP50

Частота, Гц 50

Все характеристики

Всегда поможем:
Центр поддержки
и продаж

Скидки до 10% +
баллы до 10%

Доставка по городу
от 150 р.

Получение в 150
пунктах выдачи

% PDF-1. 3 % 1261 0 объект > эндобдж xref 1261 186 0000000016 00000 н. 0000005865 00000 н. 0000006088 00000 н. 0000006406 00000 н. 0000006457 00000 н. 0000007302 00000 н. 0000007454 00000 н. 0000008236 00000 п. 0000008374 00000 н. 0000019316 00000 п. 0000019517 00000 п. 0000020166 00000 п. 0000020305 00000 п. 0000021699 00000 н. 0000021884 00000 п. 0000022123 00000 п. 0000022449 00000 п. 0000027717 00000 п. 0000062678 00000 п. 0000062752 00000 п. 0000062891 00000 п. 0000063038 00000 п. 0000063173 00000 п. 0000063333 00000 п. 0000063504 00000 п. 0000063618 00000 п. 0000063735 00000 п. 0000063895 00000 п. 0000064060 00000 п. 0000064253 00000 п. 0000064414 00000 п. 0000064566 00000 п. 0000064676 00000 п. 0000064844 00000 п. 0000064944 00000 п. 0000065070 00000 п. 0000065238 00000 п. 0000065362 00000 п. 0000065479 00000 п. 0000065653 00000 п. 0000065777 00000 п. 0000065918 00000 п. 0000066086 00000 п. 0000066202 00000 п. 0000066315 00000 п. 0000066498 00000 п. 0000066630 00000 п. 0000066762 00000 п. 0000066983 00000 п. 0000067155 00000 п. 0000067289 00000 п. 0000067412 00000 п. 0000067549 00000 п. 0000067683 00000 п. 0000067823 00000 п. 0000067962 00000 п. 0000068055 00000 п. 0000068207 00000 п. 0000068351 00000 п. 0000068486 00000 п. 0000068627 00000 н. 0000068798 00000 п. 0000068914 00000 п. 0000069037 00000 п. 0000069213 00000 п. 0000069331 00000 п. 0000069446 00000 п. 0000069577 00000 п. 0000069738 00000 п. 0000069876 00000 п. 0000070014 00000 п. 0000070169 00000 п. 0000070300 00000 п. 0000070431 00000 п. 0000070547 00000 п. 0000070708 00000 п. 0000070889 00000 п. 0000071018 00000 п. 0000071183 00000 п. 0000071331 00000 п. 0000071484 00000 п. 0000071611 00000 п. 0000071760 00000 п. 0000071925 00000 п. 0000072047 00000 п. 0000072168 00000 п. 0000072291 00000 п. 0000072409 00000 п. 0000072586 00000 п. 0000072701 00000 п. 0000072876 00000 п. 0000072976 00000 п. 0000073101 00000 п. 0000073263 00000 п. 0000073384 00000 п. 0000073502 00000 п. 0000073687 00000 п. 0000073811 00000 п. 0000073924 00000 п. 0000074075 00000 п. 0000074210 00000 п. 0000074346 00000 п. 0000074472 00000 п. 0000074587 00000 п. 0000074717 00000 п. 0000074856 00000 п. 0000074988 00000 п. 0000075118 00000 п. 0000075291 00000 п. 0000075404 00000 п. 0000075578 00000 п. 0000075693 00000 п. 0000075818 00000 п. 0000076004 00000 п. 0000076130 00000 п. 0000076252 00000 п. 0000076416 00000 п. 0000076537 00000 п. 0000076722 00000 п. 0000076844 00000 п. 0000076964 00000 п. 0000077143 00000 п. 0000077287 00000 п. 0000077436 00000 п. 0000077611 00000 п. 0000077726 00000 п. 0000077842 00000 п. 0000077974 00000 п. 0000078109 00000 п. 0000078242 00000 п. 0000078372 00000 п. 0000078532 00000 п. 0000078690 00000 п. 0000078826 00000 п. 0000078991 00000 п. 0000079160 00000 п. 0000079295 00000 п. 0000079432 00000 п. 0000079564 00000 п. 0000079724 00000 п. 0000079851 00000 п. 0000079980 00000 н. 0000080113 00000 п. 0000080231 00000 п. 0000080397 00000 п. 0000080506 00000 п. 0000080618 00000 п. 0000080744 00000 п. 0000080867 00000 п. 0000081036 00000 п. 0000081165 00000 п. 0000081273 00000 п. 0000081393 00000 п. 0000081523 00000 п. 0000081649 00000 п. 0000081799 00000 п. 0000081927 00000 н. 0000082058 00000 п. 0000082206 00000 п. 0000082352 00000 п. 0000082504 00000 п. 0000082679 00000 п. 0000082838 00000 п. 0000082989 00000 п. 0000083152 00000 п. 0000083296 00000 н. 0000083435 00000 п. 0000083573 00000 п. 0000083728 00000 п. 0000083887 00000 п. 0000083988 00000 п. 0000084106 00000 п. 0000084273 00000 п. 0000084406 00000 п. 0000084534 00000 п. 0000084701 00000 п. 0000084841 00000 п. 0000084975 00000 п. 0000085120 00000 п. 0000085253 00000 п. 0000085383 00000 п. 0000085495 00000 п. 0000085613 00000 п. 0000085747 00000 п. 0000085872 00000 п. 0000004016 00000 н. трейлер ] / Назад 9

7 >> startxref 0 %% EOF 1446 0 объект > поток hWklU> Yv [f) 6-0, Pu. Pij jm) [u -! + Dl) DAI | F # Q4 [I | ܙ} t «ƿ̏; {ν;

Последние достижения в понимании и измерении ртути в окружающей среде: Земной цикл Hg

https: // doi .org / 10.1016 / j.scitotenv.2020.137647Получить права и контент

Основные моменты

Земной круговорот ртути влияет на воздействие этого мощного нейротоксина на людей и биоту.

фокус на разработки с 2010 года.

Снижение выбросов ртути может привести к восстановлению раньше, чем предполагалось ранее.

Потепление в Арктике, вероятно, в некоторых случаях увеличивает глобальные потоки Hg и даже их направление.

Реферат

В этом обзоре задокументированы последние достижения в области кругооборота ртути на Земле. Исследования земной ртути (Hg) достигли зрелости в одних областях и быстро развиваются в других. Мы резюмируем состояние науки около 2010 года в качестве отправной точки, а затем представляем достижения за последнее десятилетие в трех областях: землепользование, осаждение сульфатов и изменение климата. Достижения представлены в рамках трех «ворот» ртути в земную среду: поступление из атмосферы, поглощение с пищей и сток с поверхностными водами. Среди наиболее заметных достижений:

Арктика превратилась в очаг круговорота ртути с высокими потоками потока и большими запасами ртути, готовыми к высвобождению из вечной мерзлоты с быстрым потеплением в высоких широтах.

Двунаправленный обмен Hg между атмосферой и земными поверхностями лучше изучен, во многом благодаря интерпретации изотопов Hg; по последним оценкам повторные выбросы ртути с поверхности суши ниже, чем предполагалось ранее.

В настоящее время считается, что на кустарную добычу золота приходится более половины глобального потока Hg.

Имеются свидетельства того, что уменьшение поступления ртути в экосистемы может привести к восстановлению раньше, чем ожидалось, несмотря на большие запасы унаследованной ртути в экосистемах.

Свежеотложенная ртуть с большей вероятностью, чем хранимая, метилируется и включается в рис.

Топография и гидрологическая взаимосвязь стали главными переменными для объяснения несопоставимой реакции THg и MeHg на лесозаготовки и другие нарушения земель.

Эти и другие достижения, о которых здесь сообщается, имеют важное значение для оценки эффективности Минаматской конвенции по сокращению воздействия ртути на человека и дикую природу в окружающей среде.

Ключевые слова

Метилртуть

Климат

Землепользование

Обмен между землей и атмосферой

Водоток

Продовольствие

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

© 2020 Авторы. Опубликовано Elsevier B.V.

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

Пространственные, временные и диетические переменные, связанные с повышенным воздействием ртути в прибрежных перуанских сообществах вверх и вниз по течению от кустарной и мелкомасштабной добычи золота — Центр социально-демографического анализа

Пространственные, временные и диетические переменные, связанные с повышенным воздействием ртути в перуанских речных сообществах вверх и вниз по течению от кустарной и мелкомасштабной добычи золота

Международный журнал экологических исследований и общественного здравоохранения

Вятт, Лорен, Эрнесто Ортис, Бет Фейнголд *, Аксель Берки, Сара Диринджер, Ана Моралес, Элвис Хурадо, Хейлин Сю-Ким и Уильям Пэн

Аннотация

Кустарная и мелкомасштабная золотодобыча (КМЗ) является основным источником ртути во всем мире, и ее быстрое распространение вызывает опасения по поводу воздействия на человека. Предполагается, что риски непрофессионального воздействия сильно связаны с загрязнением окружающей среды; однако взаимосвязь между воздействием ртути на окружающую среду и человека, изменение воздействия с течением времени и факторы риска, помимо потребления рыбы, в условиях КМЗ не совсем понятны. В перуанских речных сообществах (n = 12), где КМЗ увеличилось в 4–6 раз за последнее десятилетие, мы проводим крупномасштабную оценку связи между воздействием ртути на окружающую среду и человека, сравнивая общее содержание ртути в человеческих волосах (2- см сегмент, n = 231) на ткани рыбы, выловленной на месте, анализируя временное воздействие на женщин детородного возраста (WCBA, 15–49 лет, n = 46) в течение одного года, и оценивая общие риски воздействия ртути, включая рыбу и не рыбу диетические продукты с помощью обследований домашних хозяйств и линейных смешанных моделей.Расчеты индивидуальной пероральной эталонной дозы с использованием общего содержания ртути в местной рыбе недооценивают наблюдаемое воздействие ртути на людей во многих общинах. Это несоответствие было особенно очевидным в общинах, расположенных выше по течению от КМЗ, где уровни ртути в речной рыбе, воде и отложениях, измеренные в предыдущем исследовании, были низкими, а содержание ртути в волосах было хронически повышенным. Волосы 86% людей и 77% детей превышают предварительный уровень USEPA (Агентство по охране окружающей среды США) (1.2 мкг / г), которые могут привести к нарушению развития ребенка. При временном анализе WCBA наблюдалось хронически повышенное воздействие ртути. Если последнее воздействие превышало уровень Агентства по охране окружающей среды США, существует 97% -ная вероятность того, что индивидуум превысил этот уровень за 8–10 месяцев предыдущего года. Частое потребление в домашних условиях некоторых фруктов (помидор, банан) и злаков (киноа) было достоверно связано с сокращением содержания ртути в волосах на 29–75%. В совокупности эти данные демонстрируют, что общины, расположенные в сотнях километров от КМЗ, уязвимы для хронически повышенного воздействия ртути. Кроме того, неожиданные ассоциации с содержанием ртути в рыбе и диетическим потреблением, отличным от рыбы, подчеркивают необходимость более глубокого анализа режимов воздействия для выявления наиболее уязвимых групп населения и определения возможных мер вмешательства.

Полная статья.

* Обозначает ассоциированных, аффилированных лиц и сотрудников CSDA

csda_wpadmin2018-01-24T18: 10: 10 + 00: 00
Поделитесь этой историей, выберите платформу!

Воздействие ртути, дефицит питательных веществ и нарушения обмена веществ могут повлиять на обучение детей | Поведенческие и мозговые функции

  • 1.

    Даунси MJ, Бикнелл RJ: Питание и развитие нервной системы: механизмы дисфункции развития и болезни в более позднем возрасте. Nutr Res Rev.1999, 12: 231-253.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 2.

    Донг В.К., Гриноу В.Т.: Пластичность ненейрональной ткани мозга: роль в нарушениях развития. Ment Retard Dev Disabil Res Rev.2004, 10: 85-90.

    PubMed Статья Google ученый

  • 3.

    Ли Ю.С., Сильва А.Дж.: Молекулярная и клеточная биология улучшенного познания. Nat Rev Neurosci. 2009, 10 (2): 126-140.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 4.

    Цанов М., Манахан-Вон Д.: Синаптическая пластичность от зрительной коры к гиппокампу: системная интеграция при обработке пространственной информации. Невролог. 2008, 14 (6): 584-597.

    PubMed Статья Google ученый

  • 5.

    Howland JG, Wang YT: Синаптическая пластичность в обучении и памяти: эффекты стресса в гиппокампе. Prog Brain Res. 2008, 169: 145-158.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 6.

    Hubbs-Tait L, Nation JR, Krebs NF, Bellinger DC: Нейротоксиканты, микроэлементы и социальная среда. ПСПИ. 2005, 6 (3): 57-121.

    PubMed Google ученый

  • 7.

    Роман ГК: Аутизм: преходящая внутриутробная гипотироксинемия, связанная с приемом флавоноидов матерью во время беременности и другими антитиреоидными агентами окружающей среды. J Neurol Sci. 2007, 262: 15-26.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 8.

    Морли Дж. Э., Гордон Дж., Хершман Дж. М.: Дефицит цинка, хроническое голодание и гипоталамо-гипофизарно-тиреоидная функция. Am J Clin Nutr. 1980, 33 (8): 1767-70.

    CAS PubMed Google ученый

  • 9.

    Иватури Р., Кис С. Минеральный баланс в организме человека под влиянием фруктозы, кукурузного сиропа с высоким содержанием фруктозы и сахарозы. Корма для Hum Nutr. 1992, 42 (2): 143-151.

    CAS Статья Google ученый

  • 10.

    Ward NI, Soulsbury K, Zettel VH, Colquhoun ID, Bunday S, Barnes B: Влияние химической добавки тартразина на цинковый статус гиперактивных детей — двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. J Nutr Med. 1990, 1: 51-57.

    Артикул Google ученый

  • 11.

    Ward NI: Оценка химических факторов, связанных с гиперактивностью детей. J Nutr Environ Med. 1997, 7: 333-342.

    Артикул Google ученый

  • 12.

    Neggers YH, Cutler GR, Action RT, Alvarej JA, Bonner JL, Goldenberg RL, Go RCP, Roseman JM: положительная связь между концентрацией цинка в сыворотке крови матери и массой тела при рождении.Am J Clin Nutr. 1990, 51: 678-684.

    CAS PubMed Google ученый

  • 13.

    Scholl TO, Hediger ML, Schall JI, Fischer RL, Khoo CS: Низкое потребление цинка во время беременности: его связь с преждевременными и очень преждевременными родами. Am J Epidemiol. 1993, 137 (10): 1115-1124.

    CAS PubMed Google ученый

  • 14.

    Шендель Д., Карапуркар Бхасин Т.: Вес при рождении и характеристики гестационного возраста детей с аутизмом, включая сравнение с другими пороками развития.Педиатрия. 2008, 121 (6): 1155-1164.

    PubMed Статья Google ученый

  • 15.

    Sandstead HH: Причины дефицита цинка и железа и их влияние на мозг. J Nutr. 2000, 130: 347-349.

    Google ученый

  • 16.

    Чепмен Л., Чан Х.М.: Влияние питания на отравление метилртутью. Перспектива здоровья окружающей среды. 2000, 108 (Дополнение 1): 29-56.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 17.

    Кларксон Т.В., Штамм JJ: Факторы питания могут изменять токсическое действие метилртути в популяциях, питающихся рыбой. J Nutr. 2003, 133 (Дополнение 1): 1539-1543.

    Google ученый

  • 18.

    Peraza MA, Ayala-Fierro F, Barber DS, Casarez E, Rael LT: Влияние микронутриентов на токсичность металлов. Перспектива здоровья окружающей среды. 1998, 106 (Дополнение 1): 203-216.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 19.

    Институт гигиены окружающей среды детей. [http://www.iceh.org/pdfs/LDDI/LDDIStatement.pdf]

  • 20.

    Палмер Р., Бланшар С., Штейн З., Манделл Д., Миллер С. Выбросы ртути в окружающей среде, уровни специального образования и аутизм беспорядок: экологическое исследование Техаса. Место Здоровья. 2006, 12: 203-209.

    PubMed Статья Google ученый

  • 21.

    Палмер Р., Бланшар С., Вуд Р.: Близость к точечным источникам выброса ртути в окружающую среду как предиктор распространения аутизма.Место Здоровья. 2008

    Google ученый

  • 22.

    Агентство по охране окружающей среды. [http://www.epa.gov/mercury/control_emissions/global.htm]

  • 23.

    Агентство по охране окружающей среды, Управление суперфонда по восстановлению и технологическим инновациям. [http://www.epa.gov/tio/download/remed/542r07003.pdf]

  • 24.

    Bravo AG, Луазо Дж. Л., Анси Л., Унгуряну В. Г., Доминик Дж .: Исторические данные о загрязнении отложений ртутью.Environ Sci Pollut Res Int. 2008, 16 (1): 66-75. [http://www.springerlink.com/content/6x667718u2355515/fulltext.pdf]

    Google ученый

  • 25.

    Neculita CM, Zagury GJ, Deschenes L: Виды ртути в сильно загрязненных почвах от хлорно-щелочных заводов с использованием химических экстрактов. J Environ Qual. 2005, 34: 255-262.

    CAS PubMed Google ученый

  • 26.

    Агентство по охране окружающей среды.[http://www.epa.gov/ord/NRMRL/pubs/600r02104/600r02104chap3.pdf]

  • 27.

    Институт хлора. [http://www.chlorineinstitute.org/files/PDFs/EPA_2005_Annual_Report_Final.pdf]

  • 28.

    Институт хлора. [http://www.chlorineinstitute.org/Stewardship/AboutChlorine.cfm?navItemNumber=3495]

  • 29.

    Комиссия США по международной торговле. [http://www.usitc.gov/]

  • 30.

    Van Loon JC: Сельскохозяйственное использование осадка очистных сооружений, потенциального источника загрязнения ртутью.Environ Lett. 1973, 4: 259-265.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 31.

    Chen C, Yu H, Zhao J, Li B, Qu L, Liu S, Zhang P, Chai Z: Роль сывороточного селена и селенопротеинов на токсичность ртути при воздействии на окружающую среду и на рабочем месте. Перспектива здоровья окружающей среды. 2006, 114 (2): 297-301.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 32.

    Goldman LR, Shannon MW: Технический отчет Американской академии педиатрии: ртуть в окружающей среде: значение для педиатров. Педиатрия. 2001, 108 (1): 197-205.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 33.

    Всемирная организация здравоохранения. [http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc101.htm]

  • 34.

    Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. [http://www.cfsan.fda.gov/~frf/sea-mehg.html]

  • 35.

    McDowell MA, Dillon CF, Osterloh J, Bolger PM, Pellizzari E, Fernando R, Montes de Oca R, Schober SE, Sinks T, Jones RL, Mahaffey KR: Уровни ртути в волосах у детей и женщин детородного возраста в США: контрольный диапазон данные NHANES 1999-2000 гг. Перспектива здоровья окружающей среды. 2004, 112 (11): 1165-1171.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 36.

    Хайтауэр Дж., О’Хара А., Эрнандес Г.: Отчетность о ртути в крови в NHANES: идентификация азиатских, тихоокеанских островитян, коренных американцев и многорасовых групп.Перспектива здоровья окружающей среды. 2006, 114 (2): 173-175.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 37.

    Махаффи К.Р., Кликнер Р.П., Бодуров С.К .: Национальное обследование здоровья и питания в отношении содержания органической ртути в крови и потребления ртути с пищей, 1999 и 2000 годы. Перспективы здоровья окружающей среды. 2004, 112 (5): 562-570.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 38.

    Гранджин П., Вейхе П., Уайт Р.Ф., Дебес Ф., Араки С., Йокояма К., Мурата К., Соренсен Н., Даль Р., Йоргенсен П.Дж .: Когнитивный дефицит у 7-летних детей с пренатальным воздействием метилртути. Neurotoxicol Teratol. 1997, 19: 417-428.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 39.

    Davidson PW, Myers GJ, Cox C, Axtell C, Shamlaye C, Sloane-Reeves J, Cernichiari E, Needham L, Choi A, Wang Y, Berlin M, Clarkson TW: Эффекты пренатальной и послеродовой метилртути воздействие от потребления рыбы на результаты развития нервной системы в возрасте 66 месяцев в исследовании развития ребенка на Сейшельских островах.ДЖАМА. 1998, 280: 701-707.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 40.

    Raymond LJ, Ralston VC: Ртуть: взаимодействия селена и последствия для здоровья. Сейшельский медицинский и стоматологический журнал. 2004, 7 (Special 1): 72-77.

    Google ученый

  • 41.

    Julshamn K, Anderson A, Ringdal O, Morkore J: Поступление микроэлементов на Фарерских островах — уровни элементов в съедобных частях пилотных китов (globicephalus meleanus).Sci Total Environ. 1987, 65: 53-62.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 42.

    Лурдес М.А., Калвин-Аралар А., Фернесс Р.У .: Взаимодействие ртути и селена: обзор. Ecotoxicol Environ Saf. 1991, 21: 348-364.

    Артикул Google ученый

  • 43.

    Ganther HE: Селен: связь со сниженной токсичностью метилртути в рационах, содержащих тунец.Наука. 1972, 175: 1122-1124.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 44.

    Ohi G, Nishigaki S, Seki H, Tamura Y, Maki T: Эффективность селена в тунце и селените в изменении интоксикации метилртутью. Environ Res. 1976, 12: 49-58.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 45.

    Spiers R, Spiers M: Proceedings of Clerc 2nd Annual Symposium: 24 октября 1998 г.1998, Калифорнийский университет в Дэвисе

    Google ученый

  • 46.

    Васконселлос М., Боде П., Палетти Г.: Определение содержания ртути и селена в образцах волос бразильских индейцев, живущих в регионе Амазонки, с помощью нейтронно-активационного анализа. Труды Международного симпозиума по микроэлементам в организме человека: новые перспективы, 3, 4-6 октября 2001 г. Афины, Греция. 2001

    Google ученый

  • 47.

    Окен Э., Райт Р.О., Клейнман К.П., Беллинджер Д., Амарасиривардена С.Дж., Ху Х., Рич-Эдвардс Дж.В., Гиллман М.В.: потребление рыбы матерями, ртуть в волосах и познавательные способности младенцев в когорте США. Перспектива здоровья окружающей среды. 2005, 113 (10): 1376-1380.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 48.

    Ассоциация специалистов в области репродуктивного здоровья. [http://www.arhp.org/publications-and-resources/quick-reference-guide-for-clinICAL/fish-and-health/summary]

  • 49.

    Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. [http://www.cfsan.fda.gov/~dms/admehg3.html]

  • 50.

    Агентство по охране окружающей среды. [http://www.epa.gov/waterscience/fish/advisories/2006/index.html]

  • 51.

    Ричардсон А.Дж., Пури Б.К.: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование эффектов добавок. с высоконенасыщенными жирными кислотами на симптомы, связанные с СДВГ, у детей с определенными трудностями в обучении. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry.2002, 26 (2): 233-239.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 52.

    Пионер. [http://www.pioneer.com/CMRoot/Pioneer/end_use/industryselect/marketplace/wet_milling.pdf]

  • 53.

    Ассоциация переработчиков кукурузы. [http://www.corn.org/HFCSBrochure.pdf]

  • 54.

    Lurgi Life Science GmbH: процесс производства и экономика сиропа с высоким содержанием фруктозы. Материалы Международной конференции по продуктам с добавленной стоимостью для сахарной промышленности.1999, Батон-Руж, LA

    Google ученый

  • 55.

    Dufault R, LeBlanc B, Schnoll R, Cornett C, Schweitzer L, Wallinga D, Hightower J, Patrick L, Lukiw W. Ртуть из хлорно-щелочных заводов: измеренные концентрации в сахаре пищевых продуктов. Здоровье окружающей среды. 2009, 8: 2-

    PubMed Central PubMed Статья CAS Google ученый

  • 56.

    Министерство сельского хозяйства США.[http://www.ers.usda.gov/briefing/sugar/data/table52.xls]

  • 57.

    Star Tribune. [http://www.startribune.com/lifestyle/health/38430359.html?elr=KArks7PYDiaK7DUvDE7aL_V_BD77:DiiUiacyKUnciaec8O7EyUr]

  • 58.

    Newschaffer Curney Education, Соединенные Штаты, специальные данные по образованию, США, США . Педиатрия. 2005, 115 (3): 277-282.

    Артикул Google ученый

  • 59.

    Департамент служб развития штата Калифорния.[http://www.dds.ca.gov/AUTISM/docs/AutismReport_2007.pdf]

  • 60.

    Лорд К., Ризи С., ДиЛавор П.С., Шульман С., Турм А., Пиклз А. Аутизм от 2 до 9 возраст. Arch Gen Psychiatry. 2006, 63: 694-701.

    PubMed Статья Google ученый

  • 61.

    Уолш В.Дж., Усман А., Тарпи Дж .: Нарушение метаболизма металлов в большой популяции аутистов. Труды Amer Psych Assn; Новое исследование: Реферат №109; May 2001; Новый Орлеан, Луизиана.2001

    Google ученый

  • 62.

    Faber S, Zinn GM, Kern JC, Kingston HM: соотношение цинка и меди в плазме как биомаркер у детей с расстройствами аутистического спектра. Биомаркеры. 2009, 14 (3): 171-180.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 63.

    Блейлок Р.Л .: Возможный центральный механизм расстройств аутистического спектра, часть 2: иммуноэксайтотоксичность.Altern Ther Health Med. 2009, 15 (1): 60-67.

    PubMed Google ученый

  • 64.

    Минами Т., Мията Е., Сакамото Ю., Ямадзаки Н., Итида С. Индукция металлотионеина в мозжечок и головной мозг мышей с помощью инъекции низких доз тиомеросала. Cell Biol Toxicol. 2009,

    Google ученый

  • 65.

    Vruwink KG, Hurley LS, Gershwin ME, Keen CL: Гестационный дефицит цинка усиливает регуляцию индукции металлотионеина у взрослых мышей.Труды Общества экспериментальной биологии и медицины. Общество экспериментальной биологии и медицины. 1988, 188 (1): 30-34.

    CAS Статья Google ученый

  • 66.

    Гейер Д., Гейер М.: проспективное исследование биомаркеров токсичности ртути при расстройствах аутистического спектра. J. Toxicol EnvironHealth A. 2007, 70: 1723-1730.

    CAS Google ученый

  • 67.

    Ladner L, Lindstrom L: Медь в обществе и окружающей среде. 2-е исправленное издание. 1999, Группа экологических исследований (MFG)

    Google ученый

  • 68.

    Olanow CW, Arendash GW: Металлы и свободные радикалы в нейродегенерации. Curr Opin Neurol. 1994, 7 (6): 548-558.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 69.

    Konofal E, Lecendreux M, Arnulf I, Mouren MC: Дефицит железа у детей с синдромом дефицита внимания / гиперактивности.Arch Pediatr Adolesc Med. 2004, 158 (12): 1113-1115.

    PubMed Статья Google ученый

  • 70.

    Старобрат-Гермелин Б: Влияние дефицита отдельных биоэлементов на гиперактивность у детей с определенными психическими расстройствами. Ann Acad Med Stetin. 1998, 44: 297-314.

    CAS PubMed Google ученый

  • 71.

    McCann D, Barrett A, Cooper A, Crumpler D, Dalen L, Grimshaw K, Kitchin E, Lok K, Porteus L, Prince E, Sonuga-Barke E, Warner JO, Stevenson J: Пищевые добавки и гиперактивное поведение у 3-летних и 8/9-летних детей в сообществе: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование.Ланцет. 2007, 370 (9598): 1560-1567.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 72.

    МакГи Р., Приор М., Уильямс С., Смарт Д., Сансон А: Долгосрочное значение гиперактивности по оценке учителей и умения читать в детстве: результаты двух лонгитюдных исследований. J Детская психическая психиатрия. 2002, 43: 1004-1017.

    PubMed Статья Google ученый

  • 73.

    Noseworthy MD, Bray TM: Дефицит цинка усугубляет потерю целостности гематоэнцефалического барьера, вызванную гипероксией, измеренной с помощью динамической МРТ. Proc Soc Exp Biol Med. 2000, 223: 175-182.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 74.

    Молтени Р., Барнард Р., Инь З., Робертс К., Гомес-Пинилья Ф. Диета с высоким содержанием жиров и рафинированного сахара снижает нейротрофический фактор, полученный из мозга гиппокампа, пластичность нейронов и способность к обучению. Неврология.2002, 112 (4): 803-814.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 75.

    Hashimoto K, Iwata Y, Nakamura K, Tsujii M, Tsuchiya KJ, Sekine Y, Suzuki K, Minabe Y, Takei N, Iyo M, Mori N: снижение сывороточных уровней нейротрофического фактора головного мозга у взрослых. пациенты мужского пола с аутизмом. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2006, 30 (8): 1529-1531.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 76.

    Шим Ш., Хванбо Й., Квон Й. Дж., Чжон Х. Ю., Ли Б. Х., Ли Х. Дж., Ким Ю. К.: Повышенные уровни нейротрофического фактора мозга в плазме крови у детей с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью (СДВГ). Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2008, 32 (8): 1824-1828.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 77.

    Кидд П.М.: Аутизм — серьезная проблема для интегративной медицины. Часть 1: база знаний. Альтернативная медицина Rev.2002, 7 (4): 292-316.

    PubMed Google ученый

  • 78.

    Джеймс С.Дж., Мельник С., Джерниган С. Низкие уровни метионина, цистеина и глутатиона в плазме связаны с увеличением частоты общих полиморфизмов, влияющих на пути метилирования и глутатиона у детей с аутизмом. Конференция по экспериментальной биологии: 2 апреля 2005 г .; Сан Диего. 2005

    Google ученый

  • 79.

    Рид Д. Д., Оррениус С. Роль метионина в биосинтезе глутатиона изолированными гепатоцитами крысы. Biochem Biophys Res Commun. 1997, 77: 1257-1264.

    Артикул Google ученый

  • 80.

    Джеймс С.Дж., Катлер П., Мельник С., Джерниган С., Джанак Л., Гейлор Д.В., Нойбрандер Дж. А. Метаболические биомаркеры повышенного окислительного стресса и нарушения способности метилирования у детей с аутизмом. Am J Clin Nutr. 2004, 80 (6): 1611-1617.

    CAS PubMed Google ученый

  • 81.

    Almaguer-Melian W, Cruz-Aguado R, Bergado JA: Синаптическая пластичность нарушена у крыс с низким содержанием глутатиона. Синапс. 2000, 38: 369-374.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 82.

    White AR, Cappai R: Нейротоксичность от истощения глутатиона зависит от внеклеточных следов меди. J Neurosci Res. 2003, 71: 889-897.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 83.

    Rotruck JT, Pope AL, Ganther HE, Swanson AB, Hafeman DG, Hoekstra WG: Селен: биохимическая роль как компонента глутатионпероксидазы. Наука. 1973, 179: 588-590.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 84.

    Sparaco M, Gaeta LM, Tozzi G, Bertini E, Pastore A, Simonati A, Santocelli FM, Piemonte F: Глутатионилирование белков в центральной нервной системе человека: потенциальная роль в окислительно-восстановительной регуляции защиты нейронов от свободных радикалов.J Neurosci Res. 2006, 83 (2): 256-263.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 85.

    Патрик Л: Биохимия селена и рак: обзор литературы. Альтернативная медицина, изд. 2004 г., 9 (3): 239-258.

    PubMed Google ученый

  • 86.

    Шанкер Г., Ашнер Дж. Л., Сиверсен Т., Ашнер М.: Образование свободных радикалов в астроцитах коры головного мозга в культуре, индуцированное метилртутью.Brain Res Mol Brain Res. 2004, 128 (1): 48-57.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 87.

    Макани С., Голлапуди С., Йел Л., Чиплункар С., Гупта С. Биохимические и молекулярные основы индуцированного тиомерсалом апоптоза в Т-клетках: основная роль митохондриального пути. Genes Immun. 2002, 3: 270-278.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 88.

    Дринген Р: Метаболизм и функции глутатиона в головном мозге. Prog Neurobiol. 2000, 62: 649-671.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 89.

    Sitta A, Barschak AG, Deon M, Barden AT, Biancini GB, Vargas PR, de Souza CF, Netto C, Wajner M, Vargas CR: Эффект краткосрочного и долгосрочного воздействия на кровь с высоким содержанием фенилаланина уровни окислительного повреждения у пациентов с фенилкетонурией. Int J Dev Neurosci. 2009, 27 (3): 243-247.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 90.

    Brkljacic J, Milutinovic DV, Dundjerski J, Matic G: Ртуть стимулирует ассоциацию глюкокортикоидных рецепторов печени крысы с Hsp90 и Hsp70. J Biochem Mol Toxicol. 2004, 18 (5): 257-260.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 91.

    De Moor JM, Kennette WA, Collins OM, Koropatnick J: Уровни цинк-металлотионеина коррелируют с повышенной реактивностью глюкокортикоидов в клетках мыши, подвергшихся воздействию ZnCl 2 , HgCl 2 и тепловому шоку.Toxicol Sci. 2001, 64: 67-76.

    CAS Статья Google ученый

  • 92.

    Macho A, Hirsch T., Marzo I, Marchetti P, Dallaporta B, Susin SA, Zamzami N, Kroemer G: Истощение глутатиона — это раннее, а повышение уровня кальция — позднее событие апоптоза тимоцитов. J Immunol. 1997, 158 (10): 4612-4619.

    CAS PubMed Google ученый

  • 93.

    Patel R, McIntosh L, McLaughlin J, Brooke S, Nimon V, Sapolsky R: Деструктивные эффекты глюкокортикоидов на биохимию глутатионпероксидазы в культурах гиппокампа.J Neurochem. 2002, 82: 118-125.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 94.

    Coyle P, Philcox JC, Carey LC, Rofe AM: Металлотионеин: многоцелевой белок. Cell Mol Life Sci. 2002, 59: 627-647.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 95.

    Fraker PJ, King LE, Laakko T, Vollmer TL: Динамическая связь между целостностью иммунной системы и статусом цинка.J Nutr. 2000, 1399С-1406С. Suppl

  • 96.

    Palmiter RD: Неуловимая функция металлотионеинов. Proc Natl Acad Sci. 1998, 95: 8428-8430.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 97.

    Simpkins CO: Металлотионеин при заболеваниях человека. Cell Mol Biol (Шум-ле-Гран). 2000, 46 (2): 465-488.

    CAS Google ученый

  • 98.

    Johnson S: Возможная роль постепенного накопления меди, кадмия, свинца и железа, истощение запасов цинка, магния, селена, витаминов B2, B6, D и E и незаменимых жирных кислот при рассеянном склерозе. Мед-гипотезы. 2000, 55 (3): 239-241.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 99.

    Клаассен С.Д., Лю Дж .: Трансгенные и нокаутные мышиные модели металлотионеина в исследовании токсичности кадмия. J Toxicol Sci.1998, 23: 97-102.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 100.

    Park JD, Liu Y, Klaassen CD: Защитный эффект металлотионеина против токсичности кадмия и других металлов. Токсикология. 2001, 163 (2-3): 93-100.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 101.

    Шимада А., Нагаяма Ю., Морита Т., Йошида М., Судзуки Дж. С., Сато М., Тохьяма С. Локализация и роль металлотионеинов в обонятельном пути после воздействия паров ртути.Exp Toxicol Pathol. 2005, 57 (2): 117-125.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 102.

    Syring RA, Hoexum Brouwer T, Bouwer M: Клонирование и секвенирование кДНК, кодирующих новый медь-специфический металлотионеин и два индуцируемых кадмием металлотионеина из синего краба Callinectes sapidus. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 2000, 125 (3): 325-332.

    CAS PubMed Google ученый

  • 103.

    Чоудхури С., Крамер К.К., Берман Н.Е., Далтон Т.П., Эндрюс Г.К., Клаассен С.Д.: Конститутивная экспрессия гена металлотионеина в мозге мыши. Toxicol Appl Pharmacol. 1995, 131 (1): 144-154.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 104.

    Чуа М.И., Гетчелл М.Л.: Металлотионеин в обонятельной слизистой оболочке пациентов с болезнью Альцгеймера и мышей с дефицитом апоЕ. Нейроотчет. 1999, 10 (9): 1919-1924.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 105.

    Yu WH, Lukiw WJ, Bergeron C, Niznik HB, Fraser PE: Металлотионеин III снижается при болезни Альцгеймера. Brain Res. 2001, 894 (1): 37-45.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 106.

    Ахнер М: Функциональное значение металлотионеинов мозга. FASEB J. 1996, 10: 1129-1136.

    Google ученый

  • 107.

    Миядзаки И., Асанума М., Хигаши Ю., Согава К.А., Танака К., Огава Н.: Возрастные изменения экспрессии металлотионеина-III в мозге крысы.Neurosci Res. 2002, 43: 323-333.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 108.

    Шанкар А.Х., Прасад А.С.: Цинк и иммунная функция: биологическая основа измененной устойчивости к инфекции. Am J Clin Nutr. 1998, 68 (доп.): 447С-463С.

    CAS PubMed Google ученый

  • 109.

    Sprietsma JE: Современные диеты и болезни: NO-цинковый баланс при Th2, цинк и оксид азота (NO) вместе защищают от вирусов, СПИДа, аутоиммунитета, диабета, аллергии, астмы, инфекционных заболеваний, атеросклероза и рака .Мед-гипотезы. 1999, 53 (1): 6-16.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 110.

    Wainwright PE: Диетические незаменимые жирные кислоты и функция мозга: взгляд на механизмы развития. Proc Nutr Soc. 2002, 61 (1): 61-69.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 111.

    Халлахан Б., Гарланд М.Р.: Незаменимые жирные кислоты и их роль в лечении импульсивных расстройств.Простагландины Leuko Essent Fatty Acids. 2004, 211-216.

    Google ученый

  • 112.

    Ричардсон A: Важность омега-3 жирных кислот для поведения, познания и настроения. Scand J Food Nutri. 2003, 47 (2): 92-98.

    Артикул Google ученый

  • 113.

    Оттобони Ф., Оттобони А: Может ли синдром дефицита внимания-гиперактивности быть результатом недостаточности питания ?. J Am Physitors Surg.2003, 8 (2): 58-60.

    Google ученый

  • 114.

    Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. [http://www.fda.gov/Food/FoodIngredientsPackaging/GenerallyRecognizedasSafeGRAS/GRASListings/ucm154126.htm]

  • 115.

    Лукив В.Дж., Базан Н.Г.: Докозагексаеновая кислота и стареющий мозг. J Nutr. 2008, 138 (12): 2510-2514.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 116.

    Lukiw WJ: Передача сигналов докозагексаеновой кислоты и бета-амилоидного пептида при болезни Альцгеймера. World Rev Nutr Diet. 2009, 99: 55-70.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 117.

    Wu A, Ying Z, Gomez-Pinilla F. Диетические жирные кислоты омега-3 нормализуют уровни bdnf, уменьшают окислительное повреждение и противодействуют неспособности к обучению после черепно-мозговой травмы у крыс. J Neurotrauma. 2004, 21 (10): 1457-1467.

    PubMed Статья Google ученый

  • 118.

    Lukiw WJ, Cui JG, Marcheselli VL, Bodker M, Botkjaer A, Gotlinger K, Serhan CN, Bazan NG: роль нейропротектина D1, полученного из докозагексаеновой кислоты, в выживании нервных клеток и болезни Альцгеймера. J Clin Invest. 2005, 115 (10): 2774-2783.

    PubMed Central CAS PubMed Статья Google ученый

  • 119.

    Стивенс LJ, Zentall SS, Deck JL, Abate ML, Watkins BA, Lipp SR, Burgess JR: метаболизм незаменимых жирных кислот у мальчиков с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью.J Clin Nutr. 1995, 62 (4): 761-768.

    CAS Google ученый

  • 120.

    Митчелл Е.А., Аман М.Г., Турботт С.Х., Манку М.: Клинические характеристики и уровни незаменимых жирных кислот в сыворотке крови у гиперактивных детей. Клиника Педиатр (Phila). 1987, 26 (8): 406-411.

    CAS Статья Google ученый

  • 121.

    Колтер А.Л., Катлер С., Меклинг К.А.: Статус жирных кислот и поведенческие симптомы синдрома дефицита внимания с гиперактивностью у подростков: исследование случай-контроль.Nutr J. 2008, 14 (7): 8- [http://www.nutritionj.com/content/pdf/1475-2891-7-8.pdf]

    Статья CAS Google ученый

  • 122.

    Voigt RG, Llorente AM, Jensen CL, Fraley JK, Berretta MC, Heird WC: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое испытание добавок докозагексаеновой кислоты у детей с синдромом дефицита внимания / гиперактивности. J Pediatr. 2001, 139 (2): 189-196.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 123.

    Хираяма С., Хамазаки Т., Терасава К.: Влияние приема пищи, содержащей докозагексаеновую кислоту, на симптомы синдрома дефицита внимания / гиперактивности — плацебо-контролируемое двойное слепое исследование. Eur J Clin Nutr. 2003, 58: 467-473.

    Артикул CAS Google ученый

  • 124.

    Ричардсон А.Дж., Монтгомери П.: Исследование Оксфорд-Дарем: рандомизированное контролируемое исследование пищевых добавок с жирными кислотами у детей с нарушением координации развития.Педиатрия. 2005, 115 (5): 1360-1366.

    PubMed Статья Google ученый

  • 125.

    Sorgi PJ, Hallowell EM, Hutchins HL, Sears B: Эффекты открытого пилотного исследования с высокими дозами EPA / DHA концентрируются на фосфолипидах плазмы и поведении у детей с синдромом дефицита внимания и гиперактивностью. Nutr J. 2007, 13 (6): 16- [http://www.nutritionj.com/content/pdf/1475-2891-6-16.pdf]

    Статья CAS Google ученый

  • 126.

    Sinn N, Bryan J: Влияние добавок с полиненасыщенными жирными кислотами и микронутриентами на проблемы обучения и поведения, связанные с СДВГ у детей. J Dev Behav Pediatr. 2007, 28 (2): 82-91.

    PubMed Статья Google ученый

  • 127.

    Johnson M, Ostlund S, Fransson G, Kadesjo B, Gillberg C: Омега-3 / омега-6 жирные кислоты при синдроме дефицита внимания с гиперактивностью: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование у детей и подростков.J Atten Disord. 2009, 12 (5): 394-401.

    PubMed Статья Google ученый

  • 128.

    Belanger SA, Vanasse M, Spahis S, Sylvestre MP, Lippe S, L’Heureux F, Ghadirian P, Vanasse CM, Levy E: Лечение жирными кислотами омега-3 детей с синдромом дефицита внимания и гиперактивности: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Педиатр детского здоровья. 2009, 14 (2): 89-98.

    PubMed Central PubMed Google ученый

  • 129.

    Peet M: Эйкозапентаеновая кислота в лечении шизофрении и депрессии: обоснование и предварительные результаты двойного слепого клинического исследования. Простагландины Leukot Essent Fatty Acids. 2003, 69: 477-485.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 130.

    Ричардсон AJ: Жирные кислоты при дислексии, диспраксии, СДВГ и аутистическом спектре. Nutri Prac. 2001, 3 (3): 18-24.

    Google ученый

  • 131.

    Арнольд LE: Альтернативы лечения синдрома дефицита внимания / гиперактивности (СДВГ). J Atten Disord. 1999, 3 (1): 30-48.

    Артикул Google ученый

  • 132.

    Берджесс Дж. Р., Стивенс Л., Чжан В., Пек Л.: Длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты у детей с синдромом дефицита внимания и гиперактивности. Am J Clin Nutr. 2000, 71: 327С-330С.

    CAS PubMed Google ученый

  • 133.

    Kozielec T, Starobrat-Hermelin B: Оценка уровня магния у детей с синдромом дефицита внимания и гиперактивности (СДВГ). Magnes Res. 1997, 10 (2): 143-148.

    CAS PubMed Google ученый

  • 134.

    Starobrat-Hermelin B, Kozielec T: Влияние физиологических добавок магния на гиперактивность у детей с синдромом дефицита внимания и гиперактивности (СДВГ): положительный ответ на тест с пероральной нагрузкой магнием.Magnes Res. 1997, 10 (2): 149-156.

    CAS PubMed Google ученый

  • 135.

    Galland L: Нарушение метаболизма незаменимых жирных кислот при латентной тетании. Магний. 1985, 4: 333-338.

    CAS PubMed Google ученый

  • 136.

    Махфуз М.М., Смит Т.Л., Куммеров Ф.А.: Изменения в метаболизме линолевой кислоты и составе клеточных фосфолипидов и жирных кислот в клетках LLC-PK, культивируемых при низких концентрациях магния.Biochim Biophys Acta. 1989, 1006 (1): 70-74.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 137.

    Арнольд Л.Е., ДиСильвестро Р.А.: Цинк при синдроме дефицита внимания / гиперактивности. J Child Adolesc Psychopharmacol. 2005, 15 (4): 619-627.

    PubMed Статья Google ученый

  • 138.

    Bilici M, Yildirim F, Kandil S, Bekaroglu M, Yildirmis S, Deger O, Ulgen M, Yildiran A, Aksu H: двойное слепое плацебо-контролируемое исследование сульфата цинка в лечении гиперактивности дефицита внимания. беспорядок.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2004, 28 (1): 181-190.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 139.

    Guallar E, Sanz-Gallardo MI, Van’t Veer P, Bode P, Aro A, Gomez-Aracena J, Kark JD, Riemersma RA, Martin-Moreno JM, Kok FJ, Heavy Metals and Myocardial Infarction Исследовательская группа: Ртуть, рыбий жир и риск инфаркта миокарда. N Engl J Med. 2002, 347 (22): 1747-1754.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 140.

    Innis SM, Palaty J, Vaghri Z, Lockitch G: Повышенный уровень ртути, связанный с высоким потреблением рыбы среди детей из Ванкувера, Канада. J Pediatr. 2006, 148 (6): 759-63.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 141.

    Агентство по пищевым стандартам Соединенного Королевства. [http://www.food.gov.uk/multimedia/pdfs/fsis8005.pdf]

  • 142.

    Объединенный комитет экспертов Всемирной организации здравоохранения по пищевым добавкам.[http://whqlibdoc.who.int/trs/WHO_TRS_928.pdf]

  • 143.

    Свод федеральных правил США. [http://ecfr.gpoaccess.gov/cgi/t/text/text-idx?c=ecfr&sid=1070b19eb50e562daa872cfa1755aa09&rgn=div5&view=text&node=21:1.0.1.1.27&idno=21#21:1.0.1.1.27.1 ]

  • 144.

    Агентство по пищевым стандартам Соединенного Королевства. [http://www.food.gov.uk/safereating/chemsafe/additivesbranch/colours/colourfree/]

  • 145.

    Хьюз-младший: Обзор последних отчетов об аутизме: 1000 исследований, опубликованных в 2007 году.Эпилепсия. 2008, 13 (3): 425-437.

    PubMed Статья Google ученый

  • 146.

    Shahar E: Причинно-следственные диаграммы для кодирования и оценки смещения информации. J Eval Clin Prac. 2009, 15 (3): 436-440.

    Артикул Google ученый

  • 147.

    Curtis LT, Patel K: Подходы к питанию и окружающей среде к профилактике и лечению аутизма и синдрома дефицита внимания с гиперактивностью (СДВГ): обзор.J Altern Complement Med. 2008, 14 (1): 79-85.

    PubMed Статья Google ученый

  • % PDF-1.4 % 2391 0 объект> эндобдж xref 2391 387 0000000016 00000 н. 0000009522 00000 н. 0000009702 00000 п. 0000009747 00000 н. 0000009940 00000 н. 0000010528 00000 п. 0000010696 00000 п. 0000010939 00000 п. 0000011013 00000 п. 0000011126 00000 п. 0000011276 00000 п. 0000011390 00000 п. 0000011435 00000 п. 0000011594 00000 п. 0000011775 00000 п. 0000011912 00000 п. 0000011957 00000 п. 0000012093 00000 п. 0000012266 00000 п. 0000012394 00000 п. 0000012439 00000 п. 0000012561 00000 п. 0000012760 00000 п. 0000012924 00000 п. 0000012969 00000 п. 0000013100 00000 п. 0000013284 00000 п. 0000013416 00000 п. 0000013461 00000 п. 0000013602 00000 п. 0000013787 00000 п. 0000013938 00000 п. 0000013983 00000 п. 0000014124 00000 п. 0000014312 00000 п. 0000014441 00000 п. 0000014486 00000 п. 0000014652 00000 п. 0000014841 00000 п. 0000015008 00000 п. 0000015053 00000 п. 0000015221 00000 п. 0000015402 00000 п. 0000015564 00000 п. 0000015608 00000 п. 0000015735 00000 п. 0000015922 00000 п. 0000016083 00000 п. 0000016127 00000 п. 0000016294 00000 п. 0000016426 00000 п. 0000016475 00000 п. 0000016612 00000 п. 0000016769 00000 п. 0000016818 00000 п. 0000016972 00000 п. 0000017021 00000 п. 0000017070 00000 п. 0000017220 00000 п. 0000017269 00000 п. 0000017410 00000 п. 0000017459 00000 п. 0000017600 00000 п. 0000017649 00000 п. 0000017698 00000 п. 0000017823 00000 п. 0000017872 00000 п. 0000018014 00000 п. 0000018063 00000 п. 0000018222 00000 п. 0000018271 00000 п. 0000018411 00000 п. 0000018460 00000 п. 0000018509 00000 п. 0000018559 00000 п. 0000018720 00000 п. 0000018770 00000 п. 0000018948 00000 п. 0000019121 00000 п. 0000019170 00000 п. 0000019306 00000 п. 0000019356 00000 п. 0000019547 00000 п. 0000019673 00000 п. 0000019723 00000 п. 0000019883 00000 п. 0000020033 00000 п. 0000020083 00000 п. 0000020244 00000 п. 0000020294 00000 п. 0000020478 00000 п. 0000020617 00000 п. 0000020666 00000 п. 0000020809 00000 п. 0000020859 00000 п. 0000021016 00000 п. 0000021066 00000 п. 0000021230 00000 н. 0000021280 00000 п. 0000021330 00000 н. 0000021380 00000 п. 0000021533 00000 п. 0000021583 00000 п. 0000021752 00000 п. 0000021802 00000 п. 0000021852 00000 п. 0000022005 00000 п. 0000022054 00000 п. 0000022193 00000 п. 0000022242 00000 п. 0000022407 00000 п. 0000022456 00000 п. 0000022631 00000 п. 0000022680 00000 п. 0000022848 00000 н. 0000022897 00000 п. 0000023054 00000 п. 0000023103 00000 п. 0000023152 00000 п. 0000023297 00000 п. 0000023346 00000 п. 0000023470 00000 п. 0000023519 00000 п. 0000023568 00000 п. 0000023709 00000 п. 0000023759 00000 п. 0000023921 00000 п. 0000024093 00000 п. 0000024143 00000 п. 0000024294 00000 п. 0000024344 00000 п. 0000024543 00000 п. 0000024673 00000 п. 0000024723 00000 п. 0000024930 00000 п. 0000025046 00000 п. 0000025096 00000 п. 0000025290 00000 н. 0000025474 00000 п. 0000025613 00000 п. 0000025663 00000 п. 0000025834 00000 п. 0000025956 00000 п. 0000026006 00000 п. 0000026168 00000 п. 0000026218 00000 п. 0000026383 00000 п. 0000026433 00000 п. 0000026584 00000 п. 0000026634 00000 п. 0000026835 00000 п. 0000026952 00000 п. 0000027002 00000 н. 0000027169 00000 н. 0000027219 00000 н. 0000027269 00000 п. 0000027319 00000 н. 0000027369 00000 п. 0000027518 00000 п. 0000027568 00000 п. 0000027775 00000 п. 0000027916 00000 н. 0000027966 00000 н. 0000028016 00000 п. 0000028066 00000 п. 0000028116 00000 п. 0000028166 00000 п. 0000028216 00000 п. 0000028266 00000 п. 0000028400 00000 п. 0000028450 00000 п. 0000028587 00000 п. 0000028637 00000 п. 0000028687 00000 п. 0000028822 00000 п. 0000028872 00000 п. 0000029036 00000 н. 0000029226 00000 п. 0000029359 00000 п. 0000029409 00000 п. 0000029551 00000 п. 0000029716 00000 п. 0000029766 00000 п. 0000029933 00000 н. 0000030061 00000 п. 0000030111 00000 п. 0000030236 00000 п. 0000030411 00000 п. 0000030547 00000 п. 0000030597 00000 п. 0000030731 00000 п. 0000030904 00000 п. 0000031062 00000 п. 0000031112 00000 п. 0000031261 00000 п. 0000031405 00000 п. 0000031455 00000 п. 0000031636 00000 п. 0000031785 00000 п. 0000031835 00000 п. 0000031977 00000 п. 0000032135 00000 п. 0000032185 00000 п. 0000032341 00000 п. 0000032391 00000 п. 0000032559 00000 п. 0000032716 00000 п. 0000032766 00000 п. 0000032911 00000 п. 0000033056 00000 п. 0000033106 00000 п. 0000033271 00000 п. 0000033321 00000 п. 0000033465 00000 п. 0000033515 00000 п. 0000033565 00000 п. 0000033732 00000 п. 0000033782 00000 п. 0000033959 00000 п. 0000034009 00000 п. 0000034059 00000 п. 0000034109 00000 п. 0000034159 00000 п. 0000034209 00000 п. 0000034259 00000 п. 0000034309 00000 п. 0000034359 00000 п. 0000034409 00000 п. 0000034549 00000 п. 0000034599 00000 н. 0000034649 00000 п. 0000034699 00000 п. 0000034858 00000 п. 0000034908 00000 н. 0000035058 00000 п. 0000035108 00000 п. 0000035158 00000 п. 0000035274 00000 п. 0000035324 00000 п. 0000035374 00000 п. 0000035424 00000 п. 0000035474 00000 п. 0000035524 00000 п. 0000035743 00000 п. 0000035872 00000 п. 0000035922 00000 п. 0000036070 00000 п. 0000036254 00000 п. 0000036420 00000 н. 0000036470 00000 п. 0000036602 00000 п. 0000036751 00000 п. 0000036801 00000 п. 0000036953 00000 п. 0000037003 00000 п. 0000037053 00000 п. 0000037241 00000 п. 0000037365 00000 п. 0000037415 00000 п. 0000037465 00000 п. 0000037588 00000 п. 0000037638 00000 п. 0000037780 00000 п. 0000037830 00000 п. 0000037989 00000 п. 0000038039 00000 п. 0000038191 00000 п. 0000038241 00000 п. 0000038291 00000 п. 0000038341 00000 п. 0000038489 00000 п. 0000038539 00000 п. 0000038589 00000 п. 0000038639 00000 п. 0000038689 00000 п. 0000038887 00000 п. 0000038996 00000 н. 0000039046 00000 н. 0000039206 00000 п. 0000039256 00000 п. 0000039415 00000 п. 0000039465 00000 п. 0000039626 00000 п. 0000039676 00000 п. 0000039830 00000 н. 0000039880 00000 п. 0000040034 00000 п. 0000040084 00000 п. 0000040134 00000 п. 0000040184 00000 п. 0000040234 00000 п. 0000040356 00000 п. 0000040406 00000 п. 0000040549 00000 п. 0000040599 00000 п. 0000040782 00000 п. 0000040905 00000 п. 0000040955 00000 п. 0000041084 00000 п. 0000041272 00000 п. 0000041410 00000 п. 0000041460 00000 п. 0000041589 00000 п. 0000041735 00000 п. 0000041785 00000 п. 0000041835 00000 п. 0000041885 00000 п. 0000041935 00000 п. 0000041985 00000 п. 0000042035 00000 п. 0000042085 00000 п. 0000042257 00000 п. 0000042307 00000 п. 0000042518 00000 п. 0000042672 00000 п. 0000042722 00000 н. 0000042857 00000 п. 0000043046 00000 п. 0000043182 00000 п. 0000043232 00000 п. 0000043364 00000 н. 0000043516 00000 п. 0000043566 00000 п. 0000043707 00000 п. 0000043757 00000 п. 0000043807 00000 п. 0000043985 00000 п. 0000044035 00000 п. 0000044197 00000 п. 0000044247 00000 п. 0000044415 00000 п. 0000044465 00000 п. 0000044627 00000 н. 0000044677 00000 п. 0000044839 00000 п. 0000044889 00000 н. 0000045054 00000 п. 0000045104 00000 п. 0000045303 00000 п. 0000045435 00000 п. 0000045485 00000 п. 0000045618 00000 п. 0000045801 00000 п. 0000045851 00000 п. 0000045901 00000 п. 0000045951 00000 п. 0000046001 00000 п. 0000046051 00000 п. 0000046215 00000 п. 0000046265 00000 п. 0000046315 00000 п. 0000046365 00000 п. 0000046415 00000 п. 0000046565 00000 п. 0000046615 00000 п. 0000046779 00000 п. 0000046829 00000 н. 0000046986 00000 п. 0000047036 00000 п. 0000047190 00000 п. 0000047240 00000 п. 0000047393 00000 п. 0000047443 00000 п. 0000047591 00000 п. 0000047641 00000 п. 0000047789 00000 п. 0000047839 00000 п. 0000047889 00000 п. 0000048052 00000 п. 0000048102 00000 п. 0000048228 00000 п. 0000048365 00000 н. 0000048415 00000 н. 0000048544 00000 п. 0000048594 00000 п. 0000048737 00000 п. 0000048787 00000 н. 0000048973 00000 п. 0000049082 00000 п. 0000049132 00000 п. 0000049279 00000 п. 0000049329 00000 п. 0000049379 00000 п. 0000049429 00000 п. 0000049479 00000 п. 0000049529 00000 п. 0000008036 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 2777 0 obj> поток xV {lSU> = Ja + = c Я) -8.,

    Низкое и нетоксичное содержание неорганической ртути ослабляет передачу сигналов, опосредованную BCR | Токсикологические науки

    Аннотация

    Повсеместно распространенная в окружающей среде ртуть, загрязняющая тяжелые металлы, является мощным иммуномодулятором, который считается фактором, способствующим аутоиммунным заболеваниям. Однако механизм (ы), посредством которых Hg инициирует или поддерживает аутоиммунные реакции, особенно на биохимическом / молекулярном уровне, остается малоизученным.Недавняя работа установила взаимосвязь между силой сигнала нарушенного B-клеточного рецептора (BCR) и аутоиммунным заболеванием. В предыдущих исследованиях мы показали, что в B-клетках WEHI-231 мышей нецитотоксические концентрации неорганической ртути (Hg +2 ) мешали BCR-опосредованному контролю роста, предполагая, что сила сигнала BCR была нарушена Hg +2 . Киназа, регулируемая внеклеточными сигналами (ERK), 1,2-митоген-активируемая протеинкиназа (MAPK) отвечает за активацию нескольких факторов транскрипции в B-клетках.Фосфорилирование ERK служит важным узлом интеграции сигналов для BCR. Таким образом, величина активации ERK служит рабочим показателем силы сигнала BCR. Используя вестерн-блоттинг и фосфо-специфическую проточную цитометрию, мы теперь показываем, что кинетика и величина BCR-опосредованной активации ERK-MAPK заметно ослаблены в клетках WEHI-231 и В-клетках селезенки, которые подвергались низкому и нетоксичному воздействию Hg. +2 . Однако Hg +2 , по-видимому, действует не непосредственно на ERK-MAPK, а скорее на вышестоящий элемент или элементы пути передачи сигнала BCR выше уровня ключевой протеинтирозинкиназы Syk.Наши данные предполагают, что место действия Hg +2 вполне может быть локализовано на плазматической мембране. Эти данные подтверждают связь между Hg +2 и ослабленным сигналом BCR в этиологии аутоиммунного заболевания.

    Хотя специфическая этиология большинства аутоиммунных заболеваний неизвестна, обычно считается, что они возникают в результате нарушения иммунорегуляторных механизмов после воздействия на генетически предрасположенных людей селективных триггеров окружающей среды (Perl, 2004).Характерная потеря толерантности к аутоантигенам — сложный процесс, который зависит от взаимодействия множества генетических локусов с большим количеством потенциальных факторов окружающей среды (Brickman and Shoenfeld, 2001). Хотя был достигнут прогресс в выяснении основных генетических поражений, которые могут способствовать потере толерантности к аутоантигенам (Lohr et al. , 2005), для сравнения мало что известно о том, как факторы окружающей среды влияют на иммунную систему, чтобы вызывают аутоиммунное заболевание.

    Эпидемиологические исследования и сообщения о случаях предполагают, что воздействие низких уровней ртути в окружающей среде может быть фактором, способствующим развитию идиосинкразических аутоиммунных заболеваний у людей (Mayes, 1999; Silbergeld et al. , 2005). Кроме того, исследования на животных напрямую продемонстрировали, что у чувствительных к (H-2) грызунов воздействие нетоксичных уровней неорганической ртути вызывает системное аутоиммунное заболевание, подобное красной волчанке, которое характеризуется лимфопролиферацией, гиперглобулинемией, производством антиядерных антител и системным иммунитетом. сложное отложение, ведущее к гломерулонефриту (обзор Rowley and Monestier, 2005).Кроме того, у некоторых линий мышей с предрасположенностью к аутоиммунным заболеваниям нетоксичные уровни ртути, по-видимому, обостряют болезнь (Pollard et al. , 1999, 2001). В значительной степени у животных, не восприимчивых к ртути или склонных к естественным аутоиммунным заболеваниям, низкие уровни ртути также вызывают обострение болезни в нескольких моделях индуцированного аутоиммунитета (Hansson et al. , 2005; Silbergeld et al. , 2005) ; Via и др. , 2003).

    Недавние открытия предполагают, что степень, в которой аутореактивные В-клетки были исключены из репертуара наивных В-клеток, определяет, разовьется ли у неспонтанного аутоиммунного хозяина аутоиммунное заболевание (Cappione et al., 2005; Wang et al. , 2003). В B-клетках рецептор B-клеток (BCR) играет центральную роль в развитии, активации, выживании и апоптозе клеток. Было продемонстрировано, что генетические изменения в регуляторных путях, управляющих силой сигнала BCR, которые приводят к ослаблению сигналов BCR, фенотипически характеризуются аберрантной выживаемостью и активацией аутореактивных B-клеток, которые затем вносят вклад в наивный репертуар BCR, поддерживающий аутоиммунное заболевание (Grimaldi et al. ., 2002, 2005).

    Ранее мы сообщали, что функциональность BCR нарушается в B-клетках, подвергающихся воздействию нетоксичных концентраций неорганической ртути (McCabe et al. , 1999). В описанных здесь экспериментах мы непосредственно демонстрируем на В-клетках, подвергшихся воздействию нетоксичных уровней ртути, что сила сигнала BCR снижена по сравнению с клетками, которые не подвергались воздействию ртути. Таким образом, доказательства, демонстрирующие, что ртуть связана с аутоиммунным заболеванием, частично могут быть объяснены нарушением передачи сигнала (т.е., снижение уровня сигнала BCR) в отсеке B-клеток после воздействия ртути. Это предполагает, что ослабление силы сигнала BCR, будь то результат генетического поражения или воздействия ртути в окружающей среде, может фенотипически характеризоваться аберрантным выживанием и / или активацией аутореактивных В-клеток.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Реагенты.

    HgCl 2 был получен от Aldrich Chemicals (Сент-Луис, Миссури).Все остальные реагенты были получены от Sigma Chemicals (Сент-Луис, Миссури), если не указано иное.

    Ячейки.

    клеток WEHI-231 были получены из Американской коллекции типовых культур (Манассас, Вирджиния). Их поддерживали в RPMI 1640 (Life Technologies, Rockville, MD), с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (Hyclone, Logan, UT), 2 мМ глутамина и 100 Ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина в увлажненной 5% смеси. CO 2 атмосфера. Клетки пассировали три раза в неделю, и во всех экспериментах использовали клетки в логарифмической фазе роста.Клетки селезенки извлекали из селезенки самок мышей BALB / c в возрасте 6-8 недель и очищали центрифугированием в градиенте плотности над фиколл-гипаком. Жизнеспособность клеток контролировали визуально по исключению трипанового синего.

    Антитела.

    Поликлональные козьи аффинно очищенные антитела к иммуноглобулину мыши были приобретены у MP Biomedicals-Cappel, Solon, OH. Моноклональные антитела к фосфолипазе c-γ (PLCγ) и кроличьи поликлональные антитела к Syk были приобретены в Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA.Моноклональные антитела к дважды фосфорилированной внеклеточной регулируемой сигналом киназе-митоген-активируемой протеинкиназе (ERK-MAPK) были приобретены у Sigma Chemicals или у BD Biosciences-Transduction Laboratories, Franklin Lakes, NJ. Конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) антифосфотирозиновые антитела RC-20H и моноклональные антитела к Ras и ERK были приобретены в BD Biosciences-Transduction Laboratories. Флуоресцентно меченые антитела, используемые для проточного цитометрического анализа фосфорилированных ERK и Syk, а также для B220, также были приобретены в BD Biosciences-Transduction Laboratories.

    Обнаружение активации Ras.

    WEHI-231 доводили до 2 × 10 7 клеток / мл. Затем аликвоты объемом 1 миллилитр предварительно инкубировали с указанными концентрациями ртути перед добавлением агониста, как описано в подписях к фигурам. Клетки собирали центрифугированием, а затем каждый отдельный образец лизировали в 0,5 мл детергентного буфера, состоящего из 50 мМ Hepes (pH 7,4), 150 мМ NaCl, 20 мМ MgCl и 0,5% (вес / объем) Triton X-100. После центрифугирования на максимальной скорости в холодной микроцентрифуге (∼12000 × g) осадки отбрасывали и добавляли дезоксихолат натрия до 0.25% (вес / объем) каждого лизата. Затем лизаты предварительно очищали в течение 5 минут глутатион-агарозой. Для каждого образца треть очищенного экстракта осаждали 10% холодной трихлоруксусной кислотой, так что общее содержание Ras во всех образцах можно было сравнить с помощью вестерн-блоттинга, как показано на фигурах. Оставшиеся две трети очищенных экстрактов инкубировали в течение 30 минут с гранулами глутатион-сефарозы, которые были предварительно связаны с гибридным белком между глутатион-S-трансферазой и Ras-связывающим доменом протеинкиназы Raf (Raf: RBD, a подарок от Дж.Downward, Imperial Research Cancer Fund, Лондон). Гранулы дважды промывали буфером для лизиса и затем кипятили в буфере для образцов Лэммли для разделения электрофорезом в додецилсульфат-полиакриламидном геле (SDS-PAGE), переносили на нитроцеллюлозу и проводили вестерн-блоттинг с моноклональными антителами против Ras. Количество Ras, связанного с конструкцией Raf: RBD, представляет собой фракцию, которая была активной и связана с GTP в лизате. Вестерн-блоттинг был разработан с соответствующими вторичными антителами, связанными с HRP и усиленной хемилюминесценцией, с использованием реагентов Dura (Pierce, Rockford, IL).

    Обнаружение активации MAPK.
    Активность

    MAPK измеряли способом, аналогичным описанному в Mattingly et al. (2001b). После инкубации с анти-Ig клетки WEHI-231 охлаждали, собирали центрифугированием и лизировали в кипящем буфере для образцов Лэммли. Белки разделяли с помощью SDS-PAGE и затем переносили в нитроцеллюлозу, чтобы вестерн-блоттинг с моноклональным антителом против активной дифосфорилированной формы ERK (Gabay et al., 1997) могло быть выполнено. Затем мембрану очищали в течение 30 минут в 62,5 мМ трис-HCl (pH 6,8), 2% (вес / объем) SDS и 100 мМ β-меркаптоэтанола при 70 ° C, а затем тщательно промывали. Затем общий MAPK анализировали вестерн-блоттингом с моноклональным антителом против ERK. Вестерн-блоты были разработаны с соответствующими вторичными антителами, связанными с HRP и реагентами с усиленной хемилюминесценцией (Kirkland and Perry, Gaithersburg, MD).

    Иммунопреципитация.

    Клетки WEHI-231 солюбилизировали в течение 20 минут на льду в детергенте (1% Nonidet P-40 для Syk или 1% октилглюкозид для PLCγ) при 5 × 10 7 клеток / мл в буфере Tris-Cl (100 мМ Трис, 125 мМ NaCl, 10 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота, pH 7.5) в присутствии ингибиторов фосфатазы и протеаз, состоящих из 100 мМ фенилметилсульфонилфторида, 20 мМ NaF и 200 мМ NaVO 4 . После солюбилизации лизаты центрифугировали при ~ 12000 × g в течение 15 мин. Осадок отбрасывали, а супернатант инкубировали с 10 мкл анти-Syk или анти-PLCγ в течение 1 ч на льду. Затем лизат переносили в иммуноабсорбент, либо протеин А-агарозу (Oncogen Research Products, Бостон, Массачусетс), либо пансорбин (Calbiochem, Ла-Хойя, Калифорния) в течение 1 ч при 4 ° C во вращательном движении.Иммуноабсорбенты промывали лиастовым буфером, а затем лиастирующим буфером с 0,1% детергентом. Наконец, иммунопреципитированные белки элюировали буфером для образцов и анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга.

    Вестерн-блоттинг и определение протеинтирозинфосфатазы.

    Белки в элюатах образцов были непосредственно разделены с помощью SDS-PAGE в аппарате для мини-гелевого PAGE (BioRad, Hercules, CA), после чего гели были электрофоретически перенесены на нитроцеллюлозную мембрану (Pall Life Sciences, Pensacola, FL) в течение 1 часа. при 100 В в блоке переноса MiniGel (Хоффер, Сан-Франциско, Калифорния).Протеиновые блоты исследовали на присутствие фосфотирозина с помощью конъюгированного с HRP антифосфотирозинового реагента RC-20H. Кляксы были проявлены с использованием усиленной хемилюминесцентной системы (Pierce) и отражающей пленки (Kodak, Rochester, NY).

    Измерение протеинтирозинфосфатазы.

    В некоторых случаях блоты сканировались, а результаты оцифровывались и анализировались с использованием системы визуализации Fuji-Film LAS 1000 plus. Статистический анализ данных проводился с использованием гетероскедастического теста t .

    Фосфоспецифическая проточная цитометрия.
    Клетки

    (WEHI-231 или клетки селезенки) подсчитывали, промывали бессывороточной средой RPMI и ресуспендировали в концентрации 3 × 10 6 клеток / мл в присутствии или в отсутствие 5 мкМ HgCl 2 . Затем 300 мкл клеточной суспензии распределяют по отдельным полипропиленовым пробиркам для проточной цитометрии размером 12 × 75 мм и помещают в увлажненный инкубатор, содержащий 5% CO 2 , на 10 мин. Затем пробирки удаляют из инкубатора и стимулируют соответствующей концентрацией козьего анти-IgM, разведенного в 5 мкл среды RPMI на пробирку для образца.Пробирки быстро встряхивают и помещают в инкубатор на указанный период времени. В конце стимуляции (0,5, 2, 5, 10 или 20 минут спустя) пробирки удаляют и фиксируют в течение 5 минут 500 мкл 4% свежего параформальдегида, pH 7,4. Пробирки осаждают при 900 × g и ресуспендируют в 2 мл 100% метанола для повышения проницаемости плазматической мембраны. Через 10 мин клетки осаждают, метанол удаляют и дважды промывают 1 мл фосфатно-солевого буфера для регидратации клеток. Затем клетки инкубировали в присутствии конъюгированного с AlexaFluor-488 антитела, специфичного к фосфорилированным остаткам ERK1 / 2 или Syk.После 20 мин инкубации клетки промывали, и клетки WEHI-231 немедленно обрабатывали на проточном цитометре BD LSR 2. В случае клеток селезенки перед проведением проточной цитометрии клетки контрастировали с PerCt-конъюгированным антителом, направленным на B220. Для всех экспериментов 10000 жизнеспособных событий, как определено с помощью стробирования прямого и бокового рассеяния, собираются для каждого образца, и данные анализируются с помощью программного обеспечения FloJo. Процент клеток p-ERK + или p-Syk + определяется с использованием алгоритма множественного сравнения Овертона для гистограмм.Алгоритм Овертона рассчитывает совокупную разницу средней интенсивности флуоресценции между наложенными экспериментальными образцами (стимулированные клетки) и контролем (нестимулированные клетки, подвергшиеся воздействию Hg).

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Hg
    +2 Ослабляет активность ERK-MAPK в клетках, стимулированных BCR

    В-клетки распознают антигены в окружающей их среде и отвечают на них в результате связывания антигена с мембранным иммуноглобулином на поверхности клетки. Связывание антигена с мембранным иммуноглобулином инициирует сложную серию молекулярных взаимодействий между членами BCR и другими белками и липидами В-клеток, так что трансдукция сигнала BCR описывается как лабиринт взаимосвязанных путей, которые завершаются активацией факторов транскрипции и регуляцией экспрессии генов, контролирующих клеточный отбор, созревание, выживание и продукцию антител (обзор в Dal Porto et al., 2004). Хотя передача сигналов B-клеток является сложным процессом, охватывающим множество различных молекулярных объектов, особенно важной точкой интеграции является ERK. ERK-MAPK представляет собой сериновую киназу, дважды активируемую треонин-тирозином, и член семейства MAPK, которое в B-клетках непосредственно отвечает за активацию нескольких факторов транскрипции, включая Bcl-6, Erg-1 и Elk-1 ( Даль Порто и др. , 2004; Якоб и др. , 2002).

    Было показано, что некоторые функции B-клеток, опосредованные BCR, нарушаются, если во время процесса передачи сигнала снижается уровень активации ERK, индуцированной BCR (Dal Porto et al., 2004). Ранее мы показали, что нетоксичные уровни неорганической ртути нарушают BCR-опосредованные функции В-клеток (McCabe et al. , 1999). Мы также показали, что в Т-клетках активация ERK-MAPK, опосредованная Т-клеточными рецепторами (TCR), ослаблена в клетках, подвергшихся действию Hg +2 (Mattingly et al. , 2001a), что позволяет предположить, что Способность Hg +2 вмешиваться в BCR-опосредованные функции может быть объяснена влиянием Hg +2 на BCR-опосредованную активацию ERK.

    Таким образом, в серии экспериментов мы непосредственно исследовали, влияет ли Hg +2 на BCR-опосредованную активацию ERK-MAPK. Рисунок 1 представляет собой типичный пример экспериментов ( n = 3), где В-клетки подвергались или не подвергались воздействию ртути, а затем стимулировались анти-Ig. Через определенные интервалы времени клетки лизировали и уровни активированной ERK оценивали с помощью вестерн-блоттинга для дважды фосфорилированной (активированной) ERK-MAPK. Мы обнаружили в контрольных клетках, что в течение 2 минут после стимуляции BCR произошла значительная активация ERK-MAPK.Активация достигла пика примерно через 4–5 минут и оставалась намного выше фонового уровня в течение как минимум 20 минут. С другой стороны, во все моменты времени между 2 и 20 мин активация ERK-MAPK в обработанных Hg +2 клетках была равномерно подавлена ​​по сравнению с клетками, которые не подвергались воздействию Hg +2 . В других экспериментах мы обнаружили, что только Hg +2 (в отсутствие передачи сигналов BCR) не влиял на активацию ERK-MAPK, хотя он в некоторой степени активировал Ras (рис.2).

    РИС. 1.

    Неорганическая ртуть ослабляет BCR-опосредованную активацию ERK-MAPK. Клетки WEHI-231 предварительно инкубировали или не инкубировали с 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 мин. Затем клетки стимулировали козьим антимышиным иммуноглобулином в течение заданных периодов времени 0,5-20 мин. Затем клетки лизировали буфером для образцов SDS и лизаты целых клеток разделяли с помощью SDS-PAGE. Затем с помощью вестерн-блоттинга детектировали дважды фосфорилированную (активированную) ERK 1,2 (верхний ряд). Затем гель отделяли и повторно зондировали на общую ERK (нижний ряд).Эти графики представляют три независимых эксперимента.

    РИС. 1.

    Неорганическая ртуть ослабляет BCR-опосредованную активацию ERK-MAPK. Клетки WEHI-231 предварительно инкубировали или не инкубировали с 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 мин. Затем клетки стимулировали козьим антимышиным иммуноглобулином в течение заданных периодов времени 0,5-20 мин. Затем клетки лизировали буфером для образцов SDS и лизаты целых клеток разделяли с помощью SDS-PAGE. Затем с помощью вестерн-блоттинга детектировали дважды фосфорилированную (активированную) ERK 1,2 (верхний ряд).Затем гель отделяли и повторно зондировали на общую ERK (нижний ряд). Эти графики представляют три независимых эксперимента.

    РИС. 2.

    Неорганическая ртуть активирует Ras, но не ERK-MAPK. Клетки WEHI-231 стимулировали контрольным носителем (-), 1 мкМ HgCl 2 в течение периодов 1–10 мин или в качестве положительного контроля 200 нМ форбол 12-миристат 13-ацетат в течение 5 мин. Затем клетки анализировали либо на Ras (активированный Ras и общий Ras), либо на активную ERK-MAPK.Активированный Ras (Ras.GTP) выделяли с помощью аффинной хроматографии со слитым белком, содержащим Ras-связывающий домен протеинкиназы Raf (выпадающий список RBD). Затем выделенный активный белок Ras и общий белок Ras, присутствующие в преципитатах клеточных лизатов трихлоруксусной кислотой, визуализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Активный MAPK определяли вестерн-блоттингом. (Дорожки были нормализованы в том смысле, что загрузка элюатов Ras.GTP, преципитатов трихлоруксусной кислоты или клеточных лизатов была получена из эквивалентных количеств клеток.)

    РИС. 2.

    Неорганическая ртуть активирует Ras, но не ERK-MAPK. Клетки WEHI-231 стимулировали контрольным носителем (-), 1 мкМ HgCl 2 в течение периодов 1–10 мин или в качестве положительного контроля 200 нМ форбол 12-миристат 13-ацетат в течение 5 мин. Затем клетки анализировали либо на Ras (активированный Ras и общий Ras), либо на активную ERK-MAPK. Активированный Ras (Ras.GTP) выделяли с помощью аффинной хроматографии со слитым белком, содержащим Ras-связывающий домен протеинкиназы Raf (выпадающий список RBD).Затем выделенный активный белок Ras и общий белок Ras, присутствующие в преципитатах клеточных лизатов трихлоруксусной кислотой, визуализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Активный MAPK определяли вестерн-блоттингом. (Дорожки были нормализованы в том смысле, что загрузка элюатов Ras.GTP, преципитатов трихлоруксусной кислоты или клеточных лизатов была получена из эквивалентного количества клеток.) et al., 2006; Krutzik et al. , 2004). Эти результаты показаны на Рисунке 3, где базовая экспериментальная схема была аналогична дизайну на Рисунке 1. Как и на Рисунке 1, клетки инкубировали или не инкубировали с Hg +2 , а затем стимулировали в течение заданных периодов времени с помощью козьего антимышиного Ig. . Затем их окрашивали флуоресцентно меченными анти-фосфо-ERK 1,2 и анализировали проточной цитометрией. Во-первых, мы определили процент клеток, экспрессирующих фосфо-ERK, как функцию времени после стимуляции BCR, сравнивая сигнал флуоресценции p-ERK в каждой временной точке с контрольными клетками, которые не стимулировались и не подвергались воздействию Hg +2 .Как показано на рисунке 3, стимуляция BCR индуцировала заметное увеличение количества клеток, экспрессирующих p-ERK, уже через 0,5 мин после стимуляции, при этом почти 80% клеток экспрессировали фосфорилированную ERK через 5 мин после стимуляции. Предварительное воздействие на клетки Hg +2 приводило к 25% снижению процента отвечающих клеток, а пиковая активация ERK была отложена до 10 минут после стимуляции BCR (фиг. 3B). Более того, средняя интенсивность флуоресценции p-ERK, которая является мерой степени фосфорилирования ERK, снижается более чем на 30% после воздействия Hg +2 (рис.3С). Эти данные показывают, что после стимуляции BCR Hg ​​снижает количество отвечающих клеток, и что внутри популяции отвечающих клеток воздействие Hg +2 приводит к менее фосфорилированной ERK по сравнению с активированными контрольными клетками.

    РИС. 3.

    Кинетика контрастной передачи сигналов BCR в клетках WEHI-231, стимулированных в присутствии и в отсутствие неорганической ртути. Клетки WEHI-231 предварительно инкубировали ± 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 минут, после чего BCR активировали козьим анти-IgM.В указанные интервалы времени клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали на фосфо-ERK 1,2. (A) Фосфорилирование ERK 1,2 измеряли в пяти временных точках между 0,5 и 20 мин после стимуляции BCR. Сравнение индуцированной BCR активации ERK в присутствии и в отсутствие предварительной обработки Hg +2 показано на каждой панели. Заштрихованная гистограмма, показанная на самой нижней панели, представляет сигнал фосфо-ERK 1,2 для нестимулированных клеток. Гистограмма, перекрывающая нестимулированные клетки, была получена для клеток, предварительно обработанных Hg +2 без стимуляции BCR.Процентное содержание (B) и средняя интенсивность флуоресценции (C) клеток с активированным ERK 1,2 после стимуляции BCR в контроле (светлые кружки) и Hg +2 -интоксикации (темные кружки) клеток WEHI-231 были определены на основании гистограммы показаны на панели A.

    РИС. 3.

    Кинетика контрастной передачи сигналов BCR в клетках WEHI-231, стимулированных в присутствии и в отсутствие неорганической ртути. Клетки WEHI-231 предварительно инкубировали ± 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 минут, после чего BCR активировали козьим анти-IgM.В указанные интервалы времени клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали на фосфо-ERK 1,2. (A) Фосфорилирование ERK 1,2 измеряли в пяти временных точках между 0,5 и 20 мин после стимуляции BCR. Сравнение индуцированной BCR активации ERK в присутствии и в отсутствие предварительной обработки Hg +2 показано на каждой панели. Заштрихованная гистограмма, показанная на самой нижней панели, представляет сигнал фосфо-ERK 1,2 для нестимулированных клеток. Гистограмма, перекрывающая нестимулированные клетки, была получена для клеток, предварительно обработанных Hg +2 без стимуляции BCR.Процентное содержание (B) и средняя интенсивность флуоресценции (C) клеток с активированным ERK 1,2 после стимуляции BCR в контроле (светлые кружки) и Hg +2 -интоксикации (темные кружки) клеток WEHI-231 были определены на основании гистограммы показаны на панели A.

    Кинетика BCR-индуцированного фосфорилирования тирозина Syk изменяется под действием Hg
    +2

    Несомненный интерес представляет механизм, посредством которого Hg +2 ослабляет активацию ERK. В отсутствие каких-либо доказательств прямого взаимодействия между Hg +2 и ERK, мы сочли, что передающие сигнальные элементы, проксимальные к сигнаносоме BCR, могут быть нацелены на Hg +2 .В частности, во время передачи сигнала BCR активация ERK-MAPK зависит от предшествующего фосфорилирования и активации протеинтирозинкиназы (PTK) Syk (Cornall et al. , 2000; Dal Porto et al. , 2004) . Поэтому мы решили определить, связано ли ингибирование ERK Hg +2 с подавлением активности Syk-киназы в B-клетках во время BCR-опосредованной передачи сигнала.

    Соответственно, в серии экспериментов В-клетки предварительно обрабатывали или не обрабатывали Hg +2 перед стимуляцией BCR добавлением анти-Ig.Через определенные промежутки времени клетки лизировали и Syk экстрагировали из лизатов иммуноаффинной хроматографией. Затем с помощью вестерн-блоттинга определяли фосфорилирование тирозина белка, общий показатель активности Syk (Keshvara et al. , 1998). Фигура 4A представляет собой типичный пример результатов нескольких экспериментов ( n = 5), показывающих, что в покоящихся клетках, не обработанных анти-Ig, мало фосфорилируется Syk, если он вообще какой-либо, и это не зависит от того, имеют ли клетки лечился ртутью.Таким образом, ртуть в чистом виде в нетоксичных концентрациях, по-видимому, не оказывает прямого влияния на активность Syk. Однако после стимуляции BCR измеримое фосфорилирование Syk происходит в течение 30 секунд. Однако в клетках, обработанных Hg +2 , фосфорилирование, по-видимому, усиливается. Эта тенденция продолжается на 2 мин. Однако через 5 мин клетки, обработанные Hg +2 , и контрольные клетки достигли максимального фосфорилирования и оказались примерно равными по интенсивности. Через 5 минут популяция как обработанных, так и необработанных Hg +2 снижается до контрольных уровней.

    РИС. 4.

    Hg +2 ускоряет BCR-опосредованную активацию Syk. В-клетки WEHI-231 инкубировали 10 мин с или без 5 мкМ Hg 2+ . Затем клетки стимулировали перекрестным связыванием BCR с IgG козы α-мыши. Через определенные интервалы времени клетки лизировали, и Syk подвергали иммунопреципитации из лизатов. Фосфорилирование тирозина Syk определяли вестерн-блоттингом. (A) Репрезентативный вестерн-блот фосфорилированного Syk в клетках, подвергшихся или не подвергнутых воздействию Hg +2 ( n = 10).(Дорожки были нормализованы в том смысле, что загрузка иммунопреципитированных элюатов была получена из эквивалентного количества клеток.) ​​(B) Уровни фосфорилирования Syk затем количественно определялись путем цифрового сканирования нескольких вестерн-блоттингов иммунопреципитированных Syk. Результаты 10 экспериментов были усреднены и нанесены на график (в логарифмической шкале, чтобы выделить ранние временные точки), с замкнутым треугольником, представляющим клетки, подвергшиеся воздействию Hg +2 , и замкнутым квадратом, представляющим клетки, не подвергшиеся воздействию Hg +2 .Планки погрешностей представляют собой SEM. «*» И «**» указывают на статистически значимую разницу (как определено с помощью гетероскедастического теста t ) между клетками, обработанными или не обработанными Hg +2 , с p <0,005 и p < 0,001 соответственно.

    РИС. 4.

    Hg +2 ускоряет BCR-опосредованную активацию Syk. В-клетки WEHI-231 инкубировали 10 мин с или без 5 мкМ Hg 2+ . Затем клетки стимулировали перекрестным связыванием BCR с IgG козы α-мыши.Через определенные интервалы времени клетки лизировали, и Syk подвергали иммунопреципитации из лизатов. Фосфорилирование тирозина Syk определяли вестерн-блоттингом. (A) Репрезентативный вестерн-блот фосфорилированного Syk в клетках, подвергшихся или не подвергнутых воздействию Hg +2 ( n = 10). (Дорожки были нормализованы в том смысле, что загрузка иммунопреципитированных элюатов была получена из эквивалентного количества клеток.) ​​(B) Уровни фосфорилирования Syk затем количественно определялись путем цифрового сканирования нескольких вестерн-блоттингов иммунопреципитированных Syk.Результаты 10 экспериментов были усреднены и нанесены на график (в логарифмической шкале, чтобы выделить ранние временные точки), с замкнутым треугольником, представляющим клетки, подвергшиеся воздействию Hg +2 , и замкнутым квадратом, представляющим клетки, не подвергшиеся воздействию Hg +2 . Планки погрешностей представляют собой SEM. «*» И «**» указывают на статистически значимую разницу (как определено с помощью гетероскедастического теста t ) между клетками, обработанными или не обработанными Hg +2 , с p <0,005 и p < 0.001 соответственно.

    Неожиданно фигура 4А показывает, что Hg +2 в первую очередь влияет на кинетику фосфорилирования Syk после стимуляции BCR в том смысле, что он ускоряет BCR-зависимое фосфорилирование тирозина Syk, но мало влияет на максимальное фосфорилирование. Этот результат получил более количественную основу на фиг. 4B, где основной эксперимент, описанный на фиг. 3A, был повторен еще 9 раз, но полученные вестерн-блоты для фосфо-Syk (p-Syk) были количественно определены денситометрией.Однако, поскольку оказалось, что ртуть в основном оказывает влияние на фосфорилирование Syk в очень ранние времена, в этих экспериментах были проанализированы временные точки до 30 с после стимуляции BCR, в дополнение к более поздним. Результаты представлены на рисунке 4B, где временные координаты нанесены в логарифмическом масштабе, чтобы подчеркнуть раннюю кинетику. Этот рисунок согласуется с рисунком 4А, демонстрируя, что в присутствии Hg +2 кинетика фосфорилирования Syk изменяется.Хотя (индуцированное BCR) максимальное фосфорилирование Syk в обработанных Hg +2 клетках аналогично контролю, процесс фосфорилирования ускоряется.

    Hg
    +2 Изменяет BCR-зависимое фосфорилирование тирозина Syk в нормальных B-клетках

    В отличие от линий B-клеток, нормальные B-клетки представляют собой гетерогенную популяцию клеток с поликлональной специфичностью BCR. Первичные В-клетки селезенки также представляют собой смешанный пул клеток в отношении статуса созревания (Chung et al., 2003). По этим причинам анализ сигнальных профилей BCR в нормальных B-клетках является более сложной задачей, чем анализ передачи сигналов в B-клеточных линиях. Одноклеточная фосфоспецифическая проточная цитометрия представляет собой технический прогресс, который особенно подходит для решения этой проблемы. На рисунке 5 мы использовали фосфо-специфическую проточную цитометрию, чтобы продемонстрировать, что Hg +2 изменяет BCR-индуцированное фосфорилирование тирозина Syk в нормальных B-клетках.

    РИС. 5.

    Hg +2 изменяет активацию Syk в субфракции нормальных B-клеток.Спленоциты BALB / c предварительно инкубировали с ± 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 минут перед стимуляцией BCR анти-IgM. Через определенные интервалы времени клетки фиксировали и обрабатывали для фенотипирования проточной цитометрией для p-Syk и B220. (A) Пятьдесят тысяч жизнеспособных событий (стробирование по прямому рассеянию по сравнению с боковым рассеянием) были получены на проточном цитометре BD LSR II и данные проанализированы с использованием программного обеспечения FloJo. H 2 O 2 , ингибитор фосфотирозинфосфатазы, который увеличивает уровни p-Syk, использовали в качестве положительного контроля.Показанные данные относятся к 2-минутному интервалу времени и представляют два эксперимента. Кинетика активации Syk, основанная на процентном содержании клеток (B) и средней интенсивности флуоресценции (C) клеток с активированным Syk после стимуляции BCR, сравнивается между контрольными (белые кружки) и клетками, предварительно обработанными Hg +2 (темные кружки). . Hg +2 , отдельно, в отсутствие стимуляции BCR (закрашенные квадраты) не влиял на активацию Syk.

    РИС. 5.

    Hg +2 изменяет активацию Syk в субфракции нормальных B-клеток.Спленоциты BALB / c предварительно инкубировали с ± 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 минут перед стимуляцией BCR анти-IgM. Через определенные интервалы времени клетки фиксировали и обрабатывали для фенотипирования проточной цитометрией для p-Syk и B220. (A) Пятьдесят тысяч жизнеспособных событий (стробирование по прямому рассеянию по сравнению с боковым рассеянием) были получены на проточном цитометре BD LSR II и данные проанализированы с использованием программного обеспечения FloJo. H 2 O 2 , ингибитор фосфотирозинфосфатазы, который увеличивает уровни p-Syk, использовали в качестве положительного контроля.Показанные данные относятся к 2-минутному интервалу времени и представляют два эксперимента. Кинетика активации Syk, основанная на процентном содержании клеток (B) и средней интенсивности флуоресценции (C) клеток с активированным Syk после стимуляции BCR, сравнивается между контрольными (белые кружки) и клетками, предварительно обработанными Hg +2 (темные кружки). . Hg +2 , отдельно, в отсутствие стимуляции BCR (закрашенные квадраты) не влиял на активацию Syk.

    Спленоциты выделяли от мышей BALB / c, и в качестве положительного контроля одну аликвоту обрабатывали H 2 O 2 .(H 2 O 2 инактивирует негативные регуляторные протеинтирозинфосфатазы (PTP). Это приводит к гиперфосфорилированию белков в сигнальном каскаде BCR, включая Syk, в результате неконтролируемой эндогенной активности PTK (Reth, 2002). клетки предварительно инкубировали с HgCl или без него 2 , после чего BCR стимулировали козьим анти-IgM. Через определенные интервалы времени до 20 минут после стимуляции BCR клетки окрашивали на p-Syk. Клетки, подвергшиеся воздействию H 2 O 2 также были окрашены на p-Syk через 20 мин.Для получения маркера пан-B-клеток все клетки контрокрашивали антителом против B220. Затем клетки анализировали на экспрессию p-Syk и B220 с помощью двухцветной проточной цитометрии, и результаты показаны на фиг. 5.

    Быстрое фосфорилирование Syk было обнаружено в клетках B220 в течение 0,5 мин после стимуляции BCR. Внутренний отрицательный контроль подтвердил отсутствие p-Syk в ответ на анти-Ig в не-B-клеточном (B220-отрицательном) компартменте на каждом из графиков на фиг. 5A. Также показан положительный контроль (рис.5A, нижняя левая панель), где мы находим устойчивую активацию Syk в (B220 и B220 + ) спленоцитах после стимуляции H 2 O 2 . (Хотя спленоциты B220 не экспрессируют Syk, реагент против p-Syk также распознает эпитоп фосфо-ZAP-70 в Т-клетках. Таким образом, очевидный сигнал p-Syk в клетках B220 показан на нижняя левая панель на фиг. 5A, вероятно, представляет фосфорилирование ZAP-70 в ответ на инактивацию PTP в Т-клетках.Примечательно, что предварительная обработка нормальных первичных спленоцитов Hg +2 заметно увеличивала процент клеток B220 + , экспрессирующих фосфорилированный Syk после стимуляции BCR (правые панели фиг. 5A). Более того, сравнивая кинетику активации Syk между BCR-стимулированными контрольными клетками и клетками, отравленными Hg +2 (рис. 5B и 5C), мы обнаруживаем, что Hg +2 резко увеличивает степень фосфорилирования Syk в B220 + отсек.

    BCR-индуцированная активация PLCγ не зависит от Hg
    +2 , хотя ее связывание с Syk ускоряется

    Помимо ERK, PLCγ является еще одним важным нижестоящим эффектором передачи сигналов BCR (Dal Porto et al. , 2004). При перекрестном связывании BCR PLCγ активируется за счет фосфорилирования тирозина нескольких остатков в реакциях, катализируемых киназами Syk и Btk (Kim et al. , 2004). Затем активированный PLCγ расщепляет фосфатидилинозитолбифосфат, высвобождая IP 3 и диацилглицерин (DAG).В то время как IP 3 является положительным регулятором высвобождения Ca 2+ из внутриклеточных хранилищ, DAG отвечает за активацию PKC и Ras. Поскольку PLCγ и ERK находятся ниже Syk во время передачи сигнала BCR, но не связаны напрямую, мы спросили, подавляет ли Hg +2 активацию PLCγ, как это делает ERK.

    На фиг. 6 В-клетки WEHI-231 инкубировали или не инкубировали с 5 мкМ Hg +2 и, как на фиг. 4, стимулировали анти-Ig. Через определенные промежутки времени клетки лизировали и выделяли PLCγ с помощью иммуноаффинной хроматографии.Затем фосфорилированный тирозином PLCγ визуализировали вестерн-блоттингом с антителом против фосфотирозина. В контрольных клетках фосфорилирование PLCγ является временным. Мы обнаружили, что в течение 30 секунд PLCγ максимально фосфорилируется, но к 20 минутам фосфорилирование возвращается к фоновым уровням. Важно отметить, что мы не обнаружили различий в фосфорилировании тирозина в клетках, обработанных Hg +2 , и клетках, которые не обрабатывали.

    РИС. 6.

    Hg +2 ускоряет BCR-индуцированное связывание Syk с PLCγ, не влияя на индуцированное BCR фосфорилирование тирозина PLCγ.Клетки WEHI-231 предварительно инкубировали с ± 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 минут перед стимуляцией BCR анти-Ig. Через определенные интервалы времени после стимуляции BCR клетки лизировали и PLCγ выделяли с помощью иммуноаффинной хроматографии. PLCγ и любые соосажденные белки разделялись с помощью SDS-PAGE. (Дорожки были нормализованы в том смысле, что загрузка иммунопреципитированных элюатов была получена из эквивалентного количества клеток.) ​​Верхняя панель: фосфорилирование тирозина изолированного PLCγ определяли вестерн-блоттингом.Образцы для временных точек 0, 0,5 и 1 мин были разделены на одном геле, тогда как образцы для 5, 10 и 20 минут были разделены на втором геле, при этом отдельные изображения были объединены для рисунка. Средняя панель: блоты были удалены, а затем повторно зондированы антителом, распознающим Syk, при этом два изображения снова объединены на рисунке. Нижняя панель: В качестве контроля загрузки блоты удаляли второй раз, а затем зондировали антителом, распознающим общий PLCγ.

    РИС. 6.

    Hg +2 ускоряет BCR-индуцированное связывание Syk с PLCγ, не влияя на индуцированное BCR фосфорилирование тирозина PLCγ.Клетки WEHI-231 предварительно инкубировали с ± 5 мкМ HgCl 2 в течение 5 минут перед стимуляцией BCR анти-Ig. Через определенные интервалы времени после стимуляции BCR клетки лизировали и PLCγ выделяли с помощью иммуноаффинной хроматографии. PLCγ и любые соосажденные белки разделялись с помощью SDS-PAGE. (Дорожки были нормализованы в том смысле, что загрузка иммунопреципитированных элюатов была получена из эквивалентного количества клеток.) ​​Верхняя панель: фосфорилирование тирозина изолированного PLCγ определяли вестерн-блоттингом.Образцы для временных точек 0, 0,5 и 1 мин были разделены на одном геле, тогда как образцы для 5, 10 и 20 минут были разделены на втором геле, при этом отдельные изображения были объединены для рисунка. Средняя панель: блоты были удалены, а затем повторно зондированы антителом, распознающим Syk, при этом два изображения снова объединены на рисунке. Нижняя панель: В качестве контроля загрузки блоты удаляли второй раз, а затем зондировали антителом, распознающим общий PLCγ.

    После стимуляции BCR, помимо фосфорилирования, было показано, что PLCγ транслоцирует и связывается с фосфотирозильными остатками в линкерной области Syk (Law et al., 1996). Чтобы установить, оказывает ли Hg +2 какое-либо влияние на связывание PLCγ с Syk, блот очищали и повторно зондировали антителом против Syk для определения количества Syk, соосаждавшегося с PLCγ. Мы обнаружили, что в контрольных условиях в отсутствие ртути Syk в значительной мере не связывается с PLCγ до 1 мин после начала передачи сигналов BCR. С другой стороны, в клетках, которые были предварительно инкубированы с Hg +2 , максимальные количества Syk уже связались с PLCγ через 30 секунд после инициирования передачи сигналов BCR.Hg +2 , таким образом, служит для ускорения ассоциации Syk-PLCγ во время передачи сигналов BCR.

    Неорганическая ртуть связывается с внешней листочкой плазменной мембраны, но не проникает с ней

    Хотя неорганическая ртуть в условиях воздействия, которые мы использовали, кажется, мало влияет на ERK-MAPK или Syk сама по себе, возможно, что подавление фосфорилирования ERK или ускоренная активация Syk после стимуляции BCR все еще может быть результатом прямого действия металла на уровне ERK и / или Syk.Также возможно, что ртуть может напрямую воздействовать на один или несколько из нескольких сигнальных посредников, таких как Ras или киназы MAPK (митоген-активированный белок) / ERK-киназа (MEK) 1/2, которые находятся между Syk и ERK в BCR. сеть передачи сигналов. Однако ERK, а также все промежуточные звенья передачи сигналов выше уровня Syk являются цитоплазматическими белками. Чтобы неорганическая ртуть могла напрямую взаимодействовать с любым из них, по крайней мере, она должна попасть в цитоплазматический компартмент.Поэтому мы использовали атомно-абсорбционную спектроскопию холодного пара, чтобы определить, в какой степени неорганическая ртуть действительно пересекала плазматическую мембрану в условиях, показанных на рисунках 1–6.

    В серии экспериментов клетки WEHI-231 инкубировали с 0,2-10 мкМ HgCl 2 , что, как мы ранее установили, является самой высокой нетоксичной концентрацией Hg +2 для этих клеток (McCabe et al. , 1999). Через определенные промежутки времени клетки промывали, и для каждой концентрации Hg +2 половину обрабатывали хелатирующим агентом тяжелых металлов British anti-lewisite (BAL) для удаления ртути, связанной с поверхностями клеток, но не внутренней ртути, которая пересекла плазму. мембрана (Oehme, 1972).Затем была использована атомно-абсорбционная спектроскопия холодного пара для определения содержания ртути в клетках Hg +2 в BAL-обработанных и необработанных клетках. Мы обнаружили, что для всех концентраций Hg +2 в течение 24 часов инкубации нагрузка ртути на клетки, не обработанные БАЛ, постоянно возрастала. Однако для всех временных точек и для всех концентраций ртути содержание ртути в клетках, обработанных БАЛ, оставалось на исходном уровне. Это означает, что в пределах нашего предела обнаружения вся ртуть, связанная с клетками, была связана с поверхностью клетки, при этом незначительное попадание в цитоплазму.На рисунке 7 показаны результаты для 10 мкМ, что было самой высокой проверенной концентрацией ртути. В других экспериментах мы также определили, что Hg +2 существенно не проникает в клетки в условиях, когда BCR был поперечно сшит с анти-Ig (не показано).

    РИС. 7.

    Hg +2 Нагрузка на лимфоциты в первую очередь связана с поверхностью. В-клетки WEHI-231 инкубировали в среде с 10 мкМ HgCl 2 . Через определенные интервалы времени аликвоты клеток удаляли из культуры и промывали свежей средой.Половину клеток промывали хелатирующим агентом BAL для удаления Hg +2 , связанной с поверхностью (закрашенный квадрат), в то время как оставшиеся клетки снова промывали средой (закрашенный треугольник). Затем количество ртути, оставшейся в ячейках, определяли с помощью атомно-абсорбционной спектрометрии. После обработки БАЛ, Hg +2 , оставшаяся в клетках, находилась на исходном уровне. Результаты представляют три независимых эксперимента.

    РИС. 7.

    Hg +2 Нагрузка на лимфоциты в первую очередь связана с поверхностью.В-клетки WEHI-231 инкубировали в среде с 10 мкМ HgCl 2 . Через определенные интервалы времени аликвоты клеток удаляли из культуры и промывали свежей средой. Половину клеток промывали хелатирующим агентом BAL для удаления Hg +2 , связанной с поверхностью (закрашенный квадрат), в то время как оставшиеся клетки снова промывали средой (закрашенный треугольник). Затем количество ртути, оставшейся в ячейках, определяли с помощью атомно-абсорбционной спектрометрии. После обработки БАЛ, Hg +2 , оставшаяся в клетках, находилась на исходном уровне.Результаты представляют три независимых эксперимента.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Ранее мы обнаружили, что воздействие на В-клетки низких и нетоксичных концентраций Hg +2 влияет на способность BCR отвечать на антиген (McCabe et al. , 1999). Теперь мы сообщаем, что, когда BCR стимулируется в присутствии нетоксичных концентраций Hg +2 , нормальная активация ERK-MAPK ослабляется (рис. 1 и 3).Поскольку известно, что активация нескольких важных факторов транскрипции, регулирующих ответ B-клеток на антиген, зависит от активированной ERK (Dal Porto et al. , 2004), ртуть блокирует или изменяет ответ B-клеток на антиген. по крайней мере, частично за счет ослабления опосредованной BCR передачи сигнала на уровне ERK или выше. Но по какому механизму? Маловероятно, что влияние Hg +2 на ERK может быть результатом прямого взаимодействия с Hg +2 .ERK является внутриклеточным белком, и мы обнаружили, что (в условиях, которые мы использовали), Hg +2 не проникает через плазматическую мембрану (рис. 7). Hg +2 сначала должен непосредственно взаимодействовать с элементом или элементами сети передачи сигнала B-клеток, которые находятся выше ERK.

    В В-клетках, как и в других системах, активация ERK контролируется вышестоящим внутриклеточным каскадом киназ Raf-MEK, который передает сигналы от активированных рецепторов к ERK.Каскад контролируется Ras GTPase, которая непосредственно активирует Raf (Dal Porto et al. , 2004; Harding et al. , 2005). Исследуя влияние Hg +2 на эти вышестоящие сигнальные элементы, мы обнаружили, что, хотя Ras является внутриклеточным белком, только Hg +2 активирует Ras, но не ERK (рис. 2). Вероятно, это объясняется тем фактом, что Ras функционирует как точка интеграции во многих аспектах передачи сигналов в клетках. Внеклеточные сигнальные пути, опосредованные различными рецептор-ассоциированными тирозинкиназами, включая, помимо прочего, комплекс BCR, все используют Ras, и Ras потенциально может активировать несколько нижестоящих эффекторов в дополнение к Raf (Pouyssegur et al., 2002). Таким образом, в любой конкретный момент только часть Ras связана с каскадом Raf-MEK-MAPK. Взятые вместе, рисунки 1 и 2 подразумевают, что вмешиваясь в вышестоящий элемент сигнального каскада BCR, Hg +2 ослабляет BCR-индуцированную активацию ERK. Однако также оказывается, что в то же время Hg +2 активирует мембранные рецепторы, которые связаны с Ras, но не с каскадом Raf-MEK-ERK.

    Во многих отношениях, включая активацию каскада Raf-MEK-ERK-MAPK, передача сигналов BCR сходна с передачей сигналов TCR.Ранее мы показали, что в Т-клетках Hg +2 ослабляет передачу сигнала TCR, препятствуя TCR-индуцированной активации Ras и ERK (Mattingly et al. , 2001a). В этом случае мы определили, что вмешательство в активацию Ras является результатом Hg +2 -зависимого ослабления фосфорилирования ZAP-70, ключевой тирозинкиназы выше Ras и каскада Raf-MEK-MAPK в Т-клетках (Ziemba et al. , 2006).

    В B-клетках гомолог Syk ZAP-70 обычно заменяет ZAP-70 в передаче сигналов, опосредованной рецептором антигена.Аналогично ZAP-70 во время передачи сигналов TCR, Syk фосфорилируется по множеству тирозинов после активации B-клеток, и предварительная активация Syk необходима для активации Ras (и ERK) (Cornall et al. , 2000). Однако мы обнаружили, что, хотя Hg +2 явно подавляет активацию ERK после передачи сигналов BCR или TCR, в отличие от ZAP-70 в Т-клетках, подвергнутых воздействию Hg +2 , общее фосфорилирование Syk, по-видимому, не снижается в В-клетки, предварительно подвергнутые действию Hg +2 .Скорее, мы обнаружили, что в присутствии Hg +2 скорость фосфорилирования Syk фактически увеличивалась в В-клетках WEHI-231 и даже более резко в нормальных В-клетках селезенки, отвечающих на передачу сигналов BCR (рис. 4 и 5). Тем не менее, передача сигнала все еще частично блокируется на уровне ERK. Мы предполагаем, что это происходит не потому, что Hg +2 напрямую ингибирует активацию Syk, а потому, что кинетика активации Syk изменилась. Если это так, то влияние ртути на кинетику активации Syk и последующее ослабление активации ERK следует понимать как сетевой феномен, возможно, следствие тонких изменений во времени промежуточных сигнальных событий BCR.

    Используя множество генетических и биохимических методов, включая генерацию доминантно-отрицательных мутантов, протоколы соосаждения и т.д., иерархическая структура сигнальной сети BCR стала более сфокусированной (Dal Porto et al. , 2004). В большинстве дискуссий о передаче сигналов B-клеток неявно подразумевается, что передача сигналов происходит ступенчатым образом. То есть сигнальные элементы могут быть более или менее организованы в последовательность, так что активация любого конкретного нисходящего элемента сети зависит, прежде всего, от предшествующей активации элемента или элементов непосредственно выше по течению, превышая некоторый порог.Однако передача сигналов BCR также носит временный характер. Это возникает из-за того, что активные сигнальные элементы одновременно передают как положительные, так и отрицательные сигналы обратно к вышестоящим элементам, а также положительные и отрицательные сигналы к нижележащим элементам.

    Теоретически было показано, что, хотя активация нижележащих элементов в таких сигнальных сетях обычно зависит от достижения активированными вышестоящими элементами пороговых значений, активность нижележащих элементов также может модулироваться скоростью изменения активации в вышестоящих элементах (Ozaki et al. ., 2005). Центральным элементом, контролирующим скоростную чувствительность В-клеток, вероятно, является Syk. Хотя функциональные последствия, возможно, не были полностью оценены, Syk, как было ранее установлено, одновременно облегчает аспекты как положительной, так и отрицательной передачи сигналов. Syk из активированных (BCR) В-клеток фосфорилируется в основном по шести тирозинам. Тирозин 130 расположен между тандемными доменами Sh3, но его функция не совсем ясна. Тирозины 519 и 520 находятся в каталитическом домене и считаются положительными регуляторами передачи сигналов BCR, поскольку их фосфорилирование напрямую повышает ферментативную активность киназы (Keshvara et al., 1998). Фосфорилирование Tyr342 и Tyr346 в линкерной области Syk также считается положительно связанным с передачей сигналов BCR, поскольку было показано, что фосфорилирование этих остатков обеспечивает сайт связывания для PLCγ, другого важного медиатора передачи сигналов BCR (Hong et al. , 2002; Закон и др. , 1996). С другой стороны, Tyr317 также в области линкера Syk функционально уникален от других тирозинов. В отличие от других, фосфорилирование Tyr317 сильно ослабляет нижестоящую передачу сигналов BCR (Hong et al., 2002).

    Фигура 6 демонстрирует, что на индуцированное BCR фосфорилирование PLCγ не влияет Hg +2 , поскольку PLCγ оказывается максимально фосфорилированным через 30 с после инициации передачи сигналов BCR, независимо от того, подвергались ли клетки воздействию Hg +2 . Напротив, после стимуляции BCR связывание PLCγ с Syk ускоряется Hg +2 . Это согласуется с ускоренным фосфорилированием Tyr342 и Tyr346 в присутствии Hg +2 , как показано на рисунках 4 и 5.Это также согласуется с индуцированным Hg +2 ускорением передачи сигналов через путь PLCγ, по крайней мере в той степени, в которой передача сигналов через PLCγ зависит от связывания PLCγ с Syk. Мы должны отметить, что хотя эти результаты не исключают роль Syk в фосфорилировании и активации PLCγ, они предполагают, что фосфорилирование PLCγ не зависит от связывания PLCγ с Tyr342 и Tyr346.

    Ожидается, что ускоренное фосфорилирование Syk во время передачи сигналов BCR изменит как отрицательные, так и положительные сигналы, зависимые от Syk, возможно, изменяя относительную кинетику между ними.До сих пор неясно, почему Hg +2 должен приводить к ускоренному фосфорилированию Syk во время передачи сигналов BCR, но поскольку это внутриклеточный белок, маловероятно, что Hg +2 напрямую взаимодействует с Syk. Гораздо более вероятно, что в этом случае Hg +2 напрямую взаимодействует с вышестоящим участником сигнального каскада BCR, возможно, с CD45, трансмембранным белком, который, как известно, контролирует силу сигнала BCR (Dal Porto et al. , 2004).

    Ранее сообщалось, что в Т-лимфоцитах Hg +2 может напрямую агрегировать множественные мембранные рецепторы, что приводит к очень высоким уровням активации нескольких внутриклеточных тирозинкиназ (Nakashima et al., 1994). Однако в этих экспериментах использовались очень высокие (и токсичные) уровни Hg +2 (0,5 мМ). В условиях низкой нагрузки Hg +2 , использованной в наших экспериментах, мы не нашли доказательств массивной активации тирозинкиназы, характерной для более высоких воздействий Hg +2 (результаты не показаны). В этом случае активация тирозинкиназы, индуцированная Hg +2 , вряд ли будет фактором вмешательства Hg +2 в активность ERK после стимуляции BCR, хотя нельзя исключать, что Hg +2 влияет на агрегацию специфических мембранных белков, таких как CD45.

    Наконец, нельзя исключать, что в зависимости от типа клеток и конкретного режима воздействия Hg + 2 может взаимодействовать с клеточными системами множеством способов. Например, сообщалось, что в тучных клетках Hg +2 усиливает экспрессию гена IL-4 с помощью механизма, включающего индуцированную окислительным стрессом активацию транскрипции (Wu et al. , 2001). Однако эти результаты, по-видимому, не имеют прямого отношения к нашим экспериментам с B-клетками, поскольку использовались более высокие нагрузки воздействия Hg +2 (2 × 10 −5 M в течение 2 часов) и более длительные масштабы времени (2 часа).Ранее на Т-клетках также было показано, что умеренное воздействие Hg +2 увеличивает внутриклеточный кальций за счет стимуляции притока через кальциевые каналы в плазматической мембране (Badou et al. , 1997; Tan et al. , 1993). Возможно, что в B-клетках изменения внутриклеточного кальция могут косвенно влиять на активность Ras (и, следовательно, ERK) через влияние на PKC. С другой стороны, нет четких доказательств того, что на активность Syk прямо или косвенно влияют изменения внутриклеточного кальция.

    ФИНАНСИРОВАНИЕ

    Национальных институтов здравоохранения (ES11000, ES12403, ES01247 и AI1007527).

    Список литературы

    Badou

    A

    ,

    Savignac

    M

    ,

    Moreau

    M

    ,

    Leclerc

    C

    ,

    Pasquier

    R

    ,

    Druet

    0003

    Druet

    elle

    HgCl 2 -индуцированная экспрессия гена интерлейкина-4 в Т-клетках включает зависимый от протеинкиназы С приток кальция через кальциевые каналы L-типа

    ,

    J.Биол. Chem.

    ,

    1997

    , т.

    272

    (стр.

    32411

    32418

    )

    Brickman

    CM

    ,

    Shoenfeld

    Y

    .

    Мозаика аутоиммунитета

    ,

    Сканд. J. Clin. Лаборатория. Инвестировать.

    ,

    2001

    , т.

    235

    (стр.

    3

    15

    )

    Cappione

    A

    III,

    Anolik

    JH

    ,

    Pugh-Bernard

    A

    ,

    Barnard

    ,

    Сильверман

    G

    ,

    Sanz

    I

    .

    Исключение зародышевого центра аутореактивных В-клеток является дефектом при системной красной волчанке человека

    ,

    J. Clin. Инвестировать.

    ,

    2005

    , т.

    115

    (стр.

    3205

    3216

    )

    Чанг

    JB

    ,

    Silverman

    M

    ,

    Monroe

    JG

    .

    Переходные В-клетки: шаг за шагом к иммунной компетентности

    ,

    Trends Immunol.

    ,

    2003

    , т.

    24

    (стр.

    343

    349

    )

    Cornall

    RJ

    ,

    Cheng

    AM

    ,

    Pawson

    T

    ,

    Goodnow

    CC

    .

    Роль Syk в развитии В-клеток и передаче сигналов антиген-рецептор

    ,

    Proc. Natl Acad. Sci. США

    ,

    2000

    , т.

    97

    (стр.

    1713

    1718

    )

    Дал Порто

    JM

    ,

    Gauld

    SB

    ,

    Merrell

    KT

    ,

    Mills

    Bernard

    D

    ,

    Камбье

    Дж

    .

    Передача сигналов рецептора антигена В-клеток 101

    ,

    Mol. Иммунол.

    ,

    2004

    , т.

    41

    (стр.

    599

    613

    )

    Габай

    L

    ,

    Seger

    R

    ,

    Shilo

    BZ

    .

    Паттерн активации пути рецептора EGF дрозофилы in situ во время развития

    ,

    Science

    ,

    1997

    , vol.

    277

    (стр.

    1103

    1106

    )

    Гримальди

    CM

    ,

    Клири

    J

    ,

    Dagtas

    AS

    ,

    Moussai

    0003

    D

    Эстроген изменяет пороги апоптоза и активации В-клеток

    ,

    J. Clin. Инвестировать.

    ,

    2002

    , т.

    109

    (стр.

    1625

    1633

    )

    Гримальди

    CM

    ,

    Hicks

    R

    ,

    Diamond

    B

    .

    Отбор В-клеток и восприимчивость к аутоиммунитету

    ,

    J. Immunol.

    ,

    2005

    , т.

    174

    (стр.

    1775

    1781

    )

    Hansson

    M

    ,

    Djerbi

    M

    ,

    Rabbani

    H

    ,

    Mellstedt

    Hooster

    Хассан

    M

    ,

    Depierre

    JW

    ,

    Abedi-Valugerdi

    M

    .

    Воздействие хлорида ртути во время фазы индукции и после начала коллаген-индуцированного артрита усиливает иммунные / аутоиммунные реакции и обостряет заболевание у мышей DBA / 1

    ,

    Immunology

    ,

    2005

    , vol.

    114

    (стр.

    428

    437

    )

    Хардинг

    A

    ,

    Tian

    T

    ,

    Westbury

    E

    ,

    Frische

    E

    .

    Субклеточная локализация определяет выходной сигнал MAP-киназы

    ,

    Curr. Биол.

    ,

    2005

    , т.

    15

    (стр.

    869

    873

    )

    Hong

    JJ

    ,

    Yankee

    TM

    ,

    Harrison

    ML

    ,

    Geahlen

    RL

    .

    Регуляция передачи сигналов в В-клетках посредством фосфорилирования Syk по тирозинам линкерной области. Механизм отрицательной передачи сигналов тирозинкиназой Lyn

    ,

    J.Биол. Chem.

    ,

    2002

    , т.

    277

    (стр.

    31703

    31714

    )

    Ирландский

    JM

    ,

    Czerwinski

    DK

    ,

    Nolan

    GP

    ,

    Levy

    Кинетика передачи сигналов рецептора В-клеток в субпопуляциях В-клеток человека, картированная с помощью фосфоспецифической проточной цитометрии

    ,

    J. Immunol.

    ,

    2006

    , т.

    177

    (стр.

    1581

    1589

    )

    Джейкоб

    A

    ,

    Куни

    D

    ,

    Прадхан

    M

    ,

    Coggeshall

    км

    .

    Конвергенция сигнальных путей при активации ERK в В-клетках

    ,

    J. Biol. Chem.

    ,

    2002

    , т.

    277

    (стр.

    23420

    23426

    )

    Кешвара

    LM

    ,

    Isaacson

    CC

    ,

    Yankee

    TM

    ,

    000

    Sarac

    Geahlen

    RL

    .

    Syk- и Lyn-зависимое фосфорилирование Syk по множеству тирозинов после активации В-клеток включает сайт, который негативно регулирует передачу сигналов

    ,

    J.Иммунол.

    ,

    1998

    , т.

    161

    (стр.

    5276

    5283

    )

    Kim

    YJ

    ,

    Sekiya

    F

    ,

    Poulin

    B

    ,

    Bae

    YS

    .

    Механизм индуцированного рецептором В-клеток фосфорилирования и активации фосфолипазы C-gamma2

    ,

    Мол. Клетка. Биол.

    ,

    2004

    , т.

    24

    (стр.

    9986

    9999

    )

    Krutzik

    PO

    ,

    Irish

    JM

    ,

    Nolan

    GP

    ,

    Perez

    OD

    Анализ фосфорилирования белков и событий передачи клеточных сигналов с помощью проточной цитометрии: методы и клиническое применение

    ,

    Clin. Иммунол.

    ,

    2004

    , т.

    110

    (стр.

    206

    221

    )

    Закон

    C-L

    ,

    Chandran

    KA

    ,

    Сидоренко

    SP

    ,

    Clark

    EA

    EA

    Фосфолипаза C-гамма 1 взаимодействует с консервативными фосфорилированными остатками в линкерной области Syk и является субстратом для Syk

    ,

    Mol.Клетка. Биол.

    ,

    1996

    , т.

    16

    (стр.

    1305

    1315

    )

    Lohr

    J

    ,

    Knoechel

    B

    ,

    Nagabhushanam

    V

    ,

    Abbas

    AK

    Толерантность и аутоиммунитет Т-клеток к системным и тканевым аутоантигенам

    ,

    Immunol. Ред.

    ,

    2005

    , т.

    204

    (стр.

    116

    127

    )

    Маттингли

    RR

    ,

    Felczak

    A

    ,

    Chen

    CC

    ,

    McCabe

    , MJ

    , MJ

    Низкие концентрации неорганической ртути подавляют активацию Ras во время передачи сигнала, опосредованного Т-клеточными рецепторами.

    ,

    Toxicol. Прил. Pharmacol.

    ,

    2001а

    , т.

    176

    (стр.

    162

    168

    )

    Mattingly

    RR

    ,

    Milstein

    ML

    ,

    Mirkin

    BL

    .

    Подавление передачи сигналов MAP-киназы, стимулированной фактором роста, в клетках нейробластомы человека, устойчивых к цитотоксическим лекарствам.

    ,

    Cell.Сигнал.

    ,

    2001б

    , т.

    13

    (стр.

    499

    505

    )

    Mayes

    MD

    .

    Эпидемиологические исследования агентов окружающей среды и системных аутоиммунных заболеваний

    ,

    Environ. Перспектива здоровья.

    ,

    1999

    , т.

    107

    Доп. 5

    (стр.

    743

    748

    )

    McCabe

    MJ

    ,

    Santini

    RP

    ,

    Rosenspire

    AJ

    .

    Низкие и нетоксичные уровни ионной ртути мешают регуляции роста клеток в клеточной лимфоме WEHI-231

    ,

    Scand. J. Immunol.

    ,

    1999

    , т.

    50

    (стр.

    233

    241

    )

    Накашима

    I

    ,

    Pu

    MY

    ,

    Nishizaki

    A

    ,

    Rosila

    Катано

    Y

    ,

    Ohkusu

    K

    ,

    Rahman

    SMJ

    ,

    Isobe

    K

    ,

    Hamaguchi

    M

    и др.

    Редокс-механизм в качестве альтернативы связыванию лиганда для активации рецептора, доставляющей нерегулируемые клеточные сигналы

    ,

    J. Immunol.

    ,

    1994

    , т.

    152

    (стр.

    1064

    1071

    )

    Oehme

    FW

    .

    Британский антилюизит (BAL), классический антидот тяжелых металлов

    ,

    Clin. Toxicol.

    ,

    1972

    , т.

    5

    (стр.

    215

    222

    )

    Ozaki

    Y

    ,

    Sasagawa

    S

    ,

    Kuroda

    S

    .

    Динамические характеристики переходных реакций

    ,

    J. Biochem.

    ,

    2005

    , т.

    137

    (стр.

    659

    663

    )

    Perl

    A

    .

    Патогенез и спектр аутоиммунитета

    ,

    Methods Mol. Med.

    ,

    2004

    , т.

    102

    (стр.

    1

    8

    )

    Pollard

    KM

    ,

    Pearson

    DL

    ,

    Hultman

    P

    ,

    Deane

    TN

    h

    h,

    Коно

    DH

    .

    Ксенобиотики для ускорения идиопатического системного аутоиммунитета у склонных к волчанке мышей bxsb

    ,

    Environ. Перспектива здоровья.

    ,

    2001

    , т.

    109

    (стр.

    27

    33

    )

    Pollard

    KM

    ,

    Pearson

    DL

    ,

    Hultman

    P

    ,

    Hildebrandt

    B.

    Мыши с предрасположенностью к волчанке в качестве моделей для изучения индуцированного ксенобиотиками ускорения системного аутоиммунитета

    ,

    Environ.Перспектива здоровья.

    ,

    1999

    , т.

    107

    (стр.

    729

    735

    )

    Pouyssegur

    J

    ,

    Volmat

    V

    ,

    Lenormand

    P

    .

    Верность и пространственно-временной контроль передачи сигналов киназы MAP (ERK)

    ,

    Biochem. Pharmacol.

    ,

    2002

    , т.

    64

    (стр.

    755

    763

    )

    Reth

    M

    .

    Перекись водорода как вторичный посредник в активации лимфоцитов

    ,

    Нат.Иммунол.

    ,

    2002

    , т.

    3

    (стр.

    1129

    1134

    )

    Rowley

    B

    ,

    Monestier

    M

    .

    Механизмы аутоиммунитета, индуцированного тяжелыми металлами

    ,

    Мол. Иммунол.

    ,

    2005

    , т.

    42

    (стр.

    833

    838

    )

    Silbergeld

    EK

    ,

    Silva

    IA

    ,

    Nyland

    JF

    .

    Ртуть и аутоиммунитет: последствия для профессионального здоровья и окружающей среды

    ,

    Toxicol.Прил. Pharmacol.

    ,

    2005

    , т.

    207

    (стр.

    282

    292

    )

    Тан

    XX

    ,

    Тан

    C

    ,

    Castoldi

    AF

    ,

    Manzo

    LG0002 L

    ,

    ,

    Влияние неорганической и органической ртути на уровни внутриклеточного кальция в Т-лимфоцитах крыс

    ,

    J. Toxicol. Environ. Здравоохранение

    ,

    1993

    , т.

    38

    (стр.

    159

    170

    )

    Via

    CS

    ,

    Nguyen

    P

    ,

    Niculescu

    F

    ,

    Papadimitriou

    000 J

    J

    Зильбергельд

    EK

    .

    Воздействие неорганической ртути в низких дозах ускоряет заболеваемость и смертность от приобретенной мышиной волчанки

    ,

    Environ. Перспектива здоровья.

    ,

    2003

    , т.

    111

    (стр.

    1273

    1277

    )

    Ван

    C

    ,

    Халил

    M

    ,

    Ravetch

    J

    ,

    Diamond

    B

    .

    Репертуар наивных В-клеток предрасполагает к антиген-индуцированной системной красной волчанке

    ,

    J.Иммунол.

    ,

    2003

    , т.

    170

    (стр.

    4826

    4832

    )

    Wu

    Z

    ,

    Turner

    DR

    ,

    Oliveira

    DB

    .

    Экспрессия гена IL-4, регулируемая ртутью в тучных клетках крыс: роль оксидантного стресса в транскрипции IL-4

    ,

    Int. Иммунол.

    ,

    2001

    , т.

    13

    (стр.

    297

    304

    )

    Ziemba

    SE

    ,

    Mattingly

    RR

    ,

    McCabe

    MJ

    Jr,

    Rosenspire

    Неорганическая ртуть ингибирует активацию LAT при передаче сигнала, опосредованной Т-клеточными рецепторами.

    ,

    Toxicol. Sci.

    ,

    2006

    , т.

    89

    (стр.

    145

    153

    )

    © Автор 2007. Опубликовано Oxford University Press от имени Общества токсикологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

    .

    дорожных проектов | Мерфрисборо, штат Теннесси,

    Городские строительные проекты на 24–30 октября

    Работы по сносу старого здания Pinnacle (N Maple St at W College St)

    Не планируется закрытие переулков: с понедельника по пятницу: строительные работы на объекте продолжаются.Будут небольшие перебои на дорогах. Будет введен соответствующий контроль дорожного движения.

    Oakland Court Development (Lokey Ave and Academy St)

    Ожидаемое закрытие дорог: с понедельника по пятницу: в рамках строительства Oakland Court улица Academy St будет закрыта для движения между Palm Ct и Hembree St. закрыто на улице Академии Строительные работы на объекте продолжаются. Будут установлены соответствующие средства управления движением и объезды.

    Mercury Blvd Проект улучшения тротуаров (SE Broad St и Middle Tennessee Blvd)

    Ожидаемое закрытие переулков: с понедельника по пятницу с 9:30 до 15:00: строительные бригады будут устанавливать тротуары и улучшать светофор на южной стороне бульвара Меркурия.На бульваре Меркурий и на юго-восточной улице Брод-стрит будут перекрыты полосы движения и прекращено движение транспорта. Будут введены соответствующие меры контроля за движением.

    Ежегодные проекты мощения городских улиц

    Ожидаемые закрытия переулков: с понедельника по пятницу с 9:00 до 15:00: городской подрядчик будет выполнять строительные работы на следующих улицах:
    1. Saint Andrews Dr at Saint Bernard Way ( Строительные работы боксового моста)
    2. Highland Ave между Clark Blvd и E Main St (работы по установке петли светофора)
    3.Джо Б. Джексон Пкви (ремонт тротуаров)
    4. SE Broad St на бульваре доктора Мартина Лютера Кинга (фрезерные и асфальтированные работы)
    Ожидайте смены полосы движения и перебоев в движении. Будет введен соответствующий контроль дорожного движения.

    TDOT Resurfacing Projects
    (Источник: TDOT)

    RUTHERFORD COUNTY I-840
    Ремонт мостов на I-840 через Ист-Форк реки Стоунз, включая замену подходной плиты
    • Ночью, 20:00. — 05:00, будет попеременное перекрытие полос для установки окончательной разметки дорожного покрытия.

    RUTHERFORD COUNTY SR266
    Планировка, дренаж, строительство двух бетонных мостов с тройниковыми балками, сигнальные пути и мощение на SR 266 (Jefferson Pike) от SR 102 (LM 5.0) к востоку от I-840 (LM 9).
    • Ежедневно, с 9:00 до 15:00, вдоль SR 266 будут проводиться периодические работы по установке флагов для строительных работ.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.